Rui huang, bo xu
Դիմում R & D կենտրոն
Ներածություն
Պեպտիդը ամինաթթուներից բաղկացած միացություն է, որոնցից յուրաքանչյուրն ունի յուրահատուկ ֆիզիկական եւ քիմիական հատկություններ `իր հաջորդականությունը կազմող ամինաթթուների մնացորդների տարբեր տեսակների եւ կարգի պատճառով: Կոշտ փուլի քիմիական սինթեզի մշակմամբ, տարբեր ակտիվ պեպտիդների քիմիական սինթեզը մեծ առաջընթաց է արձանագրել: Այնուամենայնիվ, ամուր փուլային սինթեզով ձեռք բերված պեպտիդի բարդ կազմի պատճառով վերջնական արտադրանքը պետք է մաքրվի տարանջատման հուսալի մեթոդներով: Պեպտիդների համար օգտագործվող մաքրումային եղանակները ներառում են ION Exchange Chromatography (IEC) եւ Reversed-Phase High Performance հեղուկ քրոմատոգրաֆիա (RP-HPLC), որոնք ունեն ցածր մակարդակի բեռնման բարձրության, բարդ եւ ծախսատար տարանջատման սարքավորումներ եւ այլն: Տեխնոլոգիաները, որոնցում օգտագործվում էր Sepaflash RP C18 քարթրիջը ThymOpentin (TP-5) արագ մաքրման եւ նպատակային արտադրանքի համար, ստացվել է պահանջները:
Նկար 1: 20 ընդհանուր ամինաթթուներ (վերարտադրվում է www.bachem.com- ից):
Գոյություն ունեն 20 տեսակի ամինաթթուներ, որոնք տարածված են պեպտիդների կազմի մեջ: Այս ամինաթթուները կարելի է բաժանել հետեւյալ խմբերի, ըստ իրենց բեւեռականության եւ թթվային բազայի գույքի. Ոչ բեւեռային (հիդրոֆոբ), բեւեռային (չօգտագործված), թթվային կամ հիմնական (ինչպես ցույց է տրված Նկար 1-ում): Peptide հաջորդականությամբ, եթե հաջորդականությունը կազմող ամինաթթուները հիմնականում բեւեռային են (ինչպես նշված է վարդագույն գույնի մեջ նկար 1-ում), ինչպիսիք են ցիստը, այս պեպտիդը կարող է ունենալ ուժեղ բեւեռականություն եւ խիստ լուծելի լինել: Այս ուժեղ բեւեռային պեպտիդային նմուշների ընթացքում կկայանա հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիայի միջոցով, տեղի է ունենալու հիդրոֆոբիկ փուլային փլուզում, որը կոչվում է Santai տեխնոլոգիաների կողմից նախկինում հրապարակված դիմումի նոտա. AQ- ն հակադարձեց փլատակների քրոմատոգրաֆիայի սյուները եւ դրանց կիրառումը): C18 սովորական սյուների համեմատությամբ, C18AQ սյուները առավել հարմար են ուժեղ բեւեռային կամ հիդրոֆիլային նմուշների մաքրման համար: Այս գրառման մեջ ուժեղ բեւեռային պեպտիդ օգտագործվել է որպես նմուշ եւ մաքրվել C18AQ սյունակի միջոցով: Արդյունքում, նպատակային արտադրանքի բավարարումը ստացվել է պահանջները եւ կարող է օգտագործվել հետեւյալ հետազոտություններում եւ զարգացման մեջ:
| Գործիք | Սեպաբե™Մեքենա 2 | |||
| Փամփուշտներ | 12 գ SEPAFLASH C18 RP Flash քարտրիջ (գնդաձեւ սիլիկա, 20 - 45 մկմ, 100 Å, Պատվիրեք Nunber: SW-5222-012-SP) | 12 գ SEPAFLASH C18AQ RP Flash Քարտրիջ (գնդաձեւ սիլիկա, 20 - 45 մկմ, 100 Å, Պատվերով համարը: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Ալիքի երկարություն | 254 նմ, 220 նմ | 214 նմ | ||
| Բջջային փուլ | Լուծիչ A: ջուր Լուծիչ B: Acetonitrile | |||
| Հոսքի արագություն | 15 մլ / րոպե | 20 մլ / րոպե | ||
| Նմուշի բեռնում | 30 մգ | |||
| Գրադիենտ | Ժամանակը (CV) | Լուծիչ B (%) | Ժամանակ (րոպե) | Լուծիչ B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7,5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Արդյունքներ եւ քննարկում
Համեմատեք բեւեռային պեպտիդային նմուշի մաքրման կատարումը կանոնավոր C18 սյունակի եւ C18AQ սյունակի միջեւ, մենք օգտագործեցինք կանոնավոր C18 սյունակ `որպես սկիզբ որպես սկիզբ: Ինչպես ցույց է տրված Գծապատկեր 2-ում, C18- ի հիդրոֆոբ փուլային փլուզման պատճառով `բարձրորակ հարաբերակցության պատճառով, նմուշը հազիվ պահպանվեց կանոնավոր C18 քարթրիջի վրա եւ ուղղակիորեն դուրս է եկել բջջային փուլով: Արդյունքում նմուշը արդյունավետորեն առանձնացված եւ մաքրված չէր:
Գծապատկեր 2. Նմուշի ֆլեշ քրոմատոգրամը սովորական C18 քարթրիջի վրա:
Հաջորդը, մենք օգտագործեցինք C18AQ սյուն `նմուշի ֆլեշ մաքրման համար: Ինչպես ցույց է տրված Նկար 3-ում, պեպտիդը արդյունավետորեն պահպանվել է սյունակում, այնուհետեւ դուրս հանել: Թիրախային արտադրանքը առանձնացվել է հում նմուշի կեղտերից եւ հավաքվել: Լյոֆիլիզացումից հետո, այնուհետեւ վերլուծվել HPLC- ի կողմից, մաքրված արտադրանքը ունի 98,2% մաքրություն եւ կարող է հետագայում օգտագործվել հաջորդ քայլի հետազոտության եւ զարգացման համար:
Գծապատկեր 3: Նմուշի ֆլեշ քրոմատոգրամը C18AQ քարթրիջի վրա:
Եզրափակելով, Sepaflash C18AQ RP Flash քարթրիջը զուգակցվում է Flash Chromatography համակարգի հետ Sepabean- ի հետ™Մեքենան կարող է արագ եւ արդյունավետ լուծում առաջարկել ուժեղ բեւեռային կամ հիդրոֆիլային նմուշների մաքրման համար:
SEPAFLASH C18AQ RP Flash CRTRIDGES SANTAI տեխնոլոգիայի տարբեր բնութագրերով կա (ինչպես ցույց է տրված Աղյուսակ 2-ում):
| Նյութի համարը | Սյունակի չափը | Հոսքի արագություն (ML / MIN) | Max.Pressure (PSI / BAR) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 գ | 5-15 | 400/7.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 գ | 10-25 | 400/7.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 գ | 10-25 | 400/7.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 գ | 15-30 | 400/7.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 գ | 25-50 | 350/4.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 գ | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 գ | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 գ | 40-80 | 250/17.2 |
Աղյուսակ 2-ը: Sepaflash C18AQ RP ֆլեշ փամփուշտներ: Փաթեթավորման նյութեր. Բարձր արդյունավետության գնդաձեւ C18 (AQ) -Bonded Silica, 20 - 45 մկմ, 100 Å.
Sepabean ™ մեքենայի մանրամասն բնութագրերի վերաբերյալ լրացուցիչ տեղեկություններ ստանալու կամ Sepaflash Series Flash Cartridges- ի վերաբերյալ պատվիրելու մասին տեղեկությունների համար այցելեք մեր կայք:
Փոստի ժամանակ, Հոկտ -12-2018