Rui Huang, Bo Xu
Centro di ricerca e sviluppo dell'applicazione
Introduzione
Un peptide è un composto composto da aminoacidi, ognuno dei quali ha proprietà fisiche e chimiche uniche a causa dei diversi tipi e ordine dei residui di aminoacidi che costituiscono la sua sequenza. Con lo sviluppo della sintesi chimica in fase solida, la sintesi chimica di vari peptidi attivi ha fatto grandi progressi. Tuttavia, a causa della composizione complicata del peptide ottenuto mediante sintesi di fase solida, il prodotto finale dovrebbe essere purificato mediante metodi di separazione affidabili. I metodi di purificazione comunemente usati per i peptidi includono la cromatografia a scambio ionico (IEC) e la cromatografia liquida ad alte prestazioni in fase inversa (RP-HPLC), che hanno gli svantaggi di bassa capacità di carico del campione, un costo di separazione complicata e costosa, ecc. in cui è stata utilizzata una cartuccia RP C18 sepaflash per la rapida purificazione della timopentina (TP-5) e il prodotto target che soddisfa i requisiti.
Figura 1. 20 aminoacidi comuni (riprodotti da www.bachem.com).
Esistono 20 tipi di aminoacidi comuni nella composizione dei peptidi. Questi aminoacidi possono essere divisi nei seguenti gruppi in base alla loro proprietà di polarità e acido-base: non polare (idrofobo), polare (non caricato), acido o di base (come mostrato nella Figura 1). In una sequenza peptidica, se gli aminoacidi che costituiscono la sequenza sono per lo più polari (come marcati di colore rosa in Figura 1), come cisteina, glutammina, asparagina, serina, treonina, tirosina, ecc. Quindi questo peptide potrebbe avere una forte polarità e essere altamente solubile in acqua. Durante la procedura di purificazione per questi forti campioni di peptidi polari mediante cromatografia in fase invertita, si verificherà un fenomeno chiamato collasso di fase idrofobica (fare riferimento a una nota di applicazione precedentemente pubblicata da Santai Technologies: collasso della fase idrofobica, Aq ha invertito le colonne e le loro applicazioni). Rispetto alle normali colonne C18, le colonne C18AQ migliorate sono più adatte per la purificazione di campioni polari o idrofili forti. In questo post, un forte peptide polare è stato utilizzato come campione e purificato da una colonna C18AQ. Di conseguenza, la soddisfazione del prodotto target è stata ottenuta e potrebbe essere utilizzata nella seguente ricerca e sviluppo.
| Strumento | Sepabean™macchina 2 | |||
| Cartucce | 12 g Sepaflash C18 RP Flash cartuccia (silice sferica, 20-45 μm, 100 Å, Nunber Ordina ： SW-5222-012-SP) | 12 g SEPAFLASH C18AQ RP Flash cartuccia (silice sferica, 20-45 μm, 100 Å, numero di ordine ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Lunghezza d'onda | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Fase mobile | Solvente A: acqua Solvente B: acetonitrile | |||
| Portata | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Caricamento del campione | 30 mg | |||
| Pendenza | Tempo (CV) | Solvente b (%) | Tempo (min) | Solvente b (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Risultati e discussione
Per confrontare le prestazioni di purificazione per il campione di peptide polare tra la normale colonna C18 e la colonna C18AQ, abbiamo utilizzato una normale colonna C18 per la purificazione flash del campione come inizio. Come mostrato nella Figura 2, a causa del collasso della fase idrofobica delle catene C18 causate da un alto rapporto acquoso, il campione è stato appena trattenuto sulla normale cartuccia C18 ed è stato eluito direttamente dalla fase mobile. Di conseguenza, il campione non è stato effettivamente separato e purificato.
Figura 2. Il cromatogramma flash del campione su una cartuccia C18 normale.
Successivamente, abbiamo usato una colonna C18AQ per la purificazione flash del campione. Come mostrato nella Figura 3, il peptide è stato effettivamente trattenuto sulla colonna e quindi eluito. Il prodotto target è stato separato dalle impurità nel campione grezzo e raccolto. Dopo la liofilizzazione e quindi analizzato da HPLC, il prodotto purificato ha una purezza del 98,2% e potrebbe essere ulteriormente utilizzato per la ricerca e lo sviluppo della prossima fase.
Figura 3. Il cromatogramma flash del campione su una cartuccia C18AQ.
In conclusione, la cartuccia flash sepaflash C18AQ RP combinata con il sistema di cromatografia flash sepabean™La macchina potrebbe offrire una soluzione rapida ed efficace per la purificazione di forti campioni polari o idrofili.
Esistono una serie di cartucce flash RP C18AQ RP Sepaflash con diverse specifiche dalla tecnologia Santai (come mostrato nella Tabella 2).
| Numero articolo | Dimensione della colonna | Portata (ml/min) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabella 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Flash. Materiali di imballaggio: silice sferica ad alta efficienza C18 (AQ), 20-45 μm, 100 Å.
Per ulteriori informazioni sulle specifiche dettagliate della macchina Sepabean ™ o sulle informazioni di ordinazione sulle cartucce flash della serie Sepaflash, visitare il nostro sito Web.
Tempo post: ottobre-12-2018