Hongcheng Wang, Bo Xu
Aplikasyon R & D Sant
Prezantasyon
Dapre polarite relatif yo nan faz estasyonè ak faz mobil, ka kwomatografi likid dwe divize an kwomatografi faz nòmal (NPC) ak ranvèse kwomatografi faz (RPC). Pou RPC, polarite a nan faz mobil lan se pi fò pase sa yo ki an faz nan estasyonè. RPC te vin yon sèl ki pi lajman itilize nan mòd separasyon kromatografi likid akòz efikasite segondè li yo, bon rezolisyon ak mekanis retansyon klè. Se poutèt sa, RPC se apwopriye pou separasyon an ak pou pirifye nan divès kalite polè oswa ki pa polè konpoze, ki gen ladan alkaloid, idrat kabòn, asid gra, estewoyid, asid nikleyik, asid amine, peptides, pwoteyin, elatriye nan RPC, ki pi souvan itilize faz estasyonè a se silica matris, C1, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8, C8. Cyano, amine, elatriye Pami gwoup sa yo estokaj fonksyonèl, yon sèl ki pi lajman itilize se C18. Li estime ke plis pase 80% nan RPC yo kounye a se lè l sèvi avèk C18 faz estokaj. Se poutèt sa, kolòn C18 kwomatografi te vin yon dwe-gen kolòn inivèsèl pou chak laboratwa.
Malgre ke kolòn C18 ka itilize nan yon seri trè lajè nan aplikasyon pou, sepandan, pou kèk echantiyon ki se trè polè oswa trè idrofil, regilye kolòn C18 ka gen pwoblèm lè yo te itilize pirifye echantiyon sa yo. Nan RPC, solvants yo souvan itilize elution ka bay lòd selon polarite yo: dlo <methanol <acetonitrile <etanòl <tetrahydrofuran <isopropanol. Pou asire bon retansyon sou kolòn nan pou echantiyon sa yo (fò polè oswa trè idrofil), segondè pwopòsyon nan sistèm akeuz ki nesesè yo dwe itilize kòm faz mobil lan. Sepandan, lè w ap itilize sistèm dlo pi (ki gen ladan dlo pi oswa solisyon sèl pi bon kalite) kòm faz mobil lan, chèn nan kabòn long sou faz nan estasyonè nan kolòn C18 gen tandans pou fè pou evite dlo a ak melanje youn ak lòt, sa ki lakòz yon diminisyon enstantane nan kapasite a retansyon nan kolòn nan oswa menm pa gen okenn retansyon. Se fenomèn sa a yo rele "efondreman idrofob faz" (jan yo montre nan pati a bò gòch nan Figi 1). Menm si sitiyasyon sa a se revèsib lè se kolòn nan lave ak Solvang òganik tankou methanol oswa acetonitrile, li toujou ka lakòz domaj nan kolòn nan. Se poutèt sa, li nesesè yo anpeche sitiyasyon sa a soti nan pase.
Figi 1. Dyagram schematic de faz yo estokaj sou sifas jèl silica nan kolòn regilye C18 (agòch) ak kolòn C18AQ (adwat).
Pou adrese pwoblèm ki anwo yo mansyone, manifaktirè yo anbalaj kwomatografik materyèl yo te fè amelyorasyon teknik. Youn nan amelyorasyon sa yo ap fè kèk modifikasyon sou sifas matris silica a, tankou entwodiksyon gwoup cyano idrofil (jan yo montre nan bon pati nan Figi 1), pou fè sifas jèl silica a pi idrofil. Se konsa, chenn yo C18 sou sifas la silica ta ka konplètman pwolonje anba kondisyon trè akeuz ak efondreman an faz idrofob ta ka evite. Sa yo kolòn C18 modifye yo rele akeuz kolòn C18, sètadi kolòn C18AQ, ki yo ki fèt pou kondisyon elution trè ake epi yo ka tolere 100% sistèm akeuz. Kolòn C18AQ yo te lajman aplike nan separasyon an ak pou pirifye nan konpoze fò polè, ki gen ladan asid òganik, peptides, nucleosides ak dlo-soluble vitamin.
Desale se youn nan aplikasyon yo tipik nan kolòn C18AQ nan pirifye nan flash pou echantiyon yo, ki retire sèl la oswa eleman tanpon nan sòlvan an echantiyon fasilite aplikasyon an nan echantiyon an nan etid ki vin apre. Nan pòs sa a, yo te briyan FCF a ble ak polarite fò itilize kòm echantiyon an ak pirifye sou kolòn nan C18AQ. Te sòlvan an echantiyon ranplase pa sòlvan òganik soti nan solisyon tanpon, konsa fasilite evaporasyon an Rotary sa yo kòm byen ke ekonomize Solvang ak tan opere. Anplis de sa, yo te pite a nan echantiyon an amelyore pa retire kèk enpurte nan echantiyon an.
Seksyon eksperimantal
Figi 2. Estrikti chimik echantiyon an.
FCF a briyan ble te itilize kòm echantiyon an nan pòs sa a. Pite a nan echantiyon an anvan tout koreksyon te 86% ak estrikti nan chimik nan echantiyon an te montre nan Figi 2. Pou prepare solisyon an echantiyon, 300 mg poud brit solid nan briyan ble FCF te fonn nan 1 M NAH2PO4 solisyon tanpon ak t'ap tranble anba pye yo vin yon solisyon konplètman klè. Te solisyon an echantiyon Lè sa a, sou fòm piki nan kolòn nan flash pa yon piki. Se konfigirasyon an eksperimantal nan pirifye a flash ki nan lis nan tablo a 1.
| Enstriman | Sepabean ™ machin2 | |||
| Katouch | 12 G Sepaflash C18 RP Flash Cartouche (esferik silica, 20-45 μm, 100 Å, nimewo lòd: SW-522-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash Cartouche (esferik silica, 20-45 μm, 100 Å, nimewo lòd: SW-522-012-SP (aq)） | ||
| Longèdonn | 254 nm | |||
| Faz mobil | Sòlvan yon ： dlo Sòlvan B: methanol | |||
| To koule | 30 ml/min | |||
| Echantiyon loading | 300 mg (briyan ble FCF ak pite a nan 86%) | |||
| Graden | Tan (CV) | Sòlvan B (%) | Tan (CV) | Sòlvan B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Rezilta ak diskisyon
Yo te itilize yon katouch Flash Sepaflash C18AQ RP pou echantiyon desale ak pirifye. Te gradyan etap itilize nan ki dlo pi te itilize kòm faz mobil lan nan kòmansman an nan elution ak kouri pou 10 volim kolòn (CV). Jan yo montre nan Figi 3, lè w ap itilize dlo pi kòm faz mobil lan, echantiyon an te konplètman kenbe sou katouch la flash. Next, te methanol la nan faz mobil lan dirèkteman ogmante a 100% ak gradyan an te konsève pou 7.5 CV. Echantiyon an te elue soti nan 11.5 a 13.5 CV. Nan fraksyon yo kolekte, yo te solisyon an echantiyon ranplase soti nan NAH2PO4 solisyon tanpon nan methanol. Konparezon ak solisyon trè akeuz, methanol te pi fasil yo dwe retire pa evaporasyon Rotary nan etap ki vin apre a, ki fasilite rechèch sa yo.
Figi 3. Kromatogram flash nan echantiyon an sou yon katouch C18AQ.
Pou konpare konpòtman an retansyon nan C18AQ katouch ak regilye C18 katouch pou echantiyon nan polarite fò, yo te paralèl tès konparezon fèt. Yo te itilize yon katouch Flash Sepaflash C18 RP epi yo te montre kromatogram flash la pou echantiyon an nan figi 4. Pou katouch C18 regilye, pi wo rapò a tolere faz akeuz se sou 90%. Se poutèt sa, yo te gradyan an kòmanse mete nan 10% methanol nan 90% dlo. Jan yo montre nan Figi 4, akòz efondreman nan faz idrofob nan chenn yo C18 ki te koze pa rapò segondè akeuz, yo te echantiyon an apèn double klas sou katouch la regilye C18 e li te dirèkteman elue soti nan faz mobil lan. Kòm yon rezilta, operasyon an nan echantiyon desale oswa pou pirifye pa ka ranpli.
Figi 1. Kromatogram flash nan echantiyon an sou yon katouch C18 regilye.
Konparezon ak gradyan lineyè, itilizasyon gradyan etap la gen avantaj sa yo:
1. Sòlvan l 'ak kouri tan pou pirifye echantiyon redwi.
2. Pwodwi sib la elut nan yon pik byen file, ki diminye volim nan fraksyon kolekte epi konsa fasilite evaporasyon sa a Rotary kòm byen ke ekonomize tan.
3. Pwodwi a kolekte se nan methanol ki se fasil yo dwe evapore, konsa siye tan se redwi.
An konklizyon, pou pirifye nan echantiyon an ki se fòtman polè oswa trè idrofil, Sepaflash C18AQ RP katouch Flash konbine ak preparatif flash sistèm nan kwomatografi Sepabean ™ machin te kapab ofri yon solisyon vit ak efikas.
Konsènan seri a Sepaflash estokaj C18 RP katouch flash
Gen yon seri de katouch Sepaflash C18AQ RP Flash ak espesifikasyon diferan nan teknoloji Santai (jan yo montre nan tablo 2).
| Nimewo atik | Gwosè kolòn | To koule (ml/min) | Max.pressure (psi/ba) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tablo 2. Sepaflash C18AQ RP Flash katouch.
Anbalaj materyèl: segondè-efikasite esferik C18 (aq) -bonded silica, 20-45 μm, 100 Å.
logy (jan yo montre nan tablo 2).
Post tan: Aug-27-2018