हांगचेंग वांग, बो जू
अनुप्रयोग आर एंड डी केंद्र
परिचय
स्थिर चरण और मोबाइल चरण के सापेक्ष ध्रुवों के अनुसार, तरल क्रोमैटोग्राफी को सामान्य चरण क्रोमैटोग्राफी (एनपीसी) और उलट चरण क्रोमैटोग्राफी (आरपीसी) में विभाजित किया जा सकता है। आरपीसी के लिए, मोबाइल चरण की ध्रुवीयता स्थिर चरण की तुलना में अधिक मजबूत है। आरपीसी अपनी उच्च दक्षता, अच्छे संकल्प और स्पष्ट प्रतिधारण तंत्र के कारण तरल क्रोमैटोग्राफी पृथक्करण मोड में सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। इसलिए आरपीसी विभिन्न ध्रुवीय या गैर-ध्रुवीय यौगिकों के पृथक्करण और शुद्धि के लिए उपयुक्त है, जिसमें अल्कलॉइड, कार्बोहाइड्रेट, फैटी एसिड, स्टेरॉयड, न्यूक्लिक एसिड, एमिनो एसिड, पेप्टाइड्स, प्रोटीन, आदि शामिल हैं। अमीनो, आदि इन बंधुआ कार्यात्मक समूहों के बीच, सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला एक C18 है। यह अनुमान है कि 80% से अधिक आरपीसी अब C18 बंधुआ चरण का उपयोग कर रहे हैं। इसलिए C18 क्रोमैटोग्राफी कॉलम हर प्रयोगशाला के लिए एक सार्वभौमिक स्तंभ बन गया है।
यद्यपि C18 कॉलम का उपयोग बहुत विस्तृत अनुप्रयोगों में किया जा सकता है, हालांकि, कुछ नमूनों के लिए जो बहुत ध्रुवीय या अत्यधिक हाइड्रोफिलिक है, ऐसे नमूनों को शुद्ध करने के लिए उपयोग किए जाने पर नियमित C18 कॉलम में समस्या हो सकती है। आरपीसी में, आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले क्षालन सॉल्वैंट्स को उनकी ध्रुवीयता के अनुसार ऑर्डर किया जा सकता है: पानी <मेथनॉल <एसिटोनिट्राइल <इथेनॉल <टेट्राहाइड्रोफुरान <आइसोप्रोपेनॉल। इन नमूनों (मजबूत ध्रुवीय या अत्यधिक हाइड्रोफिलिक) के लिए कॉलम पर अच्छे प्रतिधारण को आश्वस्त करने के लिए, जलीय प्रणाली का उच्च अनुपात मोबाइल चरण के रूप में उपयोग किया जाना आवश्यक है। हालांकि, मोबाइल चरण के रूप में शुद्ध जल प्रणाली (शुद्ध पानी या शुद्ध नमक समाधान सहित) का उपयोग करते समय, C18 कॉलम के स्थिर चरण पर लंबी कार्बन श्रृंखला पानी से बचने और एक दूसरे के साथ मिलाने के लिए जाती है, जिसके परिणामस्वरूप स्तंभ की अवधारण क्षमता में तात्कालिक कमी होती है या यहां तक कि कोई प्रतिधारण नहीं होता है। इस घटना को "हाइड्रोफोबिक चरण पतन" कहा जाता है (जैसा कि चित्र 1 के बाएं भाग में दिखाया गया है)। हालांकि यह स्थिति प्रतिवर्ती है जब कॉलम को मेथनॉल या एसिटोनिट्राइल जैसे कार्बनिक सॉल्वैंट्स से धोया जाता है, फिर भी यह कॉलम को नुकसान पहुंचा सकता है। इसलिए, इस स्थिति को होने से रोकना आवश्यक है।
चित्रा 1। नियमित C18 कॉलम (बाएं) और C18AQ कॉलम (दाएं) में सिलिका जेल की सतह पर बंधुआ चरणों का योजनाबद्ध आरेख।
उपर्युक्त समस्याओं को संबोधित करने के लिए, क्रोमैटोग्राफिक पैकिंग सामग्री निर्माताओं ने तकनीकी सुधार किया है। इनमें से एक सुधार सिलिका मैट्रिक्स की सतह पर सिलिका मैट्रिक्स की सतह पर कुछ संशोधन कर रहा है, जैसे कि हाइड्रोफिलिक साइनो समूहों (जैसा कि चित्र 1 के दाहिने भाग में दिखाया गया है), सिलिका जेल की सतह को अधिक हाइड्रोफिलिक बनाने के लिए। इस प्रकार सिलिका सतह पर C18 श्रृंखलाओं को पूरी तरह से अत्यधिक जलीय परिस्थितियों में बढ़ाया जा सकता है और हाइड्रोफोबिक चरण पतन से बचा जा सकता है। इन संशोधित C18 कॉलमों को जलीय C18 कॉलम कहा जाता है, अर्थात् C18AQ कॉलम, जो अत्यधिक जलीय क्षालन स्थितियों के लिए डिज़ाइन किए गए हैं और 100% जलीय प्रणाली को सहन कर सकते हैं। C18AQ कॉलम को मजबूत ध्रुवीय यौगिकों के पृथक्करण और शुद्धि में व्यापक रूप से लागू किया गया है, जिसमें कार्बनिक एसिड, पेप्टाइड्स, न्यूक्लियोसाइड और पानी में घुलनशील विटामिन शामिल हैं।
डिसालिंग नमूनों के लिए फ्लैश शुद्धि में C18AQ कॉलम के विशिष्ट अनुप्रयोगों में से एक है, जो बाद के अध्ययनों में नमूने के आवेदन को सुविधाजनक बनाने के लिए नमूना विलायक में नमक या बफर घटकों को हटा देता है। इस पोस्ट में, मजबूत ध्रुवीयता के साथ शानदार ब्लू एफसीएफ को नमूने के रूप में उपयोग किया गया था और C18AQ कॉलम पर शुद्ध किया गया था। नमूना विलायक को बफर समाधान से कार्बनिक विलायक द्वारा प्रतिस्थापित किया गया था, इस प्रकार निम्नलिखित रोटरी वाष्पीकरण के साथ -साथ सॉल्वैंट्स और ऑपरेटिंग समय को बचाने की सुविधा प्रदान करता है। इसके अलावा, नमूने में कुछ अशुद्धियों को हटाकर नमूने की शुद्धता में सुधार किया गया था।
प्रायोगिक अनुभाग
चित्रा 2। नमूने की रासायनिक संरचना।
शानदार ब्लू एफसीएफ का उपयोग इस पोस्ट में नमूने के रूप में किया गया था। कच्चे नमूने की शुद्धता 86% थी और नमूने की रासायनिक संरचना को चित्र 2 में दिखाया गया था। नमूना समाधान तैयार करने के लिए, शानदार नीले एफसीएफ के 300 मिलीग्राम पाउडर कच्चे कच्चे कच्चे ठोस को 1 एम nah2po4 बफर समाधान में भंग कर दिया गया था और पूरी तरह से स्पष्ट समाधान बनने के लिए अच्छी तरह से हिलाया था। नमूना समाधान तब एक इंजेक्टर द्वारा फ्लैश कॉलम में इंजेक्ट किया गया था। फ्लैश शुद्धि का प्रयोगात्मक सेटअप तालिका 1 में सूचीबद्ध है।
| यंत्र | सिपाही ™ मशीन2 | |||
| कारतूस | 12 जी सेपफ्लैश C18 आरपी फ्लैश कार्ट्रिज (गोलाकार सिलिका, 20-45 माइक्रोन, 100 Å, ऑर्डर नंबर: SW-5222-012-SP) | 12 ग्राम सेपफ्लैश C18AQ RP फ्लैश कारतूस (गोलाकार सिलिका, 20-45 माइक्रोन, 100 Å, ऑर्डर नंबर ： SW-5222-012-SP (AQ (AQ))） | ||
| वेवलेंथ | 254 एन.एम. | |||
| मोबाइल फेज़ | विलायक एक ： पानी विलायक बी ： मेथनॉल | |||
| प्रवाह दर | 30 एमएल/मिनट | |||
| नमूना लोडिंग | 300 मिलीग्राम (86%की शुद्धता के साथ शानदार नीला एफसीएफ) | |||
| ढाल | समय (सीवी) | विलायक बी (%) | समय (सीवी) | विलायक बी (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
परिणाम और चर्चा
एक Sepaflash C18AQ RP फ्लैश कारतूस का उपयोग नमूना डिसालिंग और शुद्धि के लिए किया गया था। स्टेप ग्रेडिएंट का उपयोग किया गया था जिसमें शुद्ध पानी का उपयोग क्षालन की शुरुआत में मोबाइल चरण के रूप में किया गया था और 10 कॉलम वॉल्यूम (सीवी) के लिए चलाया गया था। जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है, जब मोबाइल चरण के रूप में शुद्ध पानी का उपयोग करते हैं, तो नमूना पूरी तरह से फ्लैश कारतूस पर बनाए रखा गया था। इसके बाद, मोबाइल चरण में मेथनॉल सीधे 100% तक बढ़ गया था और ढाल को 7.5 सीवी के लिए बनाए रखा गया था। नमूना 11.5 से 13.5 cV तक बाहर निकाला गया था। एकत्र किए गए अंशों में, नमूना समाधान को NAH2PO4 बफर समाधान से मेथनॉल में बदल दिया गया था। अत्यधिक जलीय घोल के साथ तुलना में, मेथनॉल को बाद के चरण में रोटरी वाष्पीकरण द्वारा हटाया जाना बहुत आसान था, जो निम्नलिखित शोध को सुविधाजनक बनाता है।
चित्रा 3। C18AQ कारतूस पर नमूने का फ्लैश क्रोमैटोग्राम।
मजबूत ध्रुवीयता के नमूनों के लिए C18AQ कारतूस और नियमित C18 कारतूस के प्रतिधारण व्यवहार की तुलना करने के लिए, समानांतर तुलना परीक्षण किया गया था। एक सेपफ्लैश C18 आरपी फ्लैश कारतूस का उपयोग किया गया था और नमूने के लिए फ्लैश क्रोमैटोग्राम को चित्र 4 में दिखाया गया था। नियमित C18 कारतूस के लिए, उच्चतम सहनशील जलीय चरण अनुपात लगभग 90%है। इसलिए स्टार्ट ग्रेडिएंट को 90% पानी में 10% मेथनॉल पर सेट किया गया था। जैसा कि चित्र 4 में दिखाया गया है, उच्च जलीय अनुपात के कारण होने वाले C18 श्रृंखलाओं के हाइड्रोफोबिक चरण पतन के कारण, नमूना को नियमित रूप से C18 कारतूस पर मुश्किल से बनाए रखा गया था और सीधे मोबाइल चरण द्वारा बाहर निकाला गया था। नतीजतन, नमूना डिसालिंग या शुद्धि का संचालन पूरा नहीं किया जा सकता है।
चित्रा 4। एक नियमित C18 कारतूस पर नमूने का फ्लैश क्रोमैटोग्राम।
रैखिक ढाल के साथ तुलना में, चरण ढाल के उपयोग के निम्नलिखित फायदे हैं:
1। नमूना शुद्धि के लिए विलायक उपयोग और रन समय कम हो गया है।
2। लक्ष्य उत्पाद एक तेज शिखर में elutes, जो एकत्रित अंशों की मात्रा को कम करता है और इस प्रकार निम्नलिखित रोटरी वाष्पीकरण के साथ -साथ समय की बचत करता है।
3। एकत्रित उत्पाद मेथनॉल में है जिसे वाष्पित किया जाना आसान है, इस प्रकार सूखने का समय कम हो जाता है।
अंत में, नमूने की शुद्धि के लिए जो दृढ़ता से ध्रुवीय या अत्यधिक हाइड्रोफिलिक है, सेपफ्लैश C18AQ RP फ्लैश कारतूस तैयारी फ्लैश क्रोमैटोग्राफी सिस्टम Sepabean ™ मशीन के साथ संयोजन एक तेज और कुशल समाधान की पेशकश कर सकता है।
Sepaflash बंधुआ श्रृंखला C18 आरपी फ्लैश कारतूस के बारे में
सैंटाई प्रौद्योगिकी से विभिन्न विनिर्देशों के साथ सेपफ्लैश C18AQ RP फ्लैश कारतूस की एक श्रृंखला है (जैसा कि तालिका 2 में दिखाया गया है)।
| आइटम नंबर | स्तंभ आकार | प्रवाह दर (एमएल/मिनट) | Max.pressure (साई/बार) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 ग्राम | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 ग्राम | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 ग्राम | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 ग्राम | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 ग्राम | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 ग्राम | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 ग्राम | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 ग्राम | 40-80 | 250/17.2 |
तालिका 2। सेपफ्लैश C18AQ RP फ्लैश कारतूस।
पैकिंग सामग्री: उच्च दक्षता वाले गोलाकार C18 (AQ) -बोंड सिलिका, 20-45 माइक्रोन, 100 Å।
लॉजी (जैसा कि तालिका 2 में दिखाया गया है)।
पोस्ट टाइम: अगस्त -27-2018