Ռուի Հուանգ, Բո Սյու
Դիմումների R&D կենտրոն
Ներածություն
Պեպտիդը միացություն է, որը կազմված է ամինաթթուներից, որոնցից յուրաքանչյուրն ունի յուրահատուկ ֆիզիկական և քիմիական հատկություններ՝ իր հաջորդականությունը կազմող ամինաթթուների մնացորդների տարբեր տեսակների և կարգի պատճառով:Պինդ փուլային քիմիական սինթեզի զարգացմամբ տարբեր ակտիվ պեպտիդների քիմիական սինթեզը մեծ առաջընթաց է գրանցել։Այնուամենայնիվ, պինդ ֆազային սինթեզի արդյունքում ստացված պեպտիդի բարդ բաղադրության պատճառով վերջնական արտադրանքը պետք է զտվի հուսալի բաժանման մեթոդներով:Պեպտիդների համար սովորաբար օգտագործվող մաքրման մեթոդները ներառում են իոնափոխանակման քրոմատոգրաֆիան (IEC) և հակադարձ փուլային բարձր արդյունավետության հեղուկ քրոմատոգրաֆիան (RP-HPLC), որոնք ունեն թերություններ՝ նմուշների բեռնման ցածր հզորությամբ, տարանջատման միջավայրի բարձր արժեքով, բարդ և թանկարժեք տարանջատման սարքավորումներով, և այլն: Փոքր մոլեկուլային պեպտիդների արագ մաքրման համար (ՄՎտ < 1 կԴա) ավելի վաղ Santai Technologies-ի կողմից հրապարակվել էր հաջողված կիրառման դեպք, որտեղ SepaFlash RP C18 քարթրիջն օգտագործվել է թիմոպենտինի (TP-5) արագ մաքրման համար: ձեռք է բերվել պահանջներին համապատասխանող թիրախային արտադրանք:
Նկար 1. 20 սովորական ամինաթթուներ (վերարտադրվել է www.bachem.com կայքից):
Գոյություն ունեն 20 տեսակի ամինաթթուներ, որոնք տարածված են պեպտիդների բաղադրության մեջ։Այս ամինաթթուները կարելի է բաժանել հետևյալ խմբերի՝ ըստ իրենց բևեռականության և թթու-բազային հատկության՝ ոչ բևեռային (ջրոֆոբ), բևեռային (չլիցքավորված), թթվային կամ հիմնային (ինչպես ցույց է տրված նկար 1-ում):Պեպտիդային հաջորդականության դեպքում, եթե հաջորդականությունը կազմող ամինաթթուները հիմնականում բևեռային են (ինչպես նշված է վարդագույն գույնով Նկար 1-ում), ինչպես օրինակ՝ ցիստեինը, գլուտամինը, ասպարագինը, սերինը, թրեոնինը, թիրոզինը և այլն, ապա այս պեպտիդը կարող է ունենալ ուժեղ հզորություն։ բևեռականություն և շատ լուծվող ջրի մեջ:Հակառակ փուլային քրոմատագրմամբ այս ուժեղ բևեռային պեպտիդների նմուշների մաքրման ընթացակարգի ընթացքում տեղի կունենա մի երևույթ, որը կոչվում է հիդրոֆոբ փուլային կոլապս (տե՛ս Santai Technologies-ի կողմից նախկինում հրապարակված կիրառական նշումը. Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns and their Applications):Համեմատած սովորական C18 սյուների հետ, բարելավված C18AQ սյուները առավել հարմար են ուժեղ բևեռային կամ հիդրոֆիլ նմուշների մաքրման համար:Այս գրառման մեջ որպես նմուշ օգտագործվել է ուժեղ բևեռային պեպտիդ և մաքրվել C18AQ սյունակով:Արդյունքում ստացվել է պահանջներին համապատասխանող թիրախային արտադրանքը և կարող է օգտագործվել հետևյալ հետազոտությունների և մշակումների համար։
| Գործիք | SepaBean™մեքենա 2 | |||
| Քարթրիջներ | 12 գ SepaFlash C18 RP ֆլեշ քարթրիջ (գնդաձև սիլիցիում, 20 - 45 մկմ, 100 Å, պատվերի համարը: SW-5222-012-SP) | 12 գ SepaFlash C18AQ RP ֆլեշ քարթրիջ (գնդաձև սիլիցիում, 20 - 45 մկմ, 100 Å, Պատվերի համարը՝ SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Ալիքի երկարություն | 254 նմ, 220 նմ | 214 նմ | ||
| Շարժական փուլ | Լուծիչ A: Ջուր Լուծիչ B՝ ացետոնիտրիլ | |||
| Հոսքի արագություն | 15 մլ/րոպե | 20 մլ/րոպե | ||
| Նմուշի բեռնում | 30 մգ | |||
| Գրադիենտ | Ժամանակ (CV) | Լուծիչ B (%) | Ժամանակ (րոպե) | Լուծիչ B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Արդյունքներ և քննարկում
Բևեռային պեպտիդների նմուշի մաքրման արդյունավետությունը սովորական C18 սյունակի և C18AQ սյունակի միջև համեմատելու համար մենք որպես սկիզբ օգտագործեցինք սովորական C18 սյունակ նմուշի արագ մաքրման համար:Ինչպես ցույց է տրված Նկար 2-ում, C18 շղթաների հիդրոֆոբ փուլի փլուզման պատճառով բարձր ջրային հարաբերակցությամբ, նմուշը հազիվ էր պահվում սովորական C18 քարթրիջի վրա և ուղղակիորեն դուրս էր մղվում շարժական փուլով:Արդյունքում, նմուշը արդյունավետորեն չի առանձնացվել և մաքրվել:
Նկար 2. Նմուշի ֆլեշ քրոմատոգրամը սովորական C18 քարթրիջի վրա:
Այնուհետև մենք օգտագործեցինք C18AQ սյունակ նմուշի ֆլեշ մաքրման համար:Ինչպես ցույց է տրված Նկար 3-ում, պեպտիդը արդյունավետորեն պահվել է սյունակի վրա, այնուհետև դուրս է մղվել:Թիրախային արտադրանքը առանձնացվել է չմշակված նմուշի կեղտերից և հավաքվել:Լիոֆիլացումից և այնուհետև HPLC-ով վերլուծելուց հետո մաքրված արտադրանքն ունի 98.2% մաքրություն և կարող է հետագայում օգտագործվել հետագա հետազոտության և զարգացման համար:
Նկար 3. Նմուշի ֆլեշ քրոմատոգրամը C18AQ քարթրիջի վրա:
Եզրափակելով, SepaFlash C18AQ RP ֆլեշ քարթրիջը համակցված է SepaBean ֆլեշ քրոմատագրման համակարգի հետ™մեքենան կարող է արագ և արդյունավետ լուծում առաջարկել ուժեղ բևեռային կամ հիդրոֆիլ նմուշների մաքրման համար:
Կան SepaFlash C18AQ RP ֆլեշ փամփուշտների մի շարք Santai Technology-ի տարբեր բնութագրերով (ինչպես ցույց է տրված Աղյուսակ 2-ում):
| Նյութի համարը | Սյունակի չափը | Հոսքի արագություն (մլ/րոպե) | Առավելագույն ճնշում (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 գ | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 գ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 գ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 գ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 գ | 25-50 թթ | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 գ | 30-60 թթ | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 գ | 40-80 թթ | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 գ | 40-80 թթ | 250/17.2 |
Աղյուսակ 2. SepaFlash C18AQ RP ֆլեշ փամփուշտներ:Փաթեթավորման նյութեր՝ բարձր արդյունավետ գնդաձև C18(AQ) սիլիցիում, 20 - 45 մկմ, 100 Å:
SepaBean™ մեքենայի մանրամասն տեխնիկական բնութագրերի կամ SepaFlash սերիայի ֆլեշ փամփուշտների վերաբերյալ լրացուցիչ տեղեկությունների համար այցելեք մեր կայքը:
Հրապարակման ժամանակը՝ հոկտ-12-2018