Notkun C18AQ súlna við hreinsun sterkra skautapeptíða

Rui Huang, Bo Xu
Umsókn R&D Center

Kynning
Peptíð er efnasamband sem samanstendur af amínósýrum, sem hver um sig hefur einstaka eðlis- og efnafræðilega eiginleika vegna mismunandi gerða og röð amínósýruleifa sem mynda röð þess.Með þróun efnafræðilegrar efnamyndunar í föstu fasa hefur efnafræðileg myndun ýmissa virkra peptíða tekið miklum framförum.Hins vegar, vegna flókinnar samsetningar peptíðsins sem fæst með nýmyndun í föstu fasa, ætti lokaafurðin að vera hreinsuð með áreiðanlegum aðskilnaðaraðferðum.Algengar hreinsunaraðferðir fyrir peptíð eru meðal annars jónaskiptaskiljun (IEC) og öfugfasa háafkasta vökvaskiljun (RP-HPLC), sem hafa ókostina af lítilli hleðslugetu sýna, hár kostnaður við aðskilnaðarmiðla, flókinn og dýran aðskilnaðarbúnað, o.fl. Fyrir hraðhreinsun lítilla sameinda peptíða (MW < 1 kDa), var áður gefið út vel heppnað umsóknartilfelli af Santai Technologies, þar sem SepaFlash RP C18 skothylki var notað til að hreinsa týmópentín (TP-5) hratt og markvöru sem uppfyllir kröfurnar var fengin.

Mynd 1. 20 algengar amínósýrur (endurgerðar af www.bachem.com).

Það eru 20 tegundir af amínósýrum sem eru algengar í samsetningu peptíða.Þessum amínósýrum er hægt að skipta í eftirfarandi hópa eftir skautun þeirra og sýru-basa eiginleika: óskautaðar (vatnsfælin), skautaðar (óhlaðnar), súrar eða basískar (eins og sýnt er á mynd 1).Í peptíðröð, ef amínósýrurnar sem mynda röðina eru að mestu skautaðar (eins og merktar með bleikum lit á mynd 1), eins og sýstein, glútamín, asparagín, serín, þreónín, týrósín, o.s.frv., þá gæti þetta peptíð haft sterka pólun og vera mjög leysanlegt í vatni.Meðan á hreinsunarferlinu fyrir þessi sterku skautuðu peptíðsýni með öfugfasaskiljun stendur, mun fyrirbæri sem kallast vatnsfælin fasahrun eiga sér stað (sjá áður birt umsóknarskýrslu frá Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns and Their Applications).Í samanburði við venjulegar C18 súlurnar eru endurbættu C18AQ súlurnar hentugar til að hreinsa sterkar skautaðar eða vatnssæknar sýni.Í þessari færslu var sterkt skautað peptíð notað sem sýni og hreinsað með C18AQ súlu.Fyrir vikið fékkst markvaran sem uppfyllti kröfurnar og gæti verið notuð í eftirfarandi rannsóknum og þróun.