Rui Huang, Bo Xu
Alkalmazási K + F központ
Bevezetés
Az ioncserélő kromatográfia (IEC) egy kromatográfiás módszer, amelyet általában az oldatban ionos formában bemutatott vegyületek elválasztására és tisztítására használnak. A cserélhető ionok különböző töltési állapota szerint az IEC két típusra osztható: kationcserélő kromatográfiára és anioncserélő kromatográfiára. A kationcserélő kromatográfiában a savas csoportokat az elválasztási tápközeg felületéhez kötik. Például a szulfonsav (-SO3H) egy általánosan használt csoport az erős kationcsere (SCX) -ben, amely a H+ -ot disszociálja, és a negatív töltésű-SO3-csoport így adszorbeálhatja az oldat más kationjait. Az anioncserélő kromatográfiában az alkálicsoportok ragaszkodnak az elválasztási közeg felületéhez. Például a kvaterner aminot (-NR3OH, ahol R IS szénhidrogén-csoport) általában erős anioncserén (SAX) használják, amely disszociálódik az OH--ban, és a pozitív töltésű csoport -N+R3 más anionokat adszorbálhat az anioncserélő hatással.
A természetes termékek közül a flavonoidok felhívták a kutatók figyelmét, mivel szerepet játszanak a szív- és érrendszeri betegségek megelőzésében és kezelésében. Mivel a flavonoid molekulák savasok a fenolos hidroxilcsoportok jelenléte miatt, az ioncserélő kromatográfia alternatív lehetőség a szokásos normál fázis vagy a fordított fáziskromatográfia mellett ezen savas vegyületek elválasztására és tisztítására. A flash kromatográfiában az ioncsere általánosan használt elválasztási tápközeg a szilikagél mátrix, ahol az ioncserélő csoportokat a felszínéhez ragasztják. A leggyakrabban használt ioncserélő módok a flash kromatográfiában az SCX (általában szulfonsav -csoport) és a SAX (általában kvaterner amincsoport). A korábban közzétett alkalmazás megjegyzésben, a „Sepaflash erős kationcsere -kromatográfiás oszlopok alkalmazása az lúgos vegyületek tisztításában” című címben, amelyet a Santai Technologies alkalmazott, SCX oszlopokat alkalmaztak az lúgos vegyületek tisztítására. Ebben a bejegyzésben semleges és savas standardok keverékét használták mintának a szaxofódok alkalmazásának feltárására a savas vegyületek tisztításában.
Kísérleti szakasz
1. ábra.
Ebben a bejegyzésben egy kvaterner aminnal kötött szilícium-dioxiddal előrecsomagolt szaxofol oszlopot használtunk (az 1. ábra szerint). A króm és a 2,4-dihidroxi-benzoesav keverékét tisztítottuk mintának (a 2. ábra szerint). Az elegyet metanolban feloldottuk, és egy injektorral feltöltöttük a flash patronra. A flash tisztítás kísérleti beállítását az 1. táblázat tartalmazza.
2. ábra. A két elem kémiai szerkezete a minta keverékében.
| Eszköz | Sepabean ™ gép t | |||||
| Patronok | 4 G Sepaflash Standard Series Flash patron (szabálytalan szilícium-dioxid, 40-63 μm, 60 Å, rendelési szám: S-5101-0004) | 4 g Sepaflash kötött sorozatú szaxofl-patron (szabálytalan szilícium-dioxid, 40-63 μm, 60 Å, megrendelés száma ： SW-5001-004-IR) | ||||
| Hullámhossz | 254 nm (detektálás), 280 nm (megfigyelés) | |||||
| Mozgófázis | Oldószer A: N-hexán | |||||
| B oldószer: etil -acetát | ||||||
| Áramlási sebesség | 30 ml/perc | 20 ml/perc | ||||
| Minta terhelés | 20 mg (az A komponens és a B komponens keveréke) | |||||
| Gradiens | Idő (CV) | B oldószer (%) | Idő (CV) | B oldószer (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Eredmények és megbeszélés
Először, a minta keverékét egy normál fázisú flash patronmal elválasztottuk, amelyet normál szilícium-dioxiddal előrecsomagoltak. Amint a 3. ábrán látható, a mintában szereplő két elem eluálódott a patronból egymás után. Ezután a minta tisztításához SAX flash patronot használtunk. Mint a 4. ábrán látható, a B savas komponenst teljesen megtartották a SAX patronon. Az A semleges komponenst fokozatosan eluáltuk a patronból a mozgó fázis elúciójával.
3. ábra. A minta flash kromatogramja egy normál normál fázisú patronon.
4. ábra. A minta flash kromatogramja egy SAX patronon.
A 3. és a 4. ábrán összehasonlítva az A komponens következetlen csúcs alakja van a két különböző flash patronnál. Annak megerősítéséhez, hogy az eluálási csúcs megfelel -e az összetevőnek, felhasználhatjuk a teljes hullámhossz -letapogatási funkciót, amely beépült a Sepabean ™ gép vezérlőszoftverébe. Nyissa meg a két elválasztás kísérleti adatait, húzza az indikátorvonalhoz az időtengelyen (CV) a kromatogramban a legmagasabb pontra, és az elucion csúcs második legmagasabb pontjára, amely megfelel az A komponensnek, és e két pont teljes hullámhossz -spektruma automatikusan a kromatogram alatt jelenik meg (az 5. ábra és a 6. ábra mutatja). Összehasonlítva a két elválasztás teljes hullámhosszú spektrum adatait, az A komponens két kísérletben következetes abszorpciós spektrummal rendelkezik. Mivel az A komponens két különböző flash patronnál következetlen csúcsformával rendelkezik, feltételezik, hogy az A komponens specifikus szennyeződése van, amelynek eltérő visszatartása van a normál fázisú patronon és a szaxofonon. Ezért az eluálási szekvencia eltér az A komponens és a szennyeződés szempontjából e két flash patronnál, ami a kromatogramokon következetlen csúcs alakot eredményez.
5. ábra. Az A komponens teljes hullámhossz -spektruma és a normál fázisú patron által elválasztott szennyeződés.
6. ábra. Az A komponens teljes hullámhossz -spektruma és a szaxofon által elválasztott szennyeződés.
Ha az összegyűjtendő céltermék az A semleges A komponenst, akkor a tisztítási feladat könnyen befejezhető, ha közvetlenül a szaxofontot használja a minta betöltése után. Másrészt, ha az összegyűjtendő céltermék a B savas komponens, akkor a rögzítési kiadási módot csak a kísérleti lépések enyhe beállításával lehetne alkalmazni: amikor a mintát a szaxofontra töltötték, és az A semleges komponenst normál fázisú szerves oldószerekkel teljesen eluálódtak, és a mozgó fázisra váltották a metanol-oldatot, amely 5% -os escelsavsavat tartalmaz. A mozgó fázisban lévő acetát -ionok a B komponenssel versenyeznek a kvaterner amin -ioncsoportokhoz való kötődéshez a SAX patron helyhez kötött fázisán, ezáltal eluálva a B komponenst a patronból, hogy megkapjuk a célterméket. A minta kromatogramját ioncserélő üzemmódban elválasztva a 7. ábra mutatta.
7. ábra. A B komponens flash kromatogramja ioncserélő üzemmódban eluált egy SAX patronon.
Összegezve, a savas vagy semleges mintát a SAX patronnal gyorsan tisztíthatjuk, a normál fázisú patronokkal kombinálva, különféle tisztítási stratégiák felhasználásával. Ezenkívül a Sepabean ™ gép vezérlőszoftverébe beépített teljes hullámhosszú szkennelési szolgáltatás segítségével az eluált frakciók jellemző abszorpciós spektruma könnyen összehasonlítható és megerősíthető, segítve a kutatókat az eluált frakciók összetételének és tisztaságainak meghatározásában, és ezáltal javítva a munka hatékonyságát.
| Tételszám | Oszlopméret | Áramlási sebesség (ml/perc) | Max. Nyomás (PSI/bár) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
2. táblázat. Sepaflash kötött sorozatú Sax Flash patronok. Csomagolóanyagok: ultra-tiszta szabálytalan szaxofonkötésű szilícium-dioxid, 40-63 μm, 60 Å.
További információk a Sepabean ™ részletes előírásairólA gép, vagy a Sepaflash sorozatú flash patronok megrendelési információk, kérjük, látogasson el weboldalunkra.
A postai idő: november 09-2018