रुई हुआंग, बो जू
अनुप्रयोग आर एंड डी केंद्र
परिचय
एक पेप्टाइड अमीनो एसिड से बना एक यौगिक है, जिनमें से प्रत्येक में अमीनो एसिड अवशेषों के विभिन्न प्रकारों और क्रम के कारण अद्वितीय भौतिक और रासायनिक गुण होते हैं जो इसके अनुक्रम को बनाते हैं। ठोस चरण रासायनिक संश्लेषण के विकास के साथ, विभिन्न सक्रिय पेप्टाइड्स के रासायनिक संश्लेषण ने बहुत प्रगति की है। हालांकि, ठोस चरण संश्लेषण द्वारा प्राप्त पेप्टाइड की जटिल संरचना के कारण, अंतिम उत्पाद को विश्वसनीय पृथक्करण विधियों द्वारा शुद्ध किया जाना चाहिए। पेप्टाइड्स के लिए आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली शुद्धि विधियों में आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी (आईईसी) और उलट-चरण उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (आरपी-एचपीएलसी) शामिल हैं, जिनमें कम नमूना लोडिंग क्षमता के नुकसान हैं, पृथक्करण मीडिया की उच्च लागत, जटिल और महंगा पृथक्करण उपकरण आदि। Sepaflash RP C18 कारतूस का उपयोग थाइमोपेंटिन (TP-5) के तेजी से शुद्धि के लिए किया गया था और आवश्यकताओं को प्राप्त करने वाले लक्ष्य उत्पाद बैठक को प्राप्त किया गया था।
चित्रा 1। 20 सामान्य अमीनो एसिड (www.bachem.com से पुन: प्रस्तुत)।
20 प्रकार के अमीनो एसिड हैं जो पेप्टाइड्स की संरचना में आम हैं। इन अमीनो एसिड को उनकी ध्रुवीयता और एसिड-बेस संपत्ति के अनुसार निम्नलिखित समूहों में विभाजित किया जा सकता है: गैर-ध्रुवीय (हाइड्रोफोबिक), ध्रुवीय (अपरिवर्तित), अम्लीय या बुनियादी (जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है)। एक पेप्टाइड अनुक्रम में, यदि अनुक्रम का गठन करने वाले अमीनो एसिड ज्यादातर ध्रुवीय होते हैं (जैसा कि चित्र 1 में गुलाबी रंग में चिह्नित किया गया है), जैसे कि सिस्टीन, ग्लूटामाइन, शतावरी, सेरीन, थ्रेओनीन, टायरोसिन, आदि। तो इस पेप्टाइड में एक मजबूत ध्रुवता हो सकती है और पानी में अत्यधिक घुलनशील हो सकती है। उल्टे-चरण क्रोमैटोग्राफी द्वारा इन मजबूत ध्रुवीय पेप्टाइड नमूनों के लिए शुद्धि प्रक्रिया के दौरान, हाइड्रोफोबिक चरण पतन नामक एक घटना घट जाएगी (संताई टेक्नोलॉजीज द्वारा पहले से प्रकाशित आवेदन नोट का संदर्भ लें: हाइड्रोफोबिक चरण पतन, AQ उलट चरण क्रोमैटोग्राफी कॉलम और उनके अनुप्रयोगों)। नियमित C18 कॉलम की तुलना में, बेहतर C18AQ कॉलम मजबूत ध्रुवीय या हाइड्रोफिलिक नमूनों की शुद्धि के लिए सबसे उपयुक्त हैं। इस पोस्ट में, एक मजबूत ध्रुवीय पेप्टाइड को नमूने के रूप में उपयोग किया गया था और एक C18AQ कॉलम द्वारा शुद्ध किया गया था। नतीजतन, आवश्यकताओं को पूरा करने वाले लक्ष्य उत्पाद को पूरा किया गया था और इसका उपयोग निम्नलिखित अनुसंधान और विकास में किया जा सकता है।
| यंत्र | सिपाही™मशीन 2 | |||
| कारतूस | 12 जी सेपफ्लैश C18 आरपी फ्लैश कार्ट्रिज (गोलाकार सिलिका, 20-45 माइक्रोन, 100 Å, ऑर्डर ननबर ： एसडब्ल्यू -5222-012-एसपी) | 12 जी सेपफ्लैश C18AQ RP फ्लैश कार्ट्रिज (गोलाकार सिलिका, 20-45 माइक्रोन, 100 Å, ऑर्डर नंबर ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| वेवलेंथ | 254 एनएम, 220 एनएम | 214 एन.एम. | ||
| मोबाइल फेज़ | विलायक ए: पानी विलायक बी: एसिटोनिट्राइल | |||
| प्रवाह दर | 15 एमएल/मिनट | 20 एमएल/मिनट | ||
| नमूना लोडिंग | 30 मिलीग्राम | |||
| ढाल | समय (सीवी) | विलायक बी (%) | समय (मिनट) | विलायक बी (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
परिणाम और चर्चा
नियमित C18 कॉलम और C18AQ कॉलम के बीच ध्रुवीय पेप्टाइड नमूने के लिए शुद्धि प्रदर्शन की तुलना करने के लिए, हमने एक शुरुआत के रूप में नमूना के फ्लैश शुद्धि के लिए एक नियमित C18 कॉलम का उपयोग किया। जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है, उच्च जलीय अनुपात के कारण होने वाले C18 श्रृंखलाओं के हाइड्रोफोबिक चरण पतन के कारण, नमूना नियमित रूप से C18 कारतूस पर मुश्किल से बनाए रखा गया था और सीधे मोबाइल चरण द्वारा बाहर निकाला गया था। नतीजतन, नमूना प्रभावी रूप से अलग और शुद्ध नहीं किया गया था।
चित्रा 2। एक नियमित C18 कारतूस पर नमूने का फ्लैश क्रोमैटोग्राम।
अगला, हमने नमूने के फ्लैश शुद्धि के लिए एक C18AQ कॉलम का उपयोग किया। जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है, पेप्टाइड को प्रभावी रूप से कॉलम पर बनाए रखा गया था और फिर बाहर निकाला गया। लक्ष्य उत्पाद को कच्चे नमूने में अशुद्धियों से अलग किया गया था और एकत्र किया गया था। Lyophilization के बाद और फिर HPLC द्वारा विश्लेषण किया गया, शुद्ध उत्पाद में 98.2% की शुद्धता है और अगले चरण अनुसंधान और विकास के लिए आगे उपयोग किया जा सकता है।
चित्रा 3। C18AQ कारतूस पर नमूने का फ्लैश क्रोमैटोग्राम।
अंत में, Sepaflash C18AQ RP फ़्लैश कारतूस फ्लैश क्रोमैटोग्राफी सिस्टम SEPABEAN के साथ संयुक्त™मशीन मजबूत ध्रुवीय या हाइड्रोफिलिक नमूनों की शुद्धि के लिए एक तेज और प्रभावी समाधान प्रदान कर सकती है।
सैंटाई प्रौद्योगिकी से विभिन्न विनिर्देशों के साथ सेपफ्लैश C18AQ RP फ्लैश कारतूस की एक श्रृंखला है (जैसा कि तालिका 2 में दिखाया गया है)।
| आइटम नंबर | स्तंभ आकार | प्रवाह दर (एमएल/मिनट) | Max.pressure (साई/बार) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 ग्राम | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 ग्राम | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 ग्राम | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 ग्राम | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 ग्राम | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 ग्राम | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 ग्राम | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 ग्राम | 40-80 | 250/17.2 |
तालिका 2। सेपफ्लैश C18AQ RP फ्लैश कारतूस। पैकिंग सामग्री: उच्च दक्षता वाले गोलाकार C18 (AQ) -बोंड सिलिका, 20-45 माइक्रोन, 100 Å।
Sepabean ™ मशीन के विस्तृत विनिर्देशों, या Sepaflash श्रृंखला फ्लैश कारतूस पर आदेश देने की जानकारी के बारे में अधिक जानकारी के लिए, कृपया हमारी वेबसाइट पर जाएँ।
पोस्ट टाइम: अक्टूबर -12-2018