Mingzu Yang, Bo Xu
Դիմումների R&D կենտրոն
Ներածություն
Հակաբիոտիկները երկրորդական մետաբոլիտների դաս են, որոնք արտադրվում են միկրոօրգանիզմների (ներառյալ բակտերիաները, սնկերը, ակտինոմիցետները) կամ նմանատիպ միացությունները, որոնք սինթեզվում կամ կիսասինթեզվում են քիմիական եղանակով:Հակաբիոտիկները կարող են խանգարել այլ միկրոօրգանիզմների աճին և գոյատևմանը:Մարդու կողմից հայտնաբերված առաջին հակաբիոտիկը՝ պենիցիլինը, հայտնաբերվել է բրիտանացի միկրոկենսաբան Ալեքսանդր Ֆլեմինգի կողմից 1928 թվականին: Նա նկատեց, որ բորբոսին հարևանությամբ գտնվող բակտերիաները չեն կարող աճել ստաֆիլոկոկի կուլտուրայի մեջ, որը աղտոտված է բորբոսով:Նա ենթադրում էր, որ բորբոսը պետք է արտազատի հակաբակտերիալ նյութ, որը նա անվանեց պենիցիլին 1928 թվականին: Այնուամենայնիվ, ակտիվ բաղադրիչներն այն ժամանակ չէին մաքրվել:1939 թվականին Էռնստ Չեյնը և Օքսֆորդի համալսարանի Հովարդ Ֆլորին որոշեցին ստեղծել դեղամիջոց, որը կարող է բուժել բակտերիալ վարակները:Ֆլեմինգի հետ շփվելուց հետո շտամներ ձեռք բերելու համար նրանք հաջողությամբ հանեցին և մաքրեցին պենիցիլինը շտամներից:Պենիցիլինի՝ որպես թերապևտիկ դեղամիջոցի հաջող զարգացման համար, Ֆլեմինգը, Չեյնը և Ֆլորին կիսեցին 1945 թվականին բժշկության ոլորտում Նոբելյան մրցանակը:
Հակաբիոտիկները օգտագործվում են որպես հակաբակտերիալ միջոցներ՝ բակտերիալ վարակների բուժման կամ կանխարգելման համար:Կան հակաբիոտիկների մի քանի հիմնական կատեգորիաներ, որոնք օգտագործվում են որպես հակաբակտերիալ միջոցներ՝ β-լակտամային հակաբիոտիկներ (ներառյալ պենիցիլին, ցեֆալոսպորին և այլն), ամինոգլիկոզիդային հակաբիոտիկներ, մակրոլիդային հակաբիոտիկներ, տետրացիկլինային հակաբիոտիկներ, քլորամֆենիկոլ (ընդհանուր սինթետիկ հակաբիոտիկներ) և այլն: կենսաբանական խմորում, կիսասինթեզ և ընդհանուր սինթեզ։Կենսաբանական ֆերմենտացիայի արդյունքում արտադրվող հակաբիոտիկները պետք է կառուցվածքային փոփոխության ենթարկվեն քիմիական մեթոդներով՝ քիմիական կայունության, թունավոր կողմնակի ազդեցությունների, հակաբակտերիալ սպեկտրի և այլ խնդիրների պատճառով:Քիմիական ձևափոխվելուց հետո հակաբիոտիկները կարող են հասնել կայունության բարձրացման, թունավոր կողմնակի ազդեցությունների կրճատման, հակաբակտերիալ սպեկտրի ընդլայնման, դեղերի դիմադրության նվազեցման, կենսամատչելիության բարելավման և դրանով իսկ դեղորայքային բուժման արդյունավետության բարելավմանը:Հետևաբար, կիսասինթետիկ հակաբիոտիկները ներկայումս հանդիսանում են հակաբիոտիկ դեղամիջոցների մշակման ամենատարածված ուղղությունը:
Կիսասինթետիկ հակաբիոտիկների մշակման ժամանակ հակաբիոտիկները ունեն ցածր մաքրության, բազմաթիվ կողմնակի արտադրանքների և բարդ բաղադրիչների հատկություններ, քանի որ դրանք ստացվում են մանրէների խմորման արտադրանքներից:Այս դեպքում հատկապես կարևոր է կիսասինթետիկ հակաբիոտիկների կեղտերի վերլուծությունը և վերահսկումը:Կեղտերն արդյունավետ բացահայտելու և բնութագրելու համար անհրաժեշտ է կիսասինթետիկ հակաբիոտիկների սինթետիկ արտադրանքից ստանալ բավարար քանակությամբ կեղտեր:Կեղտաջրերի պատրաստման սովորաբար օգտագործվող մեթոդներից ֆլեշ քրոմատոգրաֆիան ծախսարդյունավետ մեթոդ է, որն ունի առավելություններ, ինչպիսիք են նմուշների բեռնման մեծ քանակությունը, ցածր արժեքը, ժամանակի խնայողությունը և այլն: Ֆլեշ քրոմատոգրաֆիան ավելի ու ավելի է կիրառվում սինթետիկ հետազոտողների կողմից:
Այս գրառման մեջ որպես նմուշ օգտագործվել է կիսասինթետիկ ամինոգլիկոզիդային հակաբիոտիկի հիմնական կեղտը և մաքրվել SepaFlash C18AQ քարթրիջով, որը համակցված է ֆլեշ քրոմատոգրաֆիայի համակարգի SepaBean ™ մեքենայի հետ:Պահանջներին համապատասխանող թիրախային արտադրանքը հաջողությամբ ձեռք է բերվել՝ առաջարկելով բարձր արդյունավետ լուծում այս միացությունների մաքրման համար:
Փորձարարական բաժին
Նմուշը սիրով տրամադրել է տեղական դեղագործական ընկերությունը:Նմուշը մի տեսակ ամինոպոլիցիկլիկ ածխաջրեր էր, և դրա մոլեկուլային կառուցվածքը նման էր ամինոգլիկոզիդային հակաբիոտիկներին:Նմուշի բևեռականությունը բավականին բարձր է եղել, ինչը այն դարձնում է ջրի մեջ շատ լուծելի:Նմուշի մոլեկուլային կառուցվածքի սխեմատիկ դիագրամը ցուցադրված է Նկար 1-ում: Հում նմուշի մաքրությունը մոտ 88% էր՝ վերլուծված HPLC-ով:Բարձր բևեռականություն ունեցող այս միացությունների մաքրման համար նմուշը հազիվ կպահվի սովորական C18 սյուների վրա՝ համաձայն մեր նախկին փորձի:Հետևաբար, նմուշի մաքրման համար օգտագործվել է C18AQ սյունակ:
Նկար 1. Նմուշի մոլեկուլային կառուցվածքի սխեմատիկ դիագրամ:
Նմուշի լուծույթը պատրաստելու համար 50 մգ չմշակված նմուշը լուծարվել է 5 մլ մաքուր ջրի մեջ, այնուհետև ուլտրաձայնային է ենթարկվել, որպեսզի այն դառնա ամբողջովին թափանցիկ լուծույթ:Նմուշի լուծույթն այնուհետև ներարկիչով ներարկվեց ֆլեշ սյունակ:Ֆլեշ մաքրման փորձնական կարգավորումը թվարկված է Աղյուսակ 1-ում:
| Գործիք | SepaBean™ մեքենա 2 | |
| Քարթրիջներ | 12 գ SepaFlash C18AQ RP ֆլեշ քարթրիջ (գնդաձև սիլիցիում, 20 - 45 մկմ, 100 Å, Պատվերի համարը՝ SW-5222-012-SP(AQ)) | |
| Ալիքի երկարություն | 204 նմ, 220 նմ | |
| Շարժական փուլ | Լուծիչ A: Ջուր Լուծիչ B՝ ացետոնիտրիլ | |
| Հոսքի արագություն | 15 մլ/րոպե | |
| Նմուշի բեռնում | 50 մգ | |
| Գրադիենտ | Ժամանակ (րոպե) | Լուծիչ B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Արդյունքներ և քննարկում
C18AQ քարթրիջի վրա նմուշի ֆլեշ քրոմատոգրամը ներկայացված է Նկար 2-ում: Ինչպես ցույց է տրված Նկար 2-ում, բարձր բևեռային նմուշը արդյունավետորեն պահպանվել է C18AQ քարթրիջի վրա:Հավաքված ֆրակցիաների լիոֆոլացումից հետո թիրախային արտադրանքն ուներ 96.2% մաքրություն (ինչպես ցույց է տրված Նկար 3-ում) HPLC վերլուծության միջոցով:Արդյունքները ցույց տվեցին, որ մաքրված արտադրանքը կարող է հետագայում օգտագործվել հետազոտության և զարգացման հաջորդ փուլում:
Նկար 2. Նմուշի ֆլեշ քրոմատոգրամը C18AQ քարթրիջի վրա:
Նկար 3. Թիրախային արտադրանքի HPLC քրոմատոգրամը:
Եզրափակելով, SepaFlash C18AQ RP ֆլեշ քարթրիջը զուգակցված ֆլեշ քրոմատոգրաֆիկ համակարգի SepaBean ™ մեքենայի հետ կարող է արագ և արդյունավետ լուծում առաջարկել բարձր բևեռային նմուշների մաքրման համար:
SepaFlash C18AQ RP ֆլեշ փամփուշտների մասին
Կան SepaFlash C18AQ RP ֆլեշ փամփուշտների մի շարք Santai Technology-ի տարբեր բնութագրերով (ինչպես ցույց է տրված Աղյուսակ 2-ում):
| Նյութի համարը | Սյունակի չափը | Հոսքի արագություն (մլ/րոպե) | Առավելագույն ճնշում (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 գ | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 գ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 գ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 գ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 գ | 25-50 թթ | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 գ | 30-60 թթ | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 գ | 40-80 թթ | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 գ | 40-80 թթ | 250/17.2 |
Աղյուսակ 2. SepaFlash C18AQ RP ֆլեշ փամփուշտներ:Փաթեթավորման նյութեր՝ բարձր արդյունավետ գնդաձև C18(AQ) սիլիցիում, 20 - 45 մկմ, 100 Å:
SepaBean™ մեքենայի մանրամասն տեխնիկական բնութագրերի կամ SepaFlash սերիայի ֆլեշ փամփուշտների վերաբերյալ լրացուցիչ տեղեկությունների համար այցելեք մեր կայքը:
Հրապարակման ժամանակը՝ հոկտ-26-2018