अम्लीय यौगिकों की शुद्धि में सेपफ्लैश स्ट्रॉन्ग एनियन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी कॉलम का अनुप्रयोग

परिणाम और चर्चा

सबसे पहले, नमूना मिश्रण को एक सामान्य चरण फ्लैश कारतूस द्वारा नियमित सिलिका के साथ पूर्व-पैक द्वारा अलग किया गया था। जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है, नमूने में दो घटकों को एक के बाद एक कारतूस से eluted किया गया था। अगला, नमूना की शुद्धि के लिए एक सैक्स फ्लैश कारतूस का उपयोग किया गया था। जैसा कि चित्र 4 में दिखाया गया है, अम्लीय घटक बी को एसएएक्स कारतूस पर पूरी तरह से बनाए रखा गया था। तटस्थ घटक ए को धीरे -धीरे कारतूस से मोबाइल चरण के क्षालन के साथ eluted किया गया था।

चित्रा 3। एक नियमित सामान्य चरण कारतूस पर नमूने का फ्लैश क्रोमैटोग्राम।

चित्रा 4। सैक्स कारतूस पर नमूने का फ्लैश क्रोमैटोग्राम।
चित्रा 3 और चित्रा 4 की तुलना करते हुए, घटक ए में दो अलग -अलग फ्लैश कारतूस पर असंगत शिखर आकार होता है। यह पुष्टि करने के लिए कि क्या क्षालन शिखर घटक के अनुरूप है, हम पूर्ण तरंग दैर्ध्य स्कैनिंग सुविधा का उपयोग कर सकते हैं जो सेपबीन ™ मशीन के नियंत्रण सॉफ्टवेयर में बनाया गया है। दो पृथक्करणों के प्रयोगात्मक डेटा को खोलें, क्रोमैटोग्राम में समय अक्ष (सीवी) पर संकेतक रेखा को उच्चतम बिंदु पर खींचें और घटक ए के अनुरूप क्षालन शिखर का दूसरा उच्चतम बिंदु, और इन दो बिंदुओं के पूर्ण तरंग दैर्ध्य स्पेक्ट्रम को स्वचालित रूप से क्रोमैटोग्राम के नीचे दिखाया जाएगा (जैसा कि चित्र 5 और चित्रा 6 में दिखाया गया है)। इन दो पृथक्करणों के पूर्ण तरंग दैर्ध्य स्पेक्ट्रम डेटा की तुलना करते हुए, घटक ए में दो प्रयोगों में लगातार अवशोषण स्पेक्ट्रम होता है। घटक के कारण के लिए ए में दो अलग -अलग फ्लैश कारतूस पर असंगत शिखर आकार होता है, यह अनुमान लगाया जाता है कि घटक ए में विशिष्ट अशुद्धता होती है, जिसमें सामान्य चरण कारतूस और एसएएक्स कारतूस पर अलग -अलग प्रतिधारण होता है। इसलिए, घटक ए और इन दो फ्लैश कारतूस पर अशुद्धता के लिए अलग -अलग अनुक्रम अलग है, जिसके परिणामस्वरूप क्रोमैटोग्राम पर असंगत शिखर आकार होता है।

चित्रा 5। घटक ए की पूर्ण तरंग दैर्ध्य स्पेक्ट्रम और सामान्य चरण कारतूस द्वारा अलग की गई अशुद्धता।

चित्रा 6। घटक ए की पूर्ण तरंग दैर्ध्य स्पेक्ट्रम और एसएएक्स कारतूस द्वारा अलग की गई अशुद्धता।

यदि एकत्र किए जाने वाले लक्ष्य उत्पाद को तटस्थ घटक ए है, तो सैंपल लोडिंग के बाद एल्यूशन के लिए एसएएक्स कारतूस का उपयोग करके शुद्धिकरण कार्य आसानी से पूरा किया जा सकता है। दूसरी ओर, यदि एकत्र किया जाने वाला लक्ष्य उत्पाद अम्लीय घटक बी है, तो कैप्चर-रिलीज़ तरीके को प्रयोगात्मक चरणों में केवल एक मामूली समायोजन के साथ अपनाया जा सकता है: जब नमूना एसएएक्स कारतूस पर लोड किया गया था और तटस्थ घटक ए को सामान्य चरण कार्बनिक सॉल्वैंट्स के साथ पूरी तरह से बाहर निकाला गया था, तो मोबाइल चरण को मेथनोल समाधान के लिए स्विच करें। मोबाइल चरण में एसीटेट आयन एसएएक्स कारतूस के स्थिर चरण पर चतुर्धातुक अमीन आयन समूहों को बांधने के लिए घटक बी के साथ प्रतिस्पर्धा करेंगे, जिससे लक्ष्य उत्पाद प्राप्त करने के लिए कारतूस से घटक बी को हटा दिया जाएगा। आयन एक्सचेंज मोड में अलग किए गए नमूने का क्रोमैटोग्राम चित्र 7 में दिखाया गया था।

चित्रा 7। एक सैक्स कारतूस पर आयन एक्सचेंज मोड में घटक बी का फ्लैश क्रोमैटोग्राम।

अंत में, अम्लीय या तटस्थ नमूने को तेजी से एसएएक्स कारतूस द्वारा शुद्ध किया जा सकता है जो सामान्य चरण कारतूस के साथ संयुक्त रूप से विभिन्न शुद्धि रणनीतियों का उपयोग करता है। इसके अलावा, सेपबीन ™ मशीन के नियंत्रण सॉफ्टवेयर में निर्मित पूर्ण तरंग दैर्ध्य स्कैनिंग सुविधा की मदद से, eluted अंशों की विशेषता अवशोषण स्पेक्ट्रम को आसानी से तुलना और पुष्टि की जा सकती है, जिससे शोधकर्ताओं को एलीटेड अंशों की संरचना और शुद्धता को जल्दी से निर्धारित करने में मदद मिलती है और इस प्रकार कार्य दक्षता में सुधार होता है।