रुई हुआंग, बो जू
अनुप्रयोग अनुसंधान एवं विकास केंद्र
परिचय
पेप्टाइड अमीनो एसिड से बना एक यौगिक है, जिनमें से प्रत्येक में अमीनो एसिड अवशेषों के विभिन्न प्रकार और क्रम के कारण अद्वितीय भौतिक और रासायनिक गुण होते हैं।ठोस चरण रासायनिक संश्लेषण के विकास के साथ, विभिन्न सक्रिय पेप्टाइड्स के रासायनिक संश्लेषण ने काफी प्रगति की है।हालांकि, ठोस चरण संश्लेषण द्वारा प्राप्त पेप्टाइड की जटिल संरचना के कारण, अंतिम उत्पाद को विश्वसनीय पृथक्करण विधियों द्वारा शुद्ध किया जाना चाहिए।पेप्टाइड्स के लिए आमतौर पर उपयोग की जाने वाली शुद्धिकरण विधियों में आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी (आईईसी) और रिवर्स-चरण उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (आरपी-एचपीएलसी) शामिल हैं, जिनमें कम नमूना लोडिंग क्षमता, पृथक्करण मीडिया की उच्च लागत, जटिल और महंगे पृथक्करण उपकरण जैसे नुकसान हैं। आदि। छोटे अणु पेप्टाइड्स (एमडब्ल्यू <1 केडीए) के तेजी से शुद्धिकरण के लिए, एक सफल एप्लिकेशन केस पहले सैंटाई टेक्नोलॉजीज द्वारा प्रकाशित किया गया था, जिसमें थाइमोपेंटिन (टीपी -5) और के तेजी से शुद्धिकरण के लिए सेपाफ्लैश आरपी सी 18 कारतूस का उपयोग किया गया था। आवश्यकताओं को पूरा करने वाला लक्ष्य उत्पाद प्राप्त किया गया।
चित्र 1. 20 सामान्य अमीनो एसिड (www.bachem.com से पुनरुत्पादित)।
पेप्टाइड्स की संरचना में 20 प्रकार के अमीनो एसिड आम हैं।इन अमीनो एसिड को उनकी ध्रुवीयता और एसिड-बेस संपत्ति के अनुसार निम्नलिखित समूहों में विभाजित किया जा सकता है: गैर-ध्रुवीय (हाइड्रोफोबिक), ध्रुवीय (अपरिवर्तित), अम्लीय या बुनियादी (जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है)।पेप्टाइड अनुक्रम में, यदि अनुक्रम बनाने वाले अमीनो एसिड ज्यादातर ध्रुवीय होते हैं (जैसा कि चित्र 1 में गुलाबी रंग में चिह्नित है), जैसे कि सिस्टीन, ग्लूटामाइन, शतावरी, सेरीन, थ्रेओनीन, टायरोसिन, आदि तो इस पेप्टाइड में एक मजबूत हो सकता है ध्रुवीयता और पानी में अत्यधिक घुलनशील।उलट-चरण क्रोमैटोग्राफी द्वारा इन मजबूत ध्रुवीय पेप्टाइड नमूनों की शुद्धि प्रक्रिया के दौरान, हाइड्रोफोबिक चरण पतन नामक एक घटना घटित होगी (संताई टेक्नोलॉजीज द्वारा पहले प्रकाशित एप्लिकेशन नोट देखें: हाइड्रोफोबिक चरण पतन, एक्यू उलट चरण क्रोमैटोग्राफी कॉलम और उनके अनुप्रयोग)।नियमित C18 कॉलम की तुलना में, बेहतर C18AQ कॉलम मजबूत ध्रुवीय या हाइड्रोफिलिक नमूनों के शुद्धिकरण के लिए सबसे उपयुक्त हैं।इस पोस्ट में, एक मजबूत ध्रुवीय पेप्टाइड को नमूने के रूप में उपयोग किया गया था और C18AQ कॉलम द्वारा शुद्ध किया गया था।परिणामस्वरूप, आवश्यकताओं को पूरा करने वाला लक्ष्य उत्पाद प्राप्त हुआ और इसका उपयोग निम्नलिखित अनुसंधान और विकास में किया जा सकता है।
| यंत्र | सेपाबीन™मशीन 2 | |||
| कारतूस | 12 ग्राम सेपाफ्लैश सी18 आरपी फ्लैश कार्ट्रिज (गोलाकार सिलिका, 20 - 45 μm, 100 Å, ऑर्डर नंबर: SW-5222-012-SP) | 12 ग्राम सेपाफ्लैश C18AQ आरपी फ्लैश कार्ट्रिज (गोलाकार सिलिका, 20 - 45 μm, 100 Å, ऑर्डर संख्या: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| वेवलेंथ | 254 एनएम, 220 एनएम | 214 एनएम | ||
| मोबाइल फेज़ | विलायक ए: पानी सॉल्वेंट बी: एसीटोनिट्राइल | |||
| प्रवाह दर | 15 एमएल/मिनट | 20 एमएल/मिनट | ||
| नमूना लोड हो रहा है | 30 मिलीग्राम | |||
| ढाल | समय (सीवी) | विलायक बी (%) | समय (मिनट) | विलायक बी (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
परिणाम और चर्चा
नियमित C18 कॉलम और C18AQ कॉलम के बीच ध्रुवीय पेप्टाइड नमूने के शुद्धिकरण प्रदर्शन की तुलना करने के लिए, हमने शुरुआत के रूप में नमूने के फ्लैश शुद्धिकरण के लिए एक नियमित C18 कॉलम का उपयोग किया।जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है, उच्च जलीय अनुपात के कारण C18 श्रृंखलाओं के हाइड्रोफोबिक चरण पतन के कारण, नमूना नियमित C18 कार्ट्रिज पर मुश्किल से बरकरार रखा गया था और मोबाइल चरण द्वारा सीधे बाहर निकाल दिया गया था।परिणामस्वरूप, नमूना प्रभावी ढंग से अलग और शुद्ध नहीं हो सका।
चित्र 2. नियमित C18 कार्ट्रिज पर नमूने का फ़्लैश क्रोमैटोग्राम।
इसके बाद, हमने नमूने के फ्लैश शुद्धिकरण के लिए C18AQ कॉलम का उपयोग किया।जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है, पेप्टाइड को प्रभावी ढंग से स्तंभ पर बनाए रखा गया और फिर बाहर निकाल दिया गया।लक्ष्य उत्पाद को कच्चे नमूने में अशुद्धियों से अलग किया गया और एकत्र किया गया।लियोफिलाइजेशन और फिर एचपीएलसी द्वारा विश्लेषण के बाद, शुद्ध उत्पाद की शुद्धता 98.2% है और इसे अगले चरण के अनुसंधान और विकास के लिए उपयोग किया जा सकता है।
चित्र 3. C18AQ कार्ट्रिज पर नमूने का फ्लैश क्रोमैटोग्राम।
अंत में, सेपाफ्लैश सी18एक्यू आरपी फ्लैश कार्ट्रिज को फ्लैश क्रोमैटोग्राफी सिस्टम सेपाबीन के साथ जोड़ा गया™मशीन मजबूत ध्रुवीय या हाइड्रोफिलिक नमूनों के शुद्धिकरण के लिए एक तेज़ और प्रभावी समाधान पेश कर सकती है।
सैंटाई टेक्नोलॉजी से भिन्न विशिष्टताओं के साथ सेपाफ्लैश C18AQ आरपी फ्लैश कार्ट्रिज की एक श्रृंखला है (जैसा कि तालिका 2 में दिखाया गया है)।
| आइटम नंबर | कॉलम का आकार | प्रवाह दर (एमएल/मिनट) | अधिकतम दबाव (पीएसआई/बार) |
| एसडब्ल्यू-5222-004-एसपी(एक्यू) | 5.4 ग्राम | 5-15 | 400/27.5 |
| एसडब्ल्यू-5222-012-एसपी(एक्यू) | 20 ग्राम | 10-25 | 400/27.5 |
| एसडब्ल्यू-5222-025-एसपी(एक्यू) | 33 ग्राम | 10-25 | 400/27.5 |
| एसडब्ल्यू-5222-040-एसपी(एक्यू) | 48 ग्राम | 15-30 | 400/27.5 |
| एसडब्ल्यू-5222-080-एसपी(एक्यू) | 105 ग्रा | 25-50 | 350/24.0 |
| एसडब्ल्यू-5222-120-एसपी(एक्यू) | 155 ग्राम | 30-60 | 300/20.7 |
| एसडब्ल्यू-5222-220-एसपी(एक्यू) | 300 ग्राम | 40-80 | 300/20.7 |
| एसडब्ल्यू-5222-330-एसपी(एक्यू) | 420 ग्राम | 40-80 | 250/17.2 |
तालिका 2. सेपाफ्लैश C18AQ आरपी फ़्लैश कार्ट्रिज।पैकिंग सामग्री: उच्च दक्षता गोलाकार C18(AQ)-बंधित सिलिका, 20 - 45 μm, 100 Å।
सेपाबीन™ मशीन की विस्तृत विशिष्टताओं के बारे में अधिक जानकारी के लिए, या सेपाफ्लैश श्रृंखला फ्लैश कार्ट्रिज पर ऑर्डर करने की जानकारी के लिए, कृपया हमारी वेबसाइट पर जाएँ।
पोस्ट करने का समय: अक्टूबर-12-2018