Hongcheng Wang, Bo Xu
Umsókn R&D Center
Kynning
Samkvæmt hlutfallslegri pólun kyrrstöðufasa og hreyfanlegra fasa er hægt að skipta vökvaskiljun í venjuleg fasaskiljun (NPC) og öfugfasaskiljun (RPC).Fyrir RPC er pólun farsímafasans sterkari en kyrrstöðufasans.RPC hefur orðið það mest notaða í vökvaskiljunaraðferðum vegna mikillar skilvirkni, góðrar upplausnar og skýrrar varðveislubúnaðar.Þess vegna er RPC hentugur fyrir aðskilnað og hreinsun ýmissa skautaðra eða óskautaðra efnasambanda, þar á meðal alkalóíða, kolvetna, fitusýrur, stera, kjarnsýrur, amínósýrur, peptíða, próteina o.s.frv. kísilgel fylkið sem er tengt ýmsum virkum hópum, þar á meðal C18, C8, C4, fenýl, sýanó, amínó o.s.frv. Meðal þessara tengdu virku hópa er sá sem er mest notaður C18.Áætlað er að meira en 80% af RPC noti nú C18 bundinn fasa.Þess vegna er C18 litskiljunarsúla orðin alhliða súla sem þarf að hafa fyrir hverja rannsóknarstofu.
Þrátt fyrir að hægt sé að nota C18 súlu í mjög breitt svið notkunar, fyrir sum sýni sem eru mjög skautuð eða mjög vatnssækin, geta venjulegar C18 súlur átt í vandræðum þegar þær eru notaðar til að hreinsa slík sýni.Í RPC er hægt að panta almennt notaða leysiefni í samræmi við pólun þeirra: vatn < metanól < asetónítríl < etanól < tetrahýdrófúran < ísóprópanól.Til að tryggja góða varðveislu á súlunni fyrir þessi sýni (sterk skautuð eða mjög vatnssækin) er nauðsynlegt að nota hátt hlutfall af vatnskenndu kerfi sem hreyfanlegur fasi.Hins vegar, þegar hreint vatnskerfi (þar með talið hreint vatn eða hrein saltlausn) er notað sem hreyfanlegur fasi, hefur langa kolefniskeðjan á kyrrstæðum fasa C18 súlunnar tilhneigingu til að forðast vatnið og blandast hvert við annað, sem leiðir til tafarlausrar lækkunar á varðveislugetu súlunnar eða jafnvel engin varðveisla.Þetta fyrirbæri er kallað „vatnsfælin fasahrun“ (eins og sýnt er í vinstri hluta mynd 1).Þó að þessi staða sé afturkræf þegar súlan er þvegin með lífrænum leysum eins og metanóli eða asetónítríl, getur það samt valdið skemmdum á súlunni.Þess vegna er nauðsynlegt að koma í veg fyrir að þetta ástand gerist.
Mynd 1. Skýringarmynd af tengdum fasum á yfirborði kísilhlaups í venjulegum C18 dálki (vinstri) og C18AQ dálki (hægri).
Til að takast á við ofangreind vandamál hafa framleiðendur litskiljunarpökkunarefna gert tæknilegar endurbætur.Ein af þessum endurbótum er að gera nokkrar breytingar á yfirborði kísilfylkisins, svo sem innleiðing vatnssækinna sýanóhópa (eins og sýnt er hægra megin á mynd 1), til að gera yfirborð kísilhlaupsins vatnssæknara.Þannig væri hægt að lengja C18 keðjurnar á kísilyfirborðinu að fullu við mjög vatnskenndar aðstæður og forðast vatnsfælin fasahrun.Þessar breyttu C18 súlur eru kallaðar vatnskenndar C18 súlur, nefnilega C18AQ súlur, sem eru hannaðar fyrir mjög vatnskenndar skolunaraðstæður og þola 100% vatnskerfi.C18AQ súlur hafa verið mikið notaðar við aðskilnað og hreinsun sterkra skautaðra efnasambanda, þar á meðal lífrænna sýrur, peptíð, núkleósíð og vatnsleysanleg vítamín.
Afsöltun er ein af dæmigerðu notkun C18AQ súlna í leifturhreinsun fyrir sýni, sem fjarlægir saltið eða jafnahlutina í sýnisleysinu til að auðvelda notkun sýnisins í síðari rannsóknum.Í þessari færslu var Brilliant Blue FCF með sterkri pólun notað sem sýni og hreinsað á C18AQ súlunni.Sýnisleysinu var skipt út fyrir lífrænan leysi úr stuðpúðalausninni og auðveldaði þannig eftirfarandi snúningsuppgufun ásamt því að spara leysiefni og notkunartíma.Ennfremur var hreinleiki sýnisins bættur með því að fjarlægja nokkur óhreinindi í sýninu.
Tilraunahluti
Mynd 2. Efnafræðileg uppbygging sýnisins.
Brilliant Blue FCF var notað sem sýnishorn í þessari færslu.Hreinleiki hrásýnisins var 86% og efnafræðileg uppbygging sýnisins var sýnd á mynd 2. Til að undirbúa sýnislausnina voru 300 mg duftkennd hráefni af Brilliant Blue FCF leyst upp í 1 M NaH2PO4 jafnalausn og hrist vel til að verða alveg skýr lausn.Sýnislausninni var síðan sprautað í leiftursúluna með inndælingartæki.Tilraunauppsetning flasshreinsunar er skráð í töflu 1.
| Hljóðfæri | SepaBean™ vél2 | |||
| Skothylki | 12 g SepaFlash C18 RP flasshylki (kúlulaga kísil, 20 - 45 μm, 100 Å, pöntunarnúmer: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP flasshylki (kúlulaga kísil, 20 - 45 μm, 100 Å, pöntunarnúmer:SW-5222-012-SP(AQ)） | ||
| Bylgjulengd | 254 nm | |||
| Farsímafasi | Leysir A: Vatn Leysir B: Metanól | |||
| Rennslishraði | 30 ml/mín | |||
| Hleðsla sýnishorns | 300 mg (Brilliant Blue FCF með hreinleika 86%) | |||
| Halli | Tími (CV) | Leysir B (%) | Tími (CV) | Leysir B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Niðurstöður og umræður
SepaFlash C18AQ RP flasshylki var notað við afsöltun og hreinsun sýna.Notaður var þrepahalli þar sem hreint vatn var notað sem hreyfanlegur fasi í upphafi skolunar og keyrður í 10 súlurúmmál (CV).Eins og sýnt er á mynd 3, þegar hreint vatn var notað sem hreyfanlegur fasi, var sýnið alveg haldið á flasshylkinu.Næst var metanólið í hreyfanlegum fasa beint aukið í 100% og hallanum var haldið í 7,5 CV.Sýnið var skolað út úr 11,5 til 13,5 CV.Í söfnuðu brotunum var sýnislausninni skipt út úr NaH2PO4 jafnalausn í metanól.Í samanburði við mjög vatnskennda lausn var mun auðveldara að fjarlægja metanól með snúningsuppgufun í næsta skrefi, sem auðveldar eftirfarandi rannsóknir.
Mynd 3. Flassskiljun sýnisins á C18AQ skothylki.
Til að bera saman varðveisluhegðun C18AQ skothylkis og venjulegs C18 skothylkis fyrir sýni með sterka pólun, var samhliða samanburðarpróf gert.Notað var SepaFlash C18 RP flasshylki og flassskiljun fyrir sýnið var sýnd á mynd 4. Fyrir venjuleg C18 hylki er hæsta þolanleg vatnsfasahlutfall um 90%.Þess vegna var upphafshallinn stilltur á 10% metanól í 90% vatni.Eins og sýnt er á mynd 4, vegna vatnsfælna fasahruns C18 keðjanna af völdum hás vatnshlutfalls, var sýnið varla haldið á venjulegu C18 skothylkinu og var beint skolað út af farsímafasanum.Þar af leiðandi er ekki hægt að ljúka aðgerðinni við afsöltun eða hreinsun sýna.
Mynd 4. Flassskiljun sýnisins á venjulegu C18 skothylki.
Í samanburði við línulegan halla hefur notkun þrepahalla eftirfarandi kosti:
1. Leysinotkun og keyrslutími fyrir hreinsun sýna minnkar.
2. Markafurðin skolast út í skörpum toppi, sem dregur úr rúmmáli safnaðra brota og auðveldar þannig eftirfarandi snúningsuppgufun auk þess að spara tíma.
3. Varan sem safnað er er í metanóli sem auðvelt er að gufa upp, þannig styttist þurrktíminn.
Að lokum, til að hreinsa sýnið sem er mjög skautað eða mjög vatnssækið, gætu SepaFlash C18AQ RP flasshylki sem sameinast undirbúningsflassskiljunarkerfinu SepaBean™ Machine boðið upp á hraðvirka og skilvirka lausn.
Um SepaFlash Bonded Series C18 RP flasshylkin
Það eru til röð af SepaFlash C18AQ RP flasshylkjum með mismunandi forskriftir frá Santai Technology (eins og sýnt er í töflu 2).
| Vörunúmer | Stærð súlu | Rennslishraði (ml/mín.) | Hámarksþrýstingur (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17,2 |
Tafla 2. SepaFlash C18AQ RP flasshylki.
Pökkunarefni: Afkastamikill kúlulaga C18(AQ)-tengt kísil, 20 - 45 μm, 100 Å.
rökfræði (eins og sýnt er í töflu 2).
Birtingartími: 27. ágúst 2018