L'applicazione delle colonne C18AQ nella purificazione di peptidi polari forti

Rui Huang, Bo Xu
Centro di ricerca e sviluppo applicativo

introduzione
Un peptide è un composto composto da amminoacidi, ciascuno dei quali ha proprietà fisiche e chimiche uniche a causa dei diversi tipi e ordine dei residui amminoacidici che costituiscono la sua sequenza.Con lo sviluppo della sintesi chimica in fase solida, la sintesi chimica di vari peptidi attivi ha fatto grandi progressi.Tuttavia, a causa della complessa composizione del peptide ottenuto mediante sintesi in fase solida, il prodotto finale deve essere purificato mediante metodi di separazione affidabili.I metodi di purificazione comunemente usati per i peptidi includono la cromatografia a scambio ionico (IEC) e la cromatografia liquida ad alte prestazioni in fase inversa (RP-HPLC), che presentano gli svantaggi di una bassa capacità di caricamento del campione, un costo elevato dei mezzi di separazione, apparecchiature di separazione complicate e costose, ecc. Per la purificazione rapida di peptidi di piccole molecole (MW < 1 kDa), Santai Technologies ha pubblicato in precedenza un caso applicativo di successo in cui una cartuccia SepaFlash RP C18 è stata utilizzata per la purificazione rapida di timopentina (TP-5) e è stato ottenuto il prodotto target che soddisfa i requisiti.

Figura 1. 20 amminoacidi comuni (riprodotti da www.bachem.com).

Esistono 20 tipi di aminoacidi comuni nella composizione dei peptidi.Questi amminoacidi possono essere suddivisi nei seguenti gruppi in base alla loro polarità e alle proprietà acido-base: non polari (idrofobici), polari (privi di carica), acidi o basici (come mostrato nella Figura 1).In una sequenza peptidica, se gli amminoacidi che costituiscono la sequenza sono per lo più polari (come contrassegnati in colore rosa nella Figura 1), come cisteina, glutammina, asparagina, serina, treonina, tirosina, ecc., allora questo peptide potrebbe avere un forte polarità ed essere altamente solubile in acqua.Durante la procedura di purificazione di questi campioni di peptidi polari forti mediante cromatografia in fase inversa, si verificherà un fenomeno chiamato collasso della fase idrofobica (fare riferimento a una nota applicativa precedentemente pubblicata da Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns and Their Applications).Rispetto alle colonne C18 normali, le colonne C18AQ migliorate sono più adatte per la purificazione di campioni fortemente polari o idrofili.In questo post, un forte peptide polare è stato utilizzato come campione e purificato mediante una colonna C18AQ.Di conseguenza, è stato ottenuto il prodotto target che soddisfa i requisiti e che potrebbe essere utilizzato nella successiva ricerca e sviluppo.