Hongcheng Wang, Bo XU
R & D miðstöð umsóknar
INNGANGUR
Samkvæmt hlutfallslegri skautun kyrrstæðra áfanga og farsíma er hægt að skipta fljótandi litskiljun í venjulega fasa litskiljun (NPC) og snúa fasa litskiljun (RPC). Fyrir RPC er pólun farsímafasans sterkari en kyrrstæða áfanga. RPC hefur orðið mest notaður einn í fljótandi litskiljun aðskilnaðarstillingar vegna mikillar skilvirkni, góðrar upplausnar og skýrs varðveislu. Therefore RPC is suitable for the separation and purification of various polar or non-polar compounds, including alkaloids, carbohydrates, fatty acids, steroids, nucleic acids, amino acids, peptides, proteins, etc. In RPC, the most commonly used stationary phase is the silica gel matrix which is bonded with various functional groups, including C18, C8, C4, Fenýl, sýanó, amínó o.fl. Meðal þessara tengdu virku hópa er mest notaður C18. Áætlað er að meira en 80% af RPC noti nú C18 tengt áfanga. Þess vegna hefur C18 litskiljunarsúla orðið að verða að hafa alhliða dálk fyrir hverja rannsóknarstofu.
Þrátt fyrir að hægt sé að nota C18 súluna í mjög breitt úrval af forritum, en fyrir sum sýni sem er mjög skaut eða mjög vatnssæknar, geta venjulegir C18 dálkar átt í vandræðum þegar þeir eru notaðir til að hreinsa slík sýni. Í RPC er hægt að panta algengar skolunarlausnir í samræmi við pólun þeirra: vatn <metanól <asetónítríl <etanól <tetrahýdrófúran <ísóprópanól. Til að tryggja góða varðveislu á súlunni fyrir þessi sýni (sterkur skautaður eða mjög vatnssækinn) er hátt hlutfall vatnskerfisins nauðsynlegt til að nota sem farsíma. Hins vegar, þegar það er notað hreint vatnskerfi (þ.mt hreint vatn eða hrein saltlausn) sem hreyfanlegur fasi, hefur langa kolefniskeðjan á kyrrstæðum áfanga C18 súlu tilhneigingu til að forðast vatnið og blanda saman hvort öðru, sem leiðir til tafarlausrar lækkunar á varðveislu getu súlunnar eða jafnvel engin varðveisla. Þetta fyrirbæri er kallað „vatnsfælni fasa hrun“ (eins og sést á vinstri hluta mynd 1). Þó að þetta ástand sé afturkræft þegar súlan er þvegin með lífrænum leysum eins og metanóli eða asetónítríl, getur það samt valdið skemmdum á súlunni. Þess vegna er nauðsynlegt að koma í veg fyrir að þetta ástand gerist.
Mynd 1.
Til að takast á við ofangreind vandamál hafa framleiðendur litskiljunar pökkunarefnis gert tæknilegar endurbætur. Ein af þessum endurbótum er að gera nokkrar breytingar á yfirborði kísil fylkisins, svo sem innleiðingu vatnssækinna sýanóhópa (eins og sýnt er á hægri hluta mynd 1), til að gera yfirborð kísilgelsins meira vatnssækið. Þannig var hægt að lengja C18 keðjurnar á kísilyfirborði að fullu við mjög vatnskennd og hægt var að forðast vatnsfælna fasa hrunið. Þessir breyttu C18 dálkar eru kallaðir vatnskenndir C18 dálkar, nefnilega C18AQ dálkar, sem eru hannaðir fyrir mjög vatnskenndar skilyrði og þolir 100% vatnskerfi. C18AQ súlur hafa verið notaðir víða við aðskilnað og hreinsun sterkra skautasambanda, þar með talið lífrænar sýrur, peptíð, núkleósíð og vatnsleysanleg vítamín.
Afsölun er eitt af dæmigerðum forritum C18AQ dálkanna í flasshreinsun fyrir sýni, sem fjarlægir salt- eða stuðpúðaíhluta í sýnishorninu til að auðvelda beitingu sýnisins í síðari rannsóknum. Í þessari færslu var ljómandi blái FCF með sterka pólun notaður sem sýnishornið og hreinsað á C18AQ dálkinum. Skipt var um sýni leysisins með lífrænum leysum úr biðminni og auðveldaði þannig eftirfarandi snúnings uppgufun auk þess að spara leysir og rekstrartíma. Ennfremur var hreinleiki sýnisins bætt með því að fjarlægja nokkur óhreinindi í úrtakinu.
Tilraunahluti
Mynd 2. Efnafræðileg uppbygging sýnisins.
The Brilliant Blue FCF var notað sem sýnið í þessari færslu. Hreinleiki hráasýnisins var 86% og efnafræðileg uppbygging sýnisins var sýnd á mynd 2. til að undirbúa sýnislausnina var 300 mg duftkennd hráu fast efni af ljómandi bláum FCF leyst upp í 1 M NAH2PO4 biðminni og hristi vel til að verða alveg skýr lausn. Sýnilausninni var síðan sprautað í leiftursúluna með inndælingartæki. Tilraunauppsetning flasshreinsunarinnar er skráð í töflu 1.
| Hljóðfæri | SEPABEAN ™ vél2 | |||
| Skothylki | 12 g Sepaflash C18 RP flasshylki (kúlulaga kísil, 20-45 μm, 100 Å, pöntunarnúmer: SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP flasshylki (kúlulaga kísil, 20-45 μm, 100 Å, pöntunarnúmer ： SW-5222-012-SP (AQ)） | ||
| Bylgjulengd | 254 nm | |||
| Farsími | Leysir a ： Vatn Leysir B ： Metanól | |||
| Rennslishraði | 30 ml/mín | |||
| Sýnishorn hleðslu | 300 mg (ljómandi blár FCF með hreinleika 86%) | |||
| Halli | Tími (CV) | Leysir B (%) | Tími (CV) | Leysir B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Niðurstöður og umræða
Sepaflash C18AQ RP flasshylki var notaður til að sýna og hreinsa sýnishorn. Skref halli var nýtt þar sem hreint vatn var notað sem farsíma fasinn við upphaf skolunar og keyrt fyrir 10 dálkabindi (CV). Eins og sýnt er á mynd 3, þegar það var notað hreint vatn sem farsíma, var sýninu fullkomlega haldið á leifturhylkinu. Næst var metanólinu í farsíma stiginu beint aukið í 100% og halli var haldið fyrir 7,5 CV. Úrtakið var skolað úr 11,5 til 13,5 cv. Í safnunum sem safnað var var skiptalausninni skipt út frá NAH2PO4 jafnalausn í metanóli. Í samanburði við mjög vatnslausn var metanól mun auðveldara að fjarlægja með snúnings uppgufun í síðari skrefi, sem auðveldar eftirfarandi rannsóknir.
Mynd 3. Flassskiljun sýnisins á C18AQ rörlykju.
Til að bera saman varðveisluhegðun C18AQ skothylkis og venjulegs C18 skothylki fyrir sýni af sterkri pólun var samhliða samanburðarpróf framkvæmt. Sepaflash C18 RP flasshylki var notað og flassskiljunin fyrir sýnið var sýnt á mynd 4.. Fyrir reglulega C18 skothylki er hæsta þolaða vatnsfasa hlutfall um 90%. Þess vegna var byrjunarstigið stillt á 10% metanól í 90% vatni. Eins og sýnt er á mynd 4, vegna vatnsfælna fasa hruns C18 keðjanna af völdum hátt vatnshlutfalls, var sýninu varla haldið á venjulegu C18 rörlykjunni og var beint skolað út af farsíma. Fyrir vikið er ekki hægt að klára notkun sýnishorns eða hreinsunar.
Mynd 4. Flassskiljun sýnisins á venjulegu C18 rörlykju.
Samanburður við línulegan halla hefur notkun stigastigs eftirfarandi kosti:
1.. Notkun leysiefnis og keyrslutími fyrir hreinsun sýnisins minnkar.
2.. Markafurðirnar fléttar í skörpum hámarki, sem dregur úr rúmmáli safnaðra hluta og auðveldar þannig eftirfarandi uppgufun snúnings og sparnaðartíma.
3.. Safnaða afurðin er í metanóli sem auðvelt er að gufa upp og þannig er þurrkunartími minnkaður.
Að lokum, fyrir hreinsun sýnisins sem er sterkt skautað eða mjög vatnssækið, Sepaflash C18AQ RP flasshylki sem sameinast með undirbúningsflassaskiljunarkerfi SEPABEAN ™ vél gæti boðið hratt og skilvirka lausn.
Um sepaflash tengda seríuna C18 RP Flash skothylki
Það eru röð af sepaflash C18AQ RP glampi með mismunandi forskriftum frá Santai tækni (eins og sýnt er í töflu 2).
| Hlutanúmer | Súlustærð | Rennslishraði (ml/mín.) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tafla 2. Sepaflash C18AQ RP Flash skothylki.
Pökkunarefni: Kísilgildi með hágæða kúlulaga C18 (aq) -bundna kísil, 20-45 μm, 100 Å.
logy (eins og sýnt er í töflu 2).
Pósttími: Ágúst-27-2018