
Mingzu Yang, Bo Xu
Pusat R&D Aplikasi
Perkenalan
Antibiotik adalah kelas metabolit sekunder yang diproduksi oleh mikroorganisme (termasuk bakteri, jamur, actinomycetes) atau senyawa serupa yang disintesis secara kimia atau semi-disintesis. Antibiotik dapat menghambat pertumbuhan dan kelangsungan hidup mikroorganisme lainnya. Antibiotik pertama yang ditemukan oleh manusia, penisilin, ditemukan oleh ahli mikrobiologi Inggris Alexander Fleming pada tahun 1928. Dia mengamati bahwa bakteri di sekitar cetakan tidak dapat tumbuh di piringan kultur Staphylococcus yang terkontaminasi dengan jamur. Dia mendalilkan bahwa cetakan harus mengeluarkan zat antibakteri, yang dia beri nama penisilin pada tahun 1928. Namun, bahan -bahan aktif tidak dimurnikan pada waktu itu. Pada tahun 1939, Ernst Chain dan Howard Florey dari Oxford University memutuskan untuk mengembangkan obat yang dapat mengobati infeksi bakteri. Setelah menghubungi Fleming untuk mendapatkan strain, mereka berhasil mengekstraksi dan memurnikan penisilin dari strain. Untuk keberhasilan perkembangan penisilin sebagai obat terapeutik, Fleming, Chain dan Florey berbagi Hadiah Nobel 1945 dalam kedokteran.
Antibiotik digunakan sebagai agen antibakteri untuk mengobati atau mencegah infeksi bakteri. Ada beberapa kategori utama antibiotik yang digunakan sebagai agen antibakteri: antibiotik β-laktam (termasuk penisilin, sefalosporin, dll.), Antibiotik aminoglikosida, antibiotik makrolida, antibiotik, dan antibiotik, dan antibiotik, dan antibiotik, antibiotik, antibiotik, dan antibiotik, antibiotik, antibiotik, antibiotik, antibiotik, antibiotik, antibiotik, dan antibiotiklin, antibiotiklin, antibiotik, dan sintesis total. Antibiotik yang dihasilkan oleh fermentasi biologis perlu dimodifikasi secara struktural dengan metode kimia karena stabilitas kimia, efek samping toksik, spektrum antibakteri dan masalah lainnya. Setelah dimodifikasi secara kimia, antibiotik dapat mencapai peningkatan stabilitas, mengurangi efek samping toksik, spektrum antibakteri yang diperluas, mengurangi resistensi obat, peningkatan bioavailabilitas, dan dengan demikian meningkatkan efek pengobatan obat. Oleh karena itu, antibiotik semi-sintetis saat ini merupakan arah yang paling populer dalam pengembangan obat antibiotik.
Dalam pengembangan antibiotik semi-sintetis, antibiotik memiliki sifat kemurnian rendah, banyak produk sampingan dan komponen kompleks karena mereka berasal dari produk fermentasi mikroba. Dalam hal ini, analisis dan kontrol kotoran pada antibiotik semi-sintetik sangat penting. Untuk mengidentifikasi dan mengkarakterisasi kotoran secara efektif, perlu untuk mendapatkan jumlah kotoran yang cukup dari produk sintetis antibiotik semi-sintetis. Di antara teknik persiapan pengotor yang umum digunakan, kromatografi flash adalah metode yang hemat biaya dengan keunggulan seperti jumlah pemuatan sampel yang besar, biaya rendah, penghematan waktu, dll. Kromatografi flash semakin banyak digunakan oleh para peneliti sintetis.
Dalam posting ini, pengotor utama antibiotik aminoglikosida semi-sintetis digunakan sebagai sampel dan dimurnikan oleh kartrid Sepaflash C18AQ yang dikombinasikan dengan sistem kromatografi flash Sepabean ™ Machine. Produk target yang memenuhi persyaratan berhasil diperoleh, menunjukkan solusi yang sangat efisien untuk pemurnian senyawa ini.
Bagian Eksperimental
Sampel disediakan oleh perusahaan farmasi lokal. Sampel adalah sejenis karbohidrat polycyclic amino dan struktur molekulnya mirip dengan antibiotik aminoglikosida. Polaritas sampel agak tinggi, membuatnya sangat larut dalam air. Diagram skematik dari struktur molekul sampel ditunjukkan pada Gambar 1. Kemurnian sampel mentah sekitar 88% seperti yang dianalisis oleh HPLC. Untuk pemurnian senyawa -senyawa polaritas tinggi ini, sampel hampir tidak akan dipertahankan pada kolom C18 biasa sesuai dengan pengalaman kami sebelumnya. Oleh karena itu, kolom C18AQ digunakan untuk pemurnian sampel.
Gambar 1. Diagram skematik dari struktur molekul sampel.
Untuk menyiapkan larutan sampel, sampel mentah 50 mg dilarutkan dalam 5 mL air murni dan kemudian ultrasonicated untuk membuatnya menjadi solusi yang sepenuhnya jelas. Solusi sampel kemudian disuntikkan ke kolom flash oleh injektor. Pengaturan eksperimental pemurnian flash tercantum dalam Tabel 1.
Instrumen | Mesin Sepabean ™ 2 | |
Kartrid | 12 g Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridge (Silika Bulat, 20-45μm, 100 Å, Nomor Pesanan : SW-5222-012-SP (AQ)) | |
Panjang gelombang | 204 nm, 220 nm | |
Fase gerak | Solvent A: Air Solvent B: Asetonitril | |
Laju aliran | 15 ml/mnt | |
Pemuatan sampel | 50 mg | |
Gradien | Waktu (min) | Pelarut b (%) |
0 | 0 | |
19.0 | 8 | |
47.0 | 80 | |
52.0 | 80 |
Hasil dan Diskusi
Kromatogram flash sampel pada kartrid C18AQ ditunjukkan pada Gambar 2. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2, sampel yang sangat polar secara efektif dipertahankan pada kartrid C18AQ. Setelah lyopholization untuk fraksi yang dikumpulkan, produk target memiliki kemurnian 96,2% (seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3) dengan analisis HPLC. Hasil menunjukkan bahwa produk yang dimurnikan dapat digunakan lebih lanjut dalam langkah selanjutnya penelitian dan pengembangan.
Gambar 2. Kromatogram flash sampel pada kartrid C18AQ.
Gambar 3. Kromatogram HPLC dari produk target.
Sebagai kesimpulan, sepaflash C18AQ RP flash cartridge dikombinasikan dengan sistem kromatografi flash, Sepabean ™, dapat menawarkan solusi yang cepat dan efektif untuk pemurnian sampel yang sangat polar.
Tentang Kartrid Flash RP Sepaflash C18AQ
Ada serangkaian kartrid flash RP Sepaflash C18AQ dengan spesifikasi berbeda dari teknologi Santai (seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2).
Nomor item | Ukuran kolom | Laju aliran (ml/mnt) | Max.pressure (psi/bar) |
SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabel 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges. Bahan Pengepakan: Silika C18 Efisiensi Tinggi (AQ), 20-45 μm, 100 Å.
Untuk informasi lebih lanjut tentang spesifikasi terperinci mesin Sepabean ™, atau informasi pemesanan pada kartrid Flash Seri Sepaflash, silakan kunjungi situs web kami.
Waktu posting: Oktober-26-2018