Hongcheng Wang, Bo Xu
Aplikasyon R&D Sant
Entwodiksyon
Dapre polarite relatif faz estasyonè ak faz mobil, likid chromatografi ka divize an nòmal faz chromatografi (NPC) ak ranvèse faz chromatografi (RPC).Pou RPC, polarite faz mobil la pi fò pase faz estasyonè a.RPC te vin youn ki pi lajman itilize nan mòd separasyon chromatografi likid akòz efikasite segondè li yo, bon rezolisyon ak mekanis retansyon klè.Se poutèt sa, RPC apwopriye pou separasyon ak pirifikasyon divès kalite konpoze polè oswa ki pa polè, ki gen ladan alkalwa, idrat kabòn, asid gra, estewoyid, asid nikleyik, asid amine, peptides, pwoteyin, elatriye. Nan RPC, faz ki pi souvan itilize estasyonè a se matris la jèl silica ki se estokaj ak divès gwoup fonksyonèl, ki gen ladan C18, C8, C4, fenil, cyano, amine, elatriye.Li estime ke plis pase 80% nan RPC yo kounye a ap itilize faz C18 estokaj.Se poutèt sa, kolòn kwomatografi C18 te vin tounen yon kolòn inivèsèl ki dwe genyen pou chak laboratwa.
Malgre ke kolòn C18 ka itilize nan yon pakèt aplikasyon pou, sepandan, pou kèk echantiyon ki trè polè oswa trè idrofil, kolòn C18 regilye yo ka gen pwoblèm lè yo itilize pou pirifye echantiyon sa yo.Nan RPC, solvants elisyon yo souvan itilize yo ka bay lòd dapre polarite yo: dlo < metanol < acetonitrile < etanòl < tetrahydrofuran < izopropanol.Pou asire bon retansyon sou kolòn nan pou echantiyon sa yo (fò polè oswa trè idrofil), gwo pwopòsyon nan sistèm akeuz nesesè yo dwe itilize kòm faz mobil la.Sepandan, lè w ap itilize sistèm dlo pi (ki gen ladan dlo pi oswa solisyon sèl) kòm faz mobil, chèn kabòn long sou faz estasyonè kolòn C18 la gen tandans pou evite dlo a ak melanje youn ak lòt, sa ki lakòz yon diminisyon enstantane nan la. kapasite retansyon nan kolòn nan oswa menm pa gen okenn retansyon.Yo rele fenomèn sa a "effondreman faz idrofob" (jan yo montre nan pati gòch Figi 1).Menm si sitiyasyon sa a revèsib lè kolòn nan lave ak solvang òganik tankou metanol oswa asetonitrile, li toujou ka lakòz domaj nan kolòn nan.Se poutèt sa, li nesesè pou anpeche sitiyasyon sa a rive.
Figi 1. Dyagram nan chema nan faz yo estokaj sou sifas la nan jèl silica nan kolòn regilye C18 (agòch) ak kolòn C18AQ (adwat).
Pou adrese pwoblèm ki mansyone anwo yo, manifaktirè materyèl anbalaj kwomatografik yo te fè amelyorasyon teknik.Youn nan amelyorasyon sa yo ap fè kèk modifikasyon sou sifas matris silica a, tankou entwodiksyon gwoup cyano idrofil (jan yo montre nan pati dwat Figi 1), pou fè sifas jèl silica a pi idrofil.Se konsa, chenn C18 yo sou sifas silica a ta ka konplètman pwolonje anba kondisyon trè akeuz ak efondreman faz idrofob la ka evite.Kolòn sa yo modifye C18 yo rele kolòn akeuz C18, sètadi kolòn C18AQ, ki fèt pou kondisyon elisyon trè akeuz epi yo ka tolere 100% sistèm akeuz.Kolòn C18AQ yo te lajman aplike nan separasyon ak pirifikasyon nan konpoze polè fò, ki gen ladan asid òganik, peptides, nukleozid ak vitamin idrosolubl.
Desalting se youn nan aplikasyon tipik nan kolòn C18AQ nan pirifikasyon flash pou echantiyon yo, ki retire sèl oswa eleman tanpon nan sòlvan echantiyon an pou fasilite aplikasyon echantiyon an nan etid ki vin apre yo.Nan pòs sa a, Brilliant Blue FCF a ak polarite fò te itilize kòm echantiyon an epi pirifye sou kolòn C18AQ la.Sòlvan echantiyon an te ranplase pa sòlvan òganik ki soti nan solisyon tanpon, kidonk fasilite evaporasyon rotary sa a kòm byen ke ekonomize solvang ak tan opere.Anplis de sa, pite echantiyon an te amelyore lè yo retire kèk enpurte nan echantiyon an.
Seksyon eksperimantal
Figi 2. Estrikti chimik echantiyon an.
Brilliant Blue FCF te itilize kòm echantiyon nan pòs sa a.Pite echantiyon anvan tout koreksyon an te 86% epi yo te montre estrikti chimik echantiyon an nan Figi 2. Pou prepare solisyon echantiyon an, 300 mg solid brit briyan briyan Blue FCF te fonn nan solisyon tanpon 1 M NaH2PO4 epi li tranble byen pou l vin tounen. yon solisyon konplètman klè.Lè sa a, solisyon echantiyon an te sou fòm piki nan kolòn nan flash pa yon piki.Se konfigirasyon eksperimantal pirifikasyon flash la ki nan lis nan Tablo 1.
| Enstriman | SepaBean™ machin2 | |||
| Katouch | 12 g SepaFlash C18 RP katouch flash (silik esferik, 20 - 45 μm, 100 Å, Nimewo lòd: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP katouch flash (silik esferik, 20 - 45 μm, 100 Å, Nimewo lòd: SW-5222-012-SP(AQ)） | ||
| Longèdonn | 254 nm | |||
| Faz mobil | Solvan A: Dlo Solvan B: Methanol | |||
| Pousantaj koule | 30 ml/min | |||
| Egzanp chaje | 300 mg (Brilliant Blue FCF ak pite a nan 86%) | |||
| Gradyan | Tan (CV) | Solvan B (%) | Tan (CV) | Solvan B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Rezilta ak Diskisyon
Yo te itilize yon katouch flash SepaFlash C18AQ RP pou echantiyon desaling ak pirifikasyon.Etap gradyan te itilize nan ki dlo pi yo te itilize kòm faz mobil nan kòmansman an nan elisyon epi kouri pou 10 volim kolòn (CV).Jan yo montre nan Figi 3, lè w ap itilize dlo pi kòm faz mobil, echantiyon an te konplètman konsève sou katouch flash la.Apre sa, metanol la nan faz mobil la dirèkteman ogmante a 100% epi yo te kenbe gradyan an pou 7.5 CV.Yo te elimine echantiyon an soti nan 11.5 a 13.5 CV.Nan fraksyon yo kolekte, solisyon echantiyon an te ranplase soti nan solisyon tanpon NaH2PO4 nan metanol.Konpare ak solisyon trè akeuz, metanol te pi fasil yo dwe retire pa evaporasyon rotary nan etap ki vin apre a, ki fasilite rechèch sa yo.
Figi 3. Kwomatogram flash echantiyon an sou yon katouch C18AQ.
Pou konpare konpòtman retansyon katouch C18AQ ak katouch C18 regilye pou echantiyon polarite fò, yo te fè tès konparezon paralèl.Yo te itilize yon katouch flash SepaFlash C18 RP epi yo montre chromatogram flash pou echantiyon an nan Figi 4. Pou katouch C18 regilye, rapò faz akeuz ki pi wo tolere se apeprè 90%.Se poutèt sa, gradyan kòmansman an te mete nan 10% metanol nan 90% dlo.Jan yo montre nan Figi 4, akòz efondreman faz idrofob chèn C18 yo ki te koze pa gwo rapò akeuz, echantiyon an te apèn kenbe sou katouch C18 regilye a epi li te dirèkteman elimine pa faz mobil lan.Kòm yon rezilta, operasyon an nan echantiyon desaling oswa pirifikasyon pa ka ranpli.
Figi 4. Kwomatogram flash echantiyon an sou yon katouch C18 regilye.
Konpare ak gradyan lineyè, itilizasyon gradyan etap gen avantaj sa yo:
1. Itilizasyon sòlvan ak tan kouri pou pirifikasyon echantiyon redwi.
2. Pwodwi sib la elite nan yon pik byen file, ki diminye volim fraksyon kolekte epi konsa fasilite evaporasyon rotary sa a kòm byen ke ekonomize tan.
3. pwodwi a kolekte se nan méthanol ki fasil pou evapore, konsa siye tan redwi.
An konklizyon, pou pirifye echantiyon an ki fòtman polè oswa trè idrofil, katouch flash SepaFlash C18AQ RP konbine avèk sistèm preparasyon flash chromatografi SepaBean™ Machine ka ofri yon solisyon rapid ak efikas.
Konsènan katouch flash SepaFlash Bonded Series C18 RP
Gen yon seri katouch flash SepaFlash C18AQ RP ak espesifikasyon diferan nan Teknoloji Santai (jan yo montre nan Tablo 2).
| Nimewo Atik | Gwosè kolòn | Pousantaj koule (mL/min) | Max.Pressure (psi/ba) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tablo 2. Katouch flash SepaFlash C18AQ RP.
Materyèl anbalaj: High-efikasite esferik C18(AQ)-kole silica, 20 - 45 μm, 100 Å.
loji (jan yo montre nan Tablo 2).
Tan poste: Out-27-2018