L'applicazione delle colonne cromatografiche a scambio anionico forte SepaFlash nella purificazione di composti acidi

Risultati e discussione

Innanzitutto, la miscela campione è stata separata da una cartuccia flash a fase normale preconfezionata con silice normale.Come mostrato nella Figura 3, i due componenti del campione sono stati eluiti dalla cartuccia uno dopo l'altro.Successivamente, è stata utilizzata una cartuccia flash SAX per la purificazione del campione.Come mostrato nella Figura 4, il componente acido B è stato completamente trattenuto sulla cartuccia SAX.Il Componente A neutro è stato eluito gradualmente dalla cartuccia con l'eluizione della fase mobile.

Figura 3. Cromatogramma flash del campione su una normale cartuccia a fase normale.

Figura 4. Il cromatogramma flash del campione su una cartuccia SAX.
Confrontando la Figura 3 e la Figura 4, il Componente A ha una forma del picco incoerente sulle due diverse cartucce flash.Per confermare se il picco di eluizione corrisponde al componente, possiamo utilizzare la funzione di scansione dell'intera lunghezza d'onda integrata nel software di controllo della macchina SepaBean™.Aprire i dati sperimentali delle due separazioni, trascinare sulla linea dell'indicatore sull'asse del tempo (CV) nel cromatogramma fino al punto più alto e al secondo punto più alto del picco di eluizione corrispondente al Componente A, e lo spettro completo di lunghezze d'onda di questi due i punti verranno visualizzati automaticamente sotto il cromatogramma (come mostrato nella Figura 5 e nella Figura 6).Confrontando i dati dello spettro di lunghezza d'onda completo di queste due separazioni, il Componente A ha uno spettro di assorbimento coerente in due esperimenti.Poiché il Componente A ha una forma del picco incoerente su due diverse cartucce flash, si ipotizza che vi sia un'impurità specifica nel Componente A che ha una ritenzione diversa sulla cartuccia a fase normale e sulla cartuccia SAX.Pertanto, la sequenza di eluizione è diversa per il componente A e per le impurità su queste due cartucce flash, determinando una forma dei picchi incoerente sui cromatogrammi.

Figura 5. Lo spettro completo della lunghezza d'onda del componente A e l'impurezza separata dalla cartuccia a fase normale.

Figura 6. Lo spettro completo della lunghezza d'onda del Componente A e dell'impurezza separati dalla cartuccia SAX.

Se il prodotto target da raccogliere è il Componente A neutro, l'attività di purificazione può essere facilmente completata utilizzando direttamente la cartuccia SAX per l'eluizione dopo il caricamento del campione.D'altra parte, se il prodotto target da raccogliere è il Componente B acido, la modalità cattura-rilascio potrebbe essere adottata con solo un leggero aggiustamento nelle fasi sperimentali: quando il campione è stato caricato sulla cartuccia SAX e il Componente A neutro è stato completamente eluito con solventi organici in fase normale, passare la fase mobile ad una soluzione metanolo contenente acido acetico al 5%.Gli ioni acetato nella fase mobile competeranno con il Componente B per legarsi ai gruppi ionici amminici quaternari sulla fase stazionaria della cartuccia SAX, eluendo così il Componente B dalla cartuccia per ottenere il prodotto target.Il cromatogramma del campione separato in modalità scambio ionico è stato mostrato nella Figura 7.

Figura 7. Il cromatogramma flash del Componente B eluito in modalità scambio ionico su una cartuccia SAX.

In conclusione, il campione acido o neutro potrebbe essere rapidamente purificato mediante la cartuccia SAX combinata con la cartuccia in fase normale utilizzando diverse strategie di purificazione.Inoltre, con l'aiuto della funzione di scansione dell'intera lunghezza d'onda integrata nel software di controllo della macchina SepaBean™, lo spettro di assorbimento caratteristico delle frazioni eluite può essere facilmente confrontato e confermato, aiutando i ricercatori a determinare rapidamente la composizione e la purezza delle frazioni eluite e migliorando così efficienza lavorativa.