Rui Huang, bo xu
Centar za istraživanje i razvoj prijave
Uvod
Peptid je spoj sastavljen od aminokiselina, od kojih svaka ima jedinstvena fizička i kemijska svojstva zbog različitih vrsta i redoslijeda ostataka aminokiselina koji čine njegov niz. S razvojem kemijske sinteze čvrste faze, kemijska sinteza različitih aktivnih peptida postigla je veliki napredak. Međutim, zbog kompliciranog sastava peptida dobivenog sintezom čvrste faze, konačni proizvod treba pročistiti pouzdanim metodama odvajanja. Najčešće korištene metode peptida uključuju kromatografiju iona za pročišćavanje (IEC) i tekuću kromatografiju visokih performansi s visokim performansama (RP-HPLC), koji imaju nedostatke niskog uzorka kapaciteta opterećenja, visoke troškove medija za odvajanje, kompliciranu i skupu opremu za odvajanje, itd. Za itd. Uspješnu malu pipsu (MW je uspješan (KD-a) PROIZVODNJE PEPCULE-a (KISPIRANJE KASA), SEPAFLASH RP C18 uložak korišten je za brzo pročišćavanje timopentina (TP-5) i dobiven je ciljni proizvod koji ispunjava zahtjeve.
Slika 1. 20 Uobičajene aminokiseline (reproducirane s www.bachem.com).
Postoji 20 vrsta aminokiselina koje su uobičajene u sastavu peptida. Ove aminokiseline mogu se podijeliti u sljedeće skupine prema njihovom svojstvu polariteta i kiseline baze: nepolarno (hidrofobni), polarni (neispunjeni), kiseli ili osnovni (kao što je prikazano na slici 1). U peptidnom nizu, ako su aminokiseline koje čine slijed uglavnom polarne (kao što su označene u ružičastoj boji na slici 1), poput cisteina, glutamina, asparagina, serina, treonina, tirozina itd. Tada bi ovaj peptid mogao imati jak polarat i biti vrlo topljiv u vodi. Tijekom postupka pročišćavanja za ove jake uzorke polarnog peptida kromatografijom obrnute faze, pojavit će se pojava nazvana kolaps hidrofobne faze (pogledajte prethodno objavljenu primjenu SANTAI Technologies: Hydrophobc Faza kolapsa, okrenuli fazni kromatografski stup i njihove primjene). U usporedbi s redovitim C18 stupcima, poboljšani C18AQ stupci najprikladniji su za pročišćavanje jakih polarnih ili hidrofilnih uzoraka. U ovom postu, kao uzorak i pročišćen C18AQ stupca upotrijebljen je snažni polarni peptid. Kao rezultat, ciljni proizvod koji ispunjava zahtjeve dobiven je i mogao bi se koristiti u sljedećem istraživanju i razvoju.
| Instrument | Gromoglasni™Stroj 2 | |||
| Patrone | 12 g Sepaflash C18 RP Flash uložak (sferni silicij, 20-45 µm, 100 Å, redoslijed Nunber: SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP Flash uložak (sferni silicij, 20-45 µm, 100 Å, broj narudžbe: SW-5222-012-SP (aq)) | ||
| Valna duljina | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobilna faza | Otapalo A: voda Otapalo b: acetonitril | |||
| Brzina protoka | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Umetanje uzorka | 30 mg | |||
| Gradijent | Vrijeme (CV) | Otapalo b (%) | Vrijeme (min) | Otapalo b (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultati i rasprava
Da bismo usporedili performanse pročišćavanja za uzorak polarnog peptida između redovnog stupca C18 i C18AQ stupca, koristili smo redoviti C18 stupac za bljeskalicu uzorka kao početak. Kao što je prikazano na slici 2, zbog kolapsa hidrofobne faze lanaca C18 uzrokovanih visokim vodenim omjerom, uzorak je jedva zadržan na redovnom uloškom C18 i izravno je eluiran u mobilnoj fazi. Kao rezultat toga, uzorak nije učinkovito razdvojen i pročišćen.
Slika 2. flash kromatogram uzorka na redovnom C18 ulošku.
Zatim smo koristili C18AQ stupac za pročišćavanje bljeskalice uzorka. Kao što je prikazano na slici 3, peptid je učinkovito zadržan na stupcu, a zatim eluiran. Ciljni proizvod odvojen je od nečistoća u sirovom uzorku i prikupljen. Nakon liofilizacije, a zatim analizirano od strane HPLC -a, pročišćeni proizvod ima čistoću od 98,2% i može se dalje koristiti za sljedeće istraživanje i razvoj sljedećeg koraka.
Slika 3. Flash kromatogram uzorka na C18AQ uloškom.
Zaključno, Sepaflash C18AQ RP Flash uložak u kombinaciji s Flash kromatografskim sustavom Sepabean™Stroj bi mogao ponuditi brzo i učinkovito rješenje za pročišćavanje snažnih polarnih ili hidrofilnih uzoraka.
Postoji niz sepaflash C18AQ RP flash spremnika s različitim specifikacijama iz Santai tehnologije (kao što je prikazano u tablici 2).
| Broj stavke | Veličina stupca | Brzina protoka (ml/min) | Maksimum (PSI/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tablica 2. Sepaflash C18AQ RP bljeskalice. Materijali za pakiranje: sferni sferni C18 (aq)-silicijeni dioksid, 20-45 µm, 100 Å.
Za dodatne informacije o detaljnim specifikacijama strojeva Sepabean ™ ili podacima o narudžbi na Flash patronima Sepaflash serije, posjetite našu web stranicu.
Post Vrijeme: OCT-12-2018