Rui huang, bo xu
Aplikasyon R & D Sant
Prezantasyon
Yon peptides se yon konpoze ki konpoze de asid amine, chak nan yo ki gen inik pwopriyete fizik ak chimik akòz diferan kalite yo ak lòd nan résidus asid amine ki konstitye sekans li yo. Avèk devlopman sentèz chimik faz solid, sentèz chimik divès kalite peptides aktif te fè gwo pwogrè. Sepandan, akòz konpozisyon an konplike nan peptides a jwenn nan sentèz faz solid, yo ta dwe pwodwi final la dwe pirifye pa metòd separasyon serye. Metòd pou pirifye souvan itilize pou peptides gen ladan ion echanj kwomatografi (IEC) ak ranvèse-faz segondè pèfòmans likid kwomatografi (RP-HPLC), ki gen dezavantaj yo nan kapasite ki ba loading echantiyon, gwo pwi de medya separasyon, konplike ak ekipman Separasyon Sentesse. Teknoloji, nan ki te yon Sepaflash RP C18 katouch itilize pou pirifye rapid nan timopentin (TP-5) ak pwodwi a sib satisfè kondisyon yo te jwenn.
Figi 1. 20 Komen asid amine (repwodwi soti nan www.bachem.com).
Gen 20 kalite asid amine ki komen nan konpozisyon peptides yo. Sa yo asid amine ka divize an gwoup sa yo dapre polarite yo ak pwopriyete asid-baz: ki pa polè (idrofob), polè (uncharged), asid oswa debaz (jan yo montre nan Figi 1). Nan yon sekans peptides, si asid amine yo ki konstitye sekans lan se sitou moun polè (tankou make nan koulè woz nan Figi 1), tankou cystine, glutamin, asparajin, serin, threonine, tirozin, elatriye Pandan pwosedi pou pirifye a pou sa yo fò echantiyon peptides polè pa ranvèse-faz kwomatografi, yon fenomèn ki rele efondreman idrofob faz ap fèt (al gade nan yon nòt aplikasyon deja pibliye pa Santai Technologies: idrofob faz efondreman, AQ ranvèse faz kolòn kromatografi ak aplikasyon yo). Konpare ak kolòn yo regilye C18, amelyore kolòn yo C18AQ yo pi apwopriye pou pirifye nan fò polè oswa echantiyon idrofil. Nan pòs sa a, yo te itilize yon fò peptides polè kòm echantiyon an ak pirifye pa yon kolòn C18AQ. Kòm yon rezilta, pwodwi a sib satisfè kondisyon yo te jwenn epi yo ka itilize nan rechèch sa yo ak devlopman.
| Enstriman | Sepabean™machin 2 | |||
| Katouch | 12 G Sepaflash C18 RP Flash Cartouche (esferik silica, 20-45 μm, 100 Å, lòd Nunber: SW-522-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash Cartouche (esferik silica, 20-45 μm, 100 Å, nimewo lòd: SW-522-012-SP (aq)) | ||
| Longèdonn | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Faz mobil | Sòlvan A: Dlo Sòlvan B: acetonitrile | |||
| To koule | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Echantiyon loading | 30 mg | |||
| Graden | Tan (CV) | Sòlvan B (%) | Tan (min) | Sòlvan B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezilta ak diskisyon
Pou konpare pèfòmans pou pirifye pou echantiyon peptides polè ant kolòn regilye C18 ak kolòn C18AQ, nou itilize yon kolòn C18 regilye pou pirifye flash echantiyon an kòm yon kòmansman. Jan yo montre nan Figi 2, akòz efondreman nan faz idrofob nan chenn yo C18 ki te koze pa rapò segondè akeuz, yo te echantiyon an apèn double klas sou katouch la regilye C18 e li te dirèkteman elue soti nan faz mobil lan. Kòm yon rezilta, echantiyon an pa te efektivman separe ak pirifye.
Figi 2. Kromatogram flash nan echantiyon an sou yon katouch C18 regilye.
Next, nou itilize yon kolòn C18AQ pou pirifye nan flash nan echantiyon an. Jan yo montre nan Figi 3, yo te peptides a efektivman double klas sou kolòn nan ak Lè sa a, eluted soti. Te pwodwi a sib separe de enpurte yo nan echantiyon an anvan tout koreksyon ak kolekte. Apre lyofilizasyon ak Lè sa a, analize pa HPLC, pwodwi a pirifye gen yon pite nan 98.2% epi yo ka plis itilize pou rechèch pwochen etap ak devlopman.
Figi 3. Kromatogram flash nan echantiyon an sou yon katouch C18AQ.
An konklizyon, Sepaflash C18AQ RP Flash katouch konbine avèk sistèm nan kwomatografi flash Sepabean™Machin te kapab ofri yon solisyon vit ak efikas pou pirifye nan fò polè oswa echantiyon idrofil.
Gen yon seri de katouch Sepaflash C18AQ RP Flash ak espesifikasyon diferan nan teknoloji Santai (jan yo montre nan tablo 2).
| Nimewo atik | Gwosè kolòn | To koule (ml/min) | Max.pressure (psi/ba) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tablo 2. Sepaflash C18AQ RP Flash katouch. Anbalaj materyèl: segondè-efikasite esferik C18 (aq) -bonded silica, 20-45 μm, 100 Å.
Pou plis enfòmasyon sou espesifikasyon detaye nan Sepabean ™ machin, oswa enfòmasyon ki kòmann -nan sou Seri Sepaflash katouch Flash, tanpri vizite sit entènèt nou an.
Post tan: Oct-12-2018