Rui Huang, Bo Xu
Aplikasyon R&D Sant
Entwodiksyon
Yon peptide se yon konpoze ki konpoze de asid amine, chak nan yo ki gen pwopriyete inik fizik ak chimik akòz diferan kalite ak lòd nan rezidi asid amine ki konstitye sekans li yo.Avèk devlopman nan sentèz chimik faz solid, sentèz chimik divès peptides aktif te fè gwo pwogrè.Sepandan, akòz konpozisyon konplike nan peptide a jwenn nan sentèz faz solid, pwodwi final la ta dwe pirifye pa metòd separasyon serye.Metòd pirifikasyon yo souvan itilize pou peptides yo enkli chromatografi echanj ion (IEC) ak ranvèse-faz segondè pèfòmans chromatografi likid (RP-HPLC), ki gen dezavantaj yo nan kapasite chaj echantiyon ki ba, gwo pri nan medya separasyon, ekipman separasyon konplike ak koute chè, elatriye Pou pirifikasyon rapid nan ti molekil peptides (MW < 1 kDa), Santai Technologies te pibliye yon ka aplikasyon siksè, kote yo te itilize yon katouch SepaFlash RP C18 pou pirifye rapid thymopentin (TP-5) ak pwodwi sib satisfè kondisyon yo te jwenn.
Figi 1. 20 komen asid amine (repwodwi nan www.bachem.com).
Gen 20 kalite asid amine ki komen nan konpozisyon peptides yo.Asid amine sa yo ka divize an gwoup sa yo dapre polarite yo ak pwopriyete asid-baz yo: ki pa polè (idrofob), polè (pa chaje), asid oswa debaz (jan yo montre nan Figi 1).Nan yon sekans peptide, si asid amine ki konstitye sekans lan se sitou polè (jan yo make nan koulè woz nan Figi 1), tankou Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, elatriye Lè sa a, peptide sa a ta ka gen yon fò. polarite epi yo dwe trè idrosolubl nan dlo.Pandan pwosedi pou pirifye pou echantiyon peptide polè fò sa yo pa chromatografi ranvèse-faz, yon fenomèn ki rele faz idrofob efondreman pral rive (al gade nan yon nòt aplikasyon ki te pibliye deja pa Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Colonns and Their Applications).Konpare ak kolòn C18 regilye yo, kolòn C18AQ amelyore yo pi apwopriye pou pirifye echantiyon fò polè oswa idrofil.Nan pòs sa a, yo te itilize yon peptide polè fò kòm echantiyon ak pirifye pa yon kolòn C18AQ.Kòm yon rezilta, pwodwi sib la satisfè kondisyon yo te jwenn epi yo ka itilize nan rechèch ak devlopman sa yo.
| Enstriman | SepaBean™machin 2 | |||
| Katouch | 12 g SepaFlash C18 RP katouch flash (silik esferik, 20 - 45 μm, 100 Å, Order nunber：SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP katouch flash (silik esferik, 20 - 45 μm, 100 Å, Nimewo lòd: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Longèdonn | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Faz mobil | Solvang A: Dlo Solvan B: Acetonitrile | |||
| Pousantaj koule | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Egzanp chaje | 30 mg | |||
| Gradyan | Tan (CV) | Solvan B (%) | Tan (min) | Solvan B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezilta ak Diskisyon
Pou konpare pèfòmans pirifikasyon pou echantiyon peptide polè a ant kolòn C18 regilye ak kolòn C18AQ, nou itilize yon kolòn C18 regilye pou pirifikasyon flash echantiyon an kòm yon kòmansman.Jan yo montre nan Figi 2, akòz efondreman faz idrofob chèn C18 yo ki te koze pa gwo rapò akeuz, echantiyon an te apèn kenbe sou katouch C18 regilye a epi li te dirèkteman elimine pa faz mobil lan.Kòm yon rezilta, echantiyon an pa te efektivman separe ak pirifye.
Figi 2. Kwomatogram flash echantiyon an sou yon katouch C18 regilye.
Apre sa, nou te itilize yon kolòn C18AQ pou pirifikasyon flash echantiyon an.Jan yo montre nan Figi 3, peptide a te efektivman kenbe sou kolòn nan ak Lè sa a, eliye soti.Pwodwi sib la te separe de impuretés nan echantiyon kri a epi kolekte.Apre lyofilizasyon ak Lè sa a, analize pa HPLC, pwodwi a pirifye gen yon pite nan 98.2% epi li ta ka plis itilize pou pwochen etap rechèch ak devlopman.
Figi 3. Kwomatogram flash echantiyon an sou yon katouch C18AQ.
An konklizyon, SepaFlash C18AQ RP katouch flash konbine avèk sistèm chromatografi flash SepaBean.™machin te kapab ofri yon solisyon rapid ak efikas pou pirifye echantiyon fò polè oswa idrofil.
Gen yon seri katouch flash SepaFlash C18AQ RP ak espesifikasyon diferan nan Teknoloji Santai (jan yo montre nan Tablo 2).
| Nimewo Atik | Gwosè kolòn | Pousantaj koule (mL/min) | Max.Pressure (psi/ba) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tablo 2. Katouch flash SepaFlash C18AQ RP.Materyèl anbalaj: High-efikasite esferik C18(AQ)-kole silica, 20 - 45 μm, 100 Å.
Pou plis enfòmasyon sou espesifikasyon detaye machin SepaBean™, oswa enfòmasyon sou kòmande sou katouch flash seri SepaFlash, tanpri vizite sit entènèt nou an.
Tan poste: Oct-12-2018