Rui Huang, Bo Xu
Pusat R&D Aplikasi
Perkenalan
Peptida adalah senyawa yang terdiri dari asam amino, yang masing -masing memiliki sifat fisik dan kimia yang unik karena berbagai jenis dan urutan residu asam amino yang membentuk urutannya. Dengan pengembangan sintesis kimia fase padat, sintesis kimia dari berbagai peptida aktif telah membuat kemajuan besar. Namun, karena komposisi rumit peptida yang diperoleh dengan sintesis fase padat, produk akhir harus dimurnikan dengan metode pemisahan yang andal. Metode pemurnian yang umum digunakan untuk peptida meliputi kromatografi pertukaran ion (IEC) dan kromatografi cair kinerja tinggi terbalik (RP-HPLC), yang memiliki kerugian kapasitas pemuatan sampel rendah, biaya yang tinggi dari media pemisahan, yang secara rumit dan dalam pemisahan, dll. Sebelumnya pemurnian molekul kecil (mw <1 kdio yang ada di peplisi yang terjadi sebelumnya (mW <1 kdion yang sebelumnya, dalam m-kd (mw 1 kd. Cartridge Sepaflash RP C18 digunakan untuk pemurnian cepat timopentin (TP-5) dan produk target yang memenuhi persyaratan diperoleh.
Gambar 1. 20 Asam amino biasa (direproduksi dari www.bachem.com).
Ada 20 jenis asam amino yang umum dalam komposisi peptida. Asam amino ini dapat dibagi menjadi kelompok-kelompok berikut sesuai dengan sifat polaritas dan asam-basa: non-polar (hidrofobik), kutub (tidak bermuatan), asam atau basa (seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1). Dalam urutan peptida, jika asam amino yang membentuk urutan sebagian besar adalah yang polar (seperti yang ditandai dalam warna merah muda pada Gambar 1), seperti sistein, glutamin, asparagin, serin, treonin, tirosin, dll. Kemudian peptida ini mungkin memiliki polaritas yang kuat dan sangat larut dalam air. Selama prosedur pemurnian untuk sampel peptida polar yang kuat ini dengan kromatografi fase terbalik, sebuah fenomena yang disebut keruntuhan fase hidrofobik akan terjadi (merujuk pada catatan aplikasi yang diterbitkan sebelumnya oleh Santai Technologies: Hidrophobic Fase Rollapse, kolom kromatografi fase terbalik AQ dan aplikasinya). Dibandingkan dengan kolom C18 biasa, kolom C18AQ yang ditingkatkan paling cocok untuk pemurnian sampel polar atau hidrofilik yang kuat. Dalam posting ini, peptida kutub yang kuat digunakan sebagai sampel dan dimurnikan dengan kolom C18AQ. Akibatnya, produk target yang memenuhi persyaratan diperoleh dan dapat digunakan dalam penelitian dan pengembangan berikut.
| Instrumen | Sepabean™Mesin 2 | |||
| Kartrid | 12 g Sepaflash C18 RP Flash Cartridge (Silika Bulat, 20-45 μm, 100 Å, Pesanan Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridge (Silika Bulat, 20-45 μm, 100 Å, Nomor Pesanan ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Panjang gelombang | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Fase gerak | Solvent A: Air Solvent B: Asetonitril | |||
| Laju aliran | 15 ml/mnt | 20 ml/mnt | ||
| Pemuatan sampel | 30 mg | |||
| Gradien | Waktu (CV) | Pelarut b (%) | Waktu (min) | Pelarut b (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Hasil dan Diskusi
Untuk membandingkan kinerja pemurnian untuk sampel peptida kutub antara kolom C18 biasa dan kolom C18AQ, kami menggunakan kolom C18 biasa untuk pemurnian flash sampel sebagai awal. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2, karena keruntuhan fase hidrofobik dari rantai C18 yang disebabkan oleh rasio air tinggi, sampel hampir tidak dipertahankan pada kartrid C18 biasa dan secara langsung dielusi oleh fase gerak. Akibatnya, sampel tidak dipisahkan dan dimurnikan secara efektif.
Gambar 2. Kromatogram flash sampel pada kartrid C18 biasa.
Selanjutnya, kami menggunakan kolom C18AQ untuk pemurnian flash sampel. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3, peptida dipertahankan secara efektif pada kolom dan kemudian dielusi. Produk target dipisahkan dari kotoran dalam sampel mentah dan dikumpulkan. Setelah lyophilisasi dan kemudian dianalisis dengan HPLC, produk yang dimurnikan memiliki kemurnian 98,2% dan dapat digunakan lebih lanjut untuk penelitian dan pengembangan langkah berikutnya.
Gambar 3. Kromatogram flash sampel pada kartrid C18AQ.
Kesimpulannya, kartrid Flash RP Sepaflash C18AQ dikombinasikan dengan sistem kromatografi flash sepabean™Mesin dapat menawarkan solusi yang cepat dan efektif untuk pemurnian sampel polar atau hidrofilik yang kuat.
Ada serangkaian kartrid flash RP Sepaflash C18AQ dengan spesifikasi berbeda dari teknologi Santai (seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2).
| Nomor item | Ukuran kolom | Laju aliran (ml/mnt) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabel 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges. Bahan Pengepakan: Silika C18 Efisiensi Tinggi (AQ), 20-45 μm, 100 Å.
Untuk informasi lebih lanjut tentang spesifikasi terperinci mesin Sepabean ™, atau informasi pemesanan pada kartrid Flash Seri Sepaflash, silakan kunjungi situs web kami.
Waktu posting: Oktober-12-2018