Rui Huang, Bo Xu
Alkalmazási K + F központ
Bevezetés
A peptid egy aminosavakból álló vegyület, amelynek mindegyike egyedi fizikai és kémiai tulajdonságokkal rendelkezik, mivel a szekvenciát a különféle típusú aminosavmaradékok és sorrendek vannak. A szilárd fázisú kémiai szintézis kialakulásával a különféle aktív peptidek kémiai szintézise nagy előrelépést ért el. A peptid szilárd fázis -szintézissel kapott bonyolult összetétele miatt azonban a végterméket megbízható elválasztási módszerekkel kell tisztítani. A peptidek általánosan alkalmazott tisztítási módszerek közé tartozik az ioncserélő kromatográfia (IEC) és a fordított fázisú, nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (RP-HPLC), amelyek hátrányai vannak az alacsony mintavételi kapacitás hátrányaival, az elválasztási tápközegek magas költségeivel, a bonyolult és a költséges elválasztó berendezésekkel, stb. A kis molekulájú peptidek gyors megtisztításával kapcsolatos technológiákhoz, és a sikeres alkalmazást, a sikeres alkalmazást stb. A Sepaflash RP C18 patronot felhasználták a timopentin (TP-5) gyors tisztításához, és a célterméknek megfelelõen megfeleltek a követelményeknek.
1. ábra.
20 típusú aminosav létezik, amelyek gyakoriak a peptidek összetételében. Ezeket az aminosavakat a következő csoportokra lehet osztani polaritásuk és sav-bázis tulajdonságaik szerint: nem poláris (hidrofób), poláris (nem feltöltött), savas vagy bázikus (az 1. ábrán látható módon). Egy peptid -szekvenciában, ha a szekvenciát alkotó aminosavak többnyire poláris (az 1. ábrán rózsaszín színű jelöléssel), például cisztein, glutamin, aszparagin, szerin, treonin, tirozin stb., Akkor ennek a peptidnek erős polaritása lehet, és vízben erősen oldódik. Az erős poláris peptidminták megtisztítási eljárása során fordított fázisú kromatográfiával egy hidrofób fázis-összeomlásnak nevezett jelenség fordul elő (lásd a Santai Technologies korábban közzétett alkalmazás megjegyzését: hidrofób fázis-összeomlás, AQ megfordított fáziskromatográfiás oszlopok és alkalmazásuk). A szokásos C18 oszlopokkal összehasonlítva a továbbfejlesztett C18AQ oszlopok a legmegfelelőbbek az erős poláris vagy hidrofil minták tisztítására. Ebben a bejegyzésben egy erős poláris peptidet használtunk mintának, és egy C18AQ oszlop segítségével tisztították. Ennek eredményeként a céltermék megfelel a követelményeknek, és felhasználható a következő kutatásban és fejlesztésben.
| Eszköz | Napos™ ™2. gép | |||
| Patronok | 12 g Sepaflash C18 RP flash patron (gömb alakú szilícium-dioxid, 20-45 μm, 100 Å, rendeljen Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP flash patron (gömb alakú szilícium-dioxid, 20-45 μm, 100 Å, megrendelés száma: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Hullámhossz | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mozgófázis | A oldószer: víz B oldószer: acetonitril | |||
| Áramlási sebesség | 15 ml/perc | 20 ml/perc | ||
| Minta terhelés | 30 mg | |||
| Gradiens | Idő (CV) | B oldószer (%) | Idő (perc) | B oldószer (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Eredmények és megbeszélés
A poláris peptidminta tisztítási teljesítményének összehasonlításához a szokásos C18 oszlop és a C18AQ oszlop között egy szokásos C18 oszlopot használtunk a minta flash tisztításához kezdetként. Amint az a 2. ábrán látható, a C18 láncok hidrofób fázis -összeomlásának köszönhetően a nagy vizes arány által okozott, a mintát alig tartották meg a szokásos C18 patronon, és a mobil fázis közvetlenül eluálta. Ennek eredményeként a mintát nem választották el és tisztították hatékonyan.
2. ábra. A minta flash kromatogramja egy szokásos C18 patronon.
Ezután egy C18AQ oszlopot használtunk a minta flash tisztításához. Amint a 3. ábrán látható, a peptidet hatékonyan megtartották az oszlopon, majd eluálódtak. A célterméket elválasztottuk a nyers minta szennyeződéseitől és összegyűjtöttük. A liofilizáció után, majd a HPLC elemzése után a tisztított termék tisztaságának 98,2% -a van, és tovább lehet felhasználni a következő lépéskutatáshoz és fejlesztéshez.
3. ábra. A minta flash kromatogramja egy C18AQ patronon.
Összegezve, a Sepaflash C18AQ RP flash patron a Sepabean flash kromatográfiás rendszerével kombinálva kombinálva™ ™A gép gyors és hatékony megoldást kínálhat az erős poláris vagy hidrofil minták tisztítására.
Van egy sorozat a Sepaflash C18AQ RP flash patronokból, amelyek a Santai technológiától eltérő specifikációkkal rendelkeznek (a 2. táblázat szerint).
| Tételszám | Oszlopméret | Áramlási sebesség (ml/perc) | Max. Nyomás (PSI/bár) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
2. táblázat. Sepaflash C18AQ RP flash patronok. Csomagolóanyagok: Nagy hatékonyságú gömb alakú C18 (aq) -kötésű szilícium-dioxid, 20-45 μm, 100 Å.
A Sepabean ™ gép részletes specifikációival vagy a Sepaflash sorozat Flash Patronges megrendelési információkkal kapcsolatos további információkért látogasson el weboldalunkra.
A postai idő: október 12-2018