Hongcheng Wang, Bo Xu
Դիմում R & D կենտրոն
Ներածություն
Ըստ ստացիոնար փուլի եւ շարժական փուլի հարաբերական բեւեռականության, հեղուկ քրոմատոգրաֆիան կարելի է բաժանել նորմալ փուլի քրոմատոգրաֆիայի (NPC) եւ հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիա (RPC): RPC- ի համար բջջային փուլի բեւեռականությունը ավելի ուժեղ է, քան ստացիոնար փուլը: RPC- ն դարձել է հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տարանջատման ռեժիմներում ամենատարածվածը `բարձր արդյունավետության, լավ լուծման եւ պահպանման հստակ մեխանիզմի պատճառով: Հետեւաբար RPC- ն հարմար է տարբեր բեւեռային կամ ոչ բեւեռային միացությունների տարանջատման եւ մաքրագործման համար `RPC- ի տարբեր բեւեռային կամ ոչ բեւեռային միացությունների, ստերոիդների, ածխաթթուների, ամինաթթուների, պիտույքների, սպիտակուցների եւ այլն, ամենատարածված ստացիոնար փուլը` Silica Gel Matrix- ը, որը կապված է տարբեր ֆունկցիոնալ խմբերի, ներառյալ C18, C8, C4, Phenyl, Այս կապակցված ֆունկցիոնալ խմբերի միջեւ Cyano, Amino եւ այլն, ամենատարածվածը C18- ն է: Հաշվարկվում է, որ RPC- ի ավելի քան 80% -ը այժմ օգտագործում է C18 Խճճված փուլ: Հետեւաբար C18 քրոմատոգրաֆիայի սյունը դարձել է պարտադիր համընդհանուր սյուն `յուրաքանչյուր լաբորատորիայի համար:
Չնայած C18 սյունակը կարող է օգտագործվել շատ լայն կիրառման մեջ, այնուամենայնիվ, շատ բեւեռային կամ խիստ հիդրոֆիլային, կանոնավոր C18 սյուները կարող են խնդիրներ ունենալ, երբ օգտագործվում են նման նմուշները մաքրելու համար: RPC- ում սովորաբար օգտագործվող Elatis Solvents- ը կարող է պատվիրվել ըստ իրենց բեւեռականության. Water րի <Մեթանոլ <acetonitrile <isopropanol. Այս նմուշների համար սյունակում լավ պահելը հավաստիացնելու համար անհրաժեշտ է օգտագործել ջրային համակարգի բարձր համամասնությունը, որպես բջջային փուլ: Այնուամենայնիվ, մաքուր ջրային համակարգ (ներառյալ մաքուր ջուր կամ մաքուր աղի լուծում) օգտագործելիս, որպես բջջային փուլ, C18 սյունակի ստացիոնար փուլում գտնվող երկար ածխածնային շղթան ձգտում է խուսափել ջրից եւ խառնել միմյանց հետ, կամ նույնիսկ որեւէ պահպանման ժամանակ առանձին նվազում: Այս երեւույթը կոչվում է «Հիդրոֆոբի փուլային փլուզում» (ինչպես ցույց է տրված Նկար 1-ի ձախ մասում): Չնայած այս իրավիճակը հետադարձելի է, երբ սյունը լվանում է օրգանական լուծիչներով, ինչպիսիք են մեթանոլը կամ ացետոնիտրիլը, այն դեռ կարող է վնաս պատճառել սյունակին: Հետեւաբար անհրաժեշտ է կանխել այս իրավիճակը տեղի ունենալուց:
Նկար 1. Silica Gel- ի մակերեւույթի վրա հիմնված C18 սյունակում (ձախ) եւ C18AQ սյուն (աջ) մակերեւույթի գծերով սխեմատիկ դիագրամը (ձախ) եւ C18AQ սյունակում (աջ):
Վերոնշյալ խնդիրներին անդրադառնալու համար քրոմատագրական փաթեթավորման նյութերի արտադրողները կատարել են տեխնիկական բարելավումներ: Այս բարելավումներից մեկը Սիլիցա մատրիցայի մակերեսի վրա որոշ փոփոխություններ է անում, ինչպիսիք են հիդրոֆիլային ցիանո խմբերի ներդրումը (ինչպես ցույց է տրված Գծապատկեր 1-ի ճիշտ մասում): Այսպիսով, սիլիցի մակերեւույթի C18 շղթաները կարող են ամբողջությամբ երկարաձգվել խիստ ջրային պայմաններում, եւ ածխոֆոբիկ փուլի փլուզումը հնարավոր է խուսափել: Այս փոփոխված C18 սյուները կոչվում են «Aqueous C18» սյուներ, մասնավորապես C18AQ սյուներ, որոնք նախատեսված են խիստ ջրալի պայմանների համար եւ կարող են հանդուրժել 100% ջրային համակարգ: C18AQ սյուները լայնորեն կիրառվել են ուժեղ բեւեռային միացությունների տարանջատման եւ մաքրման մեջ, ներառյալ օրգանական թթուները, պեպտիդները, միջուկները եւ ջրի լուծվող վիտամինները:
Desalting- ը C18AQ սյուների բնորոշ դիմումներից մեկն է նմուշների համար Flash մաքրման մեջ, որը հեռացնում է աղի կամ բուֆերային բաղադրիչները նմուշի լուծույթով `հետագա ուսումնասիրություններում նմուշի կիրառումը հեշտացնելու համար: Այս գրառման մեջ ուժեղ բեւեռականությամբ փայլուն կապույտ FCF- ն օգտագործվել է որպես նմուշ եւ մաքրվել C18AQ սյունակի վրա: Նմուշի լուծիչը փոխարինվեց բուֆերային լուծույթից օրգանական լուծիչով, դրանով իսկ հեշտացնելով հետեւյալ պտտվող գոլորշիացումը, ինչպես նաեւ փրկարար լուծիչները եւ գործառնական ժամանակը: Ավելին, նմուշի մաքրությունը բարելավվել է `նմուշի որոշ կեղտաջրեր հեռացնելով:
Փորձարարական հատված
Գծապատկեր 2. Նմուշի քիմիական կառուցվածքը:
Փայլուն կապույտ FCF- ն օգտագործվել է որպես այս գրառման նմուշ: Հում նմուշի մաքրությունը կազմել է 86%, իսկ նմուշի քիմիական կառուցվածքը ցուցադրվել է Նկար 2-ում: Նմուշի լուծումը այնուհետեւ ներարկվել է Injector- ի միջոցով: Flash մաքրման փորձարարական կարգավորումը նշված է Աղյուսակ 1-ում:
| Գործիք | Sepabean ™ մեքենա2 | |||
| Փամփուշտներ | 12 գ SEPAFLASH C18 RP Flash Քարտրիջ (գնդաձեւ սիլիկա, 20 - 45 մկմ, 100 Å, Պատվերով համարը: SW-5222-012-SP) | 12 գ SEPAFLASH C18AQ RP Flash Քարտրիջ (գնդաձեւ սիլիկա, 20 - 45 մկմ, 100 Å, Պատվերի համարը: SW-5222-012-SP (AQ))Պարագայում | ||
| Ալիքի երկարություն | 254 նմ | |||
| Բջջային փուլ | Լուծիչ A: ջուր Լուծիչ B: Methanol | |||
| Հոսքի արագություն | 30 մլ / րոպե | |||
| Նմուշի բեռնում | 300 մգ (Brilliant Blue FCF- ը `86% մաքրությամբ) | |||
| Գրադիենտ | Ժամանակը (CV) | Լուծիչ B (%) | Ժամանակը (CV) | Լուծիչ B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100-ը | 10.1 | 100-ը | |
| 17.5 | 100-ը | 17.5 | 100-ը | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Արդյունքներ եւ քննարկում
Նմուշառման եւ մաքրման համար օգտագործվել է Sepaflash C18AQ RP ֆլեշ քարթրիջը: Օգտագործվել է քայլի գրադիենտ, որում մաքուր ջուրը օգտագործվել է որպես բջջային փուլ `Elutation- ի սկզբում եւ գործում է 10 սյունակի ծավալների (CV): Ինչպես ցույց է տրված Նկար 3-ում, մաքուր ջուրը որպես բջջային փուլ օգտագործելիս նմուշը ամբողջովին պահպանվել է Flash քարթրիջի վրա: Հաջորդը, բջջային փուլում մեթանոլը ուղղակիորեն աճել էր մինչեւ 100%, իսկ գրադիենտը պահպանվել է 7,5 CV- ի համար: Նմուշը դուրս է եկել 11.5-ից 13,5 CV: Հավաքված խմբակցություններում նմուշի լուծումը փոխարինվեց NAH2PO4- ի բուֆերային լուծույթից մինչեւ մեթանոլ: Համեմատելով խիստ ջրային լուծման հետ, մեթանոլը շատ ավելի հեշտ էր հեռացնել հետագա քայլում պտտվող գոլորշիացումով, ինչը հեշտացնում է հետեւյալ հետազոտությունը:
Գծապատկեր 3: Նմուշի ֆլեշ քրոմատոգրամը C18AQ քարթրիջի վրա:
Համեմատեք C18AQ քարթրիջի եւ կանոնավոր C18 քարթրիջի պահպանման պահվածքը ուժեղ բեւեռականության նմուշների համար, կատարվեց զուգահեռ համեմատության թեստ: Օգտագործվել է Sepaflash C18 RP Flash Cartrid, եւ նմուշի համար ֆլեշ քրոմատագրաշարը ցուցադրվել է Նկար 4-ում: C18 կանոնավոր փամփուշտների համար ամենաբարձր հանդուրժողական ջրային փուլային հարաբերակցությունը կազմում է մոտ 90%: Հետեւաբար մեկնարկի գրադիենտը 90% ջրի մեջ տեղադրվեց 10% մետանոլում: Ինչպես ցույց է տրված Գծապատկեր 4-ում, C18- ի հիդրոֆոբ փուլային փլուզման պատճառով բարձր ջրային հարաբերակցության հետեւանքով առաջացած շղթաների հիդրոֆոբի փլուզման պատճառով նմուշը հազիվ պահպանվեց կանոնավոր C18 քարթրիջի վրա եւ ուղղակիորեն դուրս է եկել բջջային փուլով: Արդյունքում, նմուշի desalting- ի կամ մաքրման գործողությունը հնարավոր չէ լրացնել:
Նկար 4: Նմուշի ֆլեշ քրոմատոգրամը սովորական C18 քարթրիջի վրա:
Գծային գրադիենտի համեմատությամբ, քայլի գրադիենտի օգտագործումը ունի հետեւյալ առավելությունները.
1. Նմուշի մաքրման վճարունակության օգտագործումը եւ գործարկման ժամանակը կրճատվում են:
2-ը: Թիրախային արտադրանքը կտրուկ գագաթնակետին է նվազեցնում, ինչը նվազեցնում է հավաքված ֆրակցիաների ծավալը եւ դրանով իսկ հեշտացնում է հետեւյալ պտտվող գոլորշիացումը, ինչպես նաեւ խնայող ժամանակը:
3. Հավաքված արտադրանքը գտնվում է մեթանոլում, որը հեշտ է գոլորշիանալ, դրանով իսկ չորացման ժամանակը կրճատվում է:
Եզրափակելով, նմուշի մաքրման համար, որը խիստ բեւեռային կամ խիստ հիդրոֆիլային, սեպաֆլաշ C18AQ RP Flash քարթրիջներ, որոնք համատեղում են նախապատրաստական Flash Chromatography System- ի հետ Sepabean ™ մեքենան կարող է առաջարկել արագ եւ արդյունավետ լուծում:
Sepaflash- ի C18 RP Flash Cartridges- ի մասին
SEPAFLASH C18AQ RP Flash CRTRIDGES SANTAI տեխնոլոգիայի տարբեր բնութագրերով կա (ինչպես ցույց է տրված Աղյուսակ 2-ում):
| Նյութի համարը | Սյունակի չափը | Հոսքի արագություն (ML / MIN) | Max.Pressure (PSI / BAR) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 գ | 5-15 | 400/7.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 գ | 10-25 | 400/7.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 գ | 10-25 | 400/7.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 գ | 15-30 | 400/7.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 գ | 25-50 | 350/4.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 գ | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 գ | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 գ | 40-80 | 250/17.2 |
Աղյուսակ 2-ը: Sepaflash C18AQ RP ֆլեշ փամփուշտներ:
Փաթեթավորման նյութեր. Բարձր արդյունավետության գնդաձեւ C18 (AQ) -Bonded Silica, 20 - 45 մկմ, 100 Å.
Logy (ինչպես ցույց է տրված Աղյուսակ 2-ում):
Փոստի ժամանակը: Օգոստոս-27-2018