Rui Huang, Bo Xu
Pusat Litbang Aplikasi
Perkenalan
Peptida adalah senyawa yang terdiri dari asam amino, yang masing-masing memiliki sifat fisik dan kimia yang unik karena perbedaan jenis dan urutan residu asam amino yang menyusun urutannya.Dengan berkembangnya sintesis kimia fase padat, sintesis kimia berbagai peptida aktif telah mengalami kemajuan besar.Namun, karena komposisi peptida yang diperoleh melalui sintesis fase padat rumit, produk akhir harus dimurnikan dengan metode pemisahan yang andal.Metode pemurnian peptida yang umum digunakan meliputi kromatografi penukar ion (IEC) dan kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik (RP-HPLC), yang memiliki kelemahan yaitu kapasitas pemuatan sampel yang rendah, biaya media pemisahan yang tinggi, peralatan pemisahan yang rumit dan mahal, dll. Untuk pemurnian cepat peptida molekul kecil (MW <1 kDa), kasus aplikasi yang berhasil sebelumnya diterbitkan oleh Santai Technologies, di mana kartrid SepaFlash RP C18 digunakan untuk pemurnian cepat timopentin (TP-5) dan diperoleh produk sasaran yang memenuhi persyaratan.
Gambar 1. 20 asam amino yang umum (direproduksi dari www.bachem.com).
Ada 20 jenis asam amino yang umum dalam komposisi peptida.Asam amino ini dapat dibagi menjadi beberapa kelompok berikut menurut polaritas dan sifat asam basanya: non-polar (hidrofobik), polar (tidak bermuatan), asam atau basa (seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1).Dalam rangkaian peptida, jika asam amino yang membentuk rangkaian tersebut sebagian besar bersifat polar (seperti ditandai dengan warna merah jambu pada Gambar 1), seperti Sistein, Glutamin, Asparagin, Serin, Threonin, Tirosin, dll., maka peptida ini mungkin mempunyai sifat yang kuat. polaritasnya dan sangat larut dalam air.Selama prosedur pemurnian sampel peptida polar kuat ini dengan kromatografi fase terbalik, sebuah fenomena yang disebut keruntuhan fase hidrofobik akan terjadi (lihat catatan aplikasi yang diterbitkan sebelumnya oleh Santai Technologies: Runtuhnya Fase Hidrofobik, Kolom Kromatografi Fase Terbalik AQ dan Penerapannya).Dibandingkan dengan kolom C18 biasa, kolom C18AQ yang ditingkatkan paling cocok untuk pemurnian sampel polar atau hidrofilik kuat.Dalam postingan ini, peptida polar kuat digunakan sebagai sampel dan dimurnikan dengan kolom C18AQ.Hasilnya, diperoleh produk sasaran yang memenuhi persyaratan dan dapat digunakan pada penelitian dan pengembangan selanjutnya.
| Instrumen | SepaBean™mesin 2 | |||
| Kartrid | 12 g Kartrid flash SepaFlash C18 RP (silika bulat, 20 - 45 μm, 100 Å, Nomor pesanan：SW-5222-012-SP) | 12 g Kartrid flash SepaFlash C18AQ RP (silika bulat, 20 - 45 μm, 100 Å, Nomor pesanan：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Panjang gelombang | 254nm, 220nm | 214nm | ||
| Fase seluler | Pelarut A: Air Pelarut B: Asetonitril | |||
| Laju aliran | 15 mL/menit | 20 mL/menit | ||
| Pemuatan sampel | 30mg | |||
| Gradien | Waktu (CV) | Pelarut B (%) | Waktu (menit) | Pelarut B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Hasil dan Diskusi
Untuk membandingkan kinerja pemurnian sampel peptida polar antara kolom C18 biasa dan kolom C18AQ, kami menggunakan kolom C18 biasa untuk pemurnian kilat sampel sebagai permulaan.Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2, karena keruntuhan fase hidrofobik rantai C18 yang disebabkan oleh rasio air yang tinggi, sampel hampir tidak tertahan pada kartrid C18 biasa dan langsung dielusi oleh fase gerak.Akibatnya, sampel tidak dipisahkan dan dimurnikan secara efektif.
Gambar 2. Kromatogram flash sampel pada kartrid C18 biasa.
Selanjutnya, kami menggunakan kolom C18AQ untuk pemurnian flash sampel.Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3, peptida secara efektif ditahan pada kolom dan kemudian dielusi keluar.Produk target dipisahkan dari pengotor dalam sampel mentah dan dikumpulkan.Setelah liofilisasi dan kemudian dianalisis dengan HPLC, produk yang dimurnikan memiliki kemurnian 98,2% dan dapat dimanfaatkan lebih lanjut untuk penelitian dan pengembangan tahap selanjutnya.
Gambar 3. Kromatogram flash sampel pada kartrid C18AQ.
Kesimpulannya, kartrid flash SepaFlash C18AQ RP dikombinasikan dengan sistem kromatografi flash SepaBean™mesin ini dapat menawarkan solusi cepat dan efektif untuk pemurnian sampel polar atau hidrofilik yang kuat.
Terdapat rangkaian flash cartridge SepaFlash C18AQ RP dengan spesifikasi berbeda dari Santai Technology (seperti terlihat pada Tabel 2).
| Nomor barang | Ukuran Kolom | Laju Aliran (mL/menit) | Tekanan Maks (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 gram | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 gram | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 gram | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 gram | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 gram | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 gram | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 gram | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 gram | 40-80 | 250/17.2 |
Tabel 2. Kartrid flash SepaFlash C18AQ RP.Bahan kemasan: Silika berikat C18(AQ) berbentuk bola efisiensi tinggi, 20 - 45 μm, 100 Å.
Untuk informasi lebih lanjut mengenai spesifikasi rinci mesin SepaBean™, atau informasi pemesanan kartrid flash seri SepaFlash, silakan kunjungi website kami.
Waktu posting: 12 Oktober 2018