Hongcheng wang, bo xu
Alkalmazási K + F központ
Bevezetés
A helyhez kötött fázis és a mozgó fázis relatív polaritásai szerint a folyadékkromatográfia felosztható normál fáziskromatográfiára (NPC) és fordított fáziskromatográfiára (RPC). Az RPC esetében a mozgó fázis polaritása erősebb, mint az álló fázisnál. Az RPC nagy hatékonyságának, jó felbontásának és egyértelmű retenciós mechanizmusának köszönhetően a folyadékkromatográfiás elválasztási módokban a legszélesebb körben használt. Therefore RPC is suitable for the separation and purification of various polar or non-polar compounds, including alkaloids, carbohydrates, fatty acids, steroids, nucleic acids, amino acids, peptides, proteins, etc. In RPC, the most commonly used stationary phase is the silica gel matrix which is bonded with various functional groups, including C18, C8, C4, phenyl, cyano, Amino stb. Ezen kötött funkcionális csoportok között a legszélesebb körben használt C18. A becslések szerint az RPC több mint 80% -a használja a C18 kötött fázist. Ezért a C18 kromatográfiás oszlop minden laboratórium számára kötelező univerzális oszlopgá vált.
Noha a C18 oszlop nagyon széles körben használható, azonban néhány olyan mintára, amely nagyon poláris vagy nagyon hidrofil, a szokásos C18 oszlopoknak problémái lehetnek, ha az ilyen minták tisztítására használják. Az RPC -ben az általánosan használt elúciós oldószereket polaritásuk szerint lehet megrendelni: víz <metanol <acetonitril <etanol <tetrahidrofurán <izopropanol. Annak érdekében, hogy a minták oszlopán (erős poláris vagy erősen hidrofil) jó visszatartást biztosítsanak, nagy mennyiségű vizes rendszerre van szükség a mozgófázisként történő felhasználáshoz. Ha azonban tiszta vízrendszert (beleértve a tiszta vizet vagy a tiszta sóoldatot) használják a mozgófázisként, a C18 oszlop helyhez kötött fázisának hosszú szénlánca hajlamos elkerülni a vizet és keverni egymással, ami az oszlop visszatartási képességének azonnali csökkenését eredményezi, vagy akár nem visszatartást sem. Ezt a jelenséget „hidrofób fázis -összeomlásnak” nevezzük (amint az az 1. ábra bal oldalán látható). Noha ez a helyzet visszafordítható, ha az oszlopot szerves oldószerekkel, például metanollal vagy acetonitrilrel mossák, ez mégis károsodhat az oszlopban. Ezért megakadályozni kell ezt a helyzetet.
1. ábra. A szilikagél felületén lévő kötött fázisok vázlatos diagramja a szokásos C18 oszlopban (balra) és a C18AQ oszlopban (jobbra).
A fent említett problémák kezelése érdekében a kromatográfiás csomagolóanyagok gyártói technikai fejlesztéseket hajtottak végre. Az egyik ilyen fejlesztés a szilícium -dioxid -mátrix felületén néhány módosítás, például a hidrofil cianocsoportok bevezetése (amint az az 1. ábra jobb részén látható), hogy a szilikagél felülete hidrofilebbé váljon. Így a szilícium -dioxid felületén lévő C18 láncok nagyon vizes körülmények között teljes mértékben meghosszabbíthatók, és a hidrofób fázis -összeomlás elkerülhető. Ezeket a módosított C18 oszlopokat vizes C18 oszlopoknak nevezzük, nevezetesen a C18AQ oszlopoknak, amelyeket rendkívül vizes elúciós körülményekhez terveztek, és elviselhetik a 100% -os vizes rendszert. A C18AQ oszlopokat széles körben alkalmazták az erős poláris vegyületek, beleértve a szerves savakat, peptideket, nukleozidokat és vízben oldódó vitaminokat, elválasztott és tisztításában és tisztításában.
A sótartozás a C18AQ oszlopok egyik tipikus alkalmazása a minták vaku tisztításában, amely eltávolítja a minta oldószer só- vagy pufferkomponenseit, hogy megkönnyítse a minta alkalmazását a következő vizsgálatok során. Ebben a bejegyzésben mintát használták a ragyogó kék FCF -et, amelynek mint mintát, és a C18AQ oszlopon tisztítottuk. A minta oldószerét pufferoldatból szerelő oldószerrel helyettesítettük, ezáltal megkönnyítve a következő forgó párolgást, valamint az oldószerek megtakarítását és a működési időt. Ezenkívül a minta tisztaságát javítottuk a mintában levő szennyeződések eltávolításával.
Kísérleti szakasz
2. ábra. A minta kémiai szerkezete.
A ragyogó kék FCF -et használták mintának ebben a bejegyzésben. A nyers minta tisztaságát 86% volt, és a minta kémiai szerkezetét a 2. ábrán mutatjuk be. A minta oldat előkészítéséhez 300 mg poros durva szilárd szilárd anyagot oldottunk 1 M NAH2PO4 pufferoldatban, és jól megrázkódtak, hogy teljesen tiszta oldatgá váljanak. A minta oldatot ezután egy injektorral injektáltuk a Flash oszlopba. A flash tisztítás kísérleti beállítását az 1. táblázat tartalmazza.
| Eszköz | Sepabean ™ gép2 | |||
| Patronok | 12 g Sepaflash C18 RP flash patron (gömb alakú szilícium-dioxid, 20-45 μm, 100 Å, rendelési szám: SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP flash patron (gömb alakú szilícium-dioxid, 20-45 μm, 100 Å, megrendelés száma: SW-5222-012-SP (AQ)） | ||
| Hullámhossz | 254 NM | |||
| Mozgófázis | Oldószer A ： víz B oldószer ： metanol | |||
| Áramlási sebesség | 30 ml/perc | |||
| Minta terhelés | 300 mg (ragyogó kék FCF, 86%tisztasággal) | |||
| Gradiens | Idő (CV) | B oldószer (%) | Idő (CV) | B oldószer (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Eredmények és megbeszélés
A minta sótalanításához és tisztításához egy sepaflash C18AQ RP flash patronot használtunk. Lépés -gradienst használtunk, amelyben tiszta vizet használtunk mobil fázisként az eluálás kezdetén, és 10 oszlopmennyiségre (CV) futtattak. Amint az a 3. ábrán látható, amikor a mobil fázisú tiszta vizet használja, a mintát teljesen megtartottuk a flash patronon. Ezután a mobil fázisban lévő metanolt közvetlenül 100% -ra növelték, és a gradienst 7,5 cv -en tartottuk. A mintát 11,5 és 13,5 CV között eluáltuk. Az összegyűjtött frakciókban a mintaoldatot a NAH2PO4 puffer oldatból metanolba cseréltük. A nagyon vizes oldattal összehasonlítva a metanolt sokkal könnyebb volt eltávolítani a forgó párolgással a következő lépésben, ami megkönnyíti a következő kutatást.
3. ábra. A minta flash kromatogramja egy C18AQ patronon.
A C18AQ patron és a szokásos C18 patronok retenciós viselkedésének összehasonlításához az erős polaritású mintákhoz párhuzamos összehasonlítási tesztet végeztünk. Egy Sepaflash C18 RP flash patronot használtunk, és a minta flash kromatogramját a 4. ábrán mutatjuk be. A szokásos C18 patronok esetében a legmagasabb tolerált vizes fázisarány körülbelül 90%. Ezért a Start gradienst 10% metanolra állítottuk 90% vízben. Amint az a 4. ábrán látható, a C18 láncok hidrofób fázis -összeomlásának köszönhetően a nagy vizes arány által okozott, a mintát alig tartották meg a szokásos C18 patronon, és a mobil fázis közvetlenül eluálta. Ennek eredményeként a minta sótalanításának vagy tisztításának működését nem lehet befejezni.
4. ábra. A minta flash kromatogramja egy szokásos C18 patronon.
Összehasonlítva a lineáris gradienssel, a lépésgradiens használata a következő előnyökkel rendelkezik:
1. Az oldószerfelhasználás és a minta tisztításának futási ideje csökken.
2.
3. Az összegyűjtött termék metanolban van, amelyet könnyű elpárologni, így a szárítási idő csökken.
Összegezve, a minta tisztításához, amely erősen poláris vagy erősen hidrofil, a Sepaflash C18AQ RP flash patronokkal kombinálva a SEPABEAN ™ géppel kombinálva gyors és hatékony megoldást kínálhat.
A Sepaflash Bonded Series C18 RP flash patronokról
Van egy sorozat a Sepaflash C18AQ RP flash patronokból, amelyek a Santai technológiától eltérő specifikációkkal rendelkeznek (a 2. táblázat szerint).
| Tételszám | Oszlopméret | Áramlási sebesség (ml/perc) | Max. Nyomás (PSI/bár) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
2. táblázat. Sepaflash C18AQ RP flash patronok.
Csomagolóanyagok: Nagy hatékonyságú gömb alakú C18 (aq) -kötésű szilícium-dioxid, 20-45 μm, 100 Å.
logas (amint azt a 2. táblázat mutatja).
A postai idő: 2018. augusztus-27