રુઇ હુઆંગ, બો ઝુ
એપ્લિકેશન આર એન્ડ ડી સેન્ટર
પરિચય
પેપ્ટાઈડ એ એમિનો એસિડનું બનેલું સંયોજન છે, જેમાંના દરેકમાં એમિનો એસિડ અવશેષોના વિવિધ પ્રકારો અને ક્રમને કારણે અનન્ય ભૌતિક અને રાસાયણિક ગુણધર્મો છે.ઘન તબક્કાના રાસાયણિક સંશ્લેષણના વિકાસ સાથે, વિવિધ સક્રિય પેપ્ટાઇડ્સના રાસાયણિક સંશ્લેષણમાં ખૂબ પ્રગતિ થઈ છે.જો કે, નક્કર તબક્કાના સંશ્લેષણ દ્વારા મેળવેલ પેપ્ટાઇડની જટિલ રચનાને કારણે, અંતિમ ઉત્પાદનને વિશ્વસનીય અલગ કરવાની પદ્ધતિઓ દ્વારા શુદ્ધ કરવું જોઈએ.પેપ્ટાઈડ્સ માટે સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતી શુદ્ધિકરણ પદ્ધતિઓમાં આયન એક્સચેન્જ ક્રોમેટોગ્રાફી (આઈઈસી) અને રિવર્સ્ડ-ફેઝ હાઈ પરફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી (આરપી-એચપીએલસી)નો સમાવેશ થાય છે, જેમાં ઓછી સેમ્પલ લોડિંગ ક્ષમતાના ગેરફાયદા, અલગ મીડિયાની ઊંચી કિંમત, જટિલ અને ખર્ચાળ અલગ સાધનો, વગેરે. નાના પરમાણુ પેપ્ટાઈડ્સ (MW < 1 kDa) ના ઝડપી શુદ્ધિકરણ માટે, સાન્ટાઈ ટેક્નોલોજિસ દ્વારા અગાઉ એક સફળ એપ્લિકેશન કેસ પ્રકાશિત કરવામાં આવ્યો હતો, જેમાં થાઈમોપેન્ટિન (TP-5) ના ઝડપી શુદ્ધિકરણ માટે SepaFlash RP C18 કારતૂસનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. જરૂરિયાતોને સંતોષતા લક્ષ્ય ઉત્પાદન મેળવવામાં આવ્યું હતું.
આકૃતિ 1. 20 સામાન્ય એમિનો એસિડ (www.bachem.com પરથી પુનઃઉત્પાદિત).
ત્યાં 20 પ્રકારના એમિનો એસિડ છે જે પેપ્ટાઇડ્સની રચનામાં સામાન્ય છે.આ એમિનો એસિડને તેમની ધ્રુવીયતા અને એસિડ-બેઝ પ્રોપર્ટી અનુસાર નીચેના જૂથોમાં વિભાજિત કરી શકાય છે: બિન-ધ્રુવીય (હાઈડ્રોફોબિક), ધ્રુવીય (અનચાર્જ), એસિડિક અથવા મૂળભૂત (આકૃતિ 1 માં બતાવ્યા પ્રમાણે).પેપ્ટાઈડ ક્રમમાં, જો એમિનો એસીડ જે ક્રમ બનાવે છે તે મોટે ભાગે ધ્રુવીય હોય છે (આકૃતિ 1 માં ગુલાબી રંગમાં ચિહ્નિત થયેલ છે), જેમ કે સિસ્ટીન, ગ્લુટામાઈન, એસ્પેરાજીન, સેરીન, થ્રેઓનિન, ટાયરોસિન વગેરે, તો આ પેપ્ટાઈડ મજબૂત હોઈ શકે છે. ધ્રુવીયતા અને પાણીમાં અત્યંત દ્રાવ્ય હોય છે.રિવર્સ્ડ-ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા આ મજબૂત ધ્રુવીય પેપ્ટાઇડ નમૂનાઓ માટે શુદ્ધિકરણ પ્રક્રિયા દરમિયાન, હાઇડ્રોફોબિક ફેઝ કોલેપ્સ નામની ઘટના બનશે (સેન્ટાઇ ટેક્નોલોજીસ દ્વારા અગાઉ પ્રકાશિત એપ્લિકેશન નોટનો સંદર્ભ લો: હાઇડ્રોફોબિક ફેઝ કોલેપ્સ, AQ રિવર્સ્ડ ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફી કૉલમ્સ અને ધ ધી.નિયમિત C18 કૉલમ્સની તુલનામાં, સુધારેલ C18AQ કૉલમ મજબૂત ધ્રુવીય અથવા હાઇડ્રોફિલિક નમૂનાઓના શુદ્ધિકરણ માટે સૌથી યોગ્ય છે.આ પોસ્ટમાં, એક મજબૂત ધ્રુવીય પેપ્ટાઈડનો નમૂના તરીકે ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો અને C18AQ કૉલમ દ્વારા શુદ્ધ કરવામાં આવ્યો હતો.પરિણામે, જરૂરિયાતોને સંતોષતા લક્ષ્ય ઉત્પાદન પ્રાપ્ત થયું હતું અને તેનો ઉપયોગ નીચેના સંશોધન અને વિકાસમાં થઈ શકે છે.
| સાધન | સેપાબીન™મશીન 2 | |||
| કારતુસ | 12 g SepaFlash C18 RP ફ્લેશ કારતૂસ (ગોળાકાર સિલિકા, 20 - 45 μm, 100 Å, ઓર્ડર નમ્બર: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP ફ્લેશ કારતૂસ (ગોળાકાર સિલિકા, 20 - 45 μm, 100 Å, ઓર્ડર નંબર：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| તરંગલંબાઇ | 254 એનએમ, 220 એનએમ | 214 એનએમ | ||
| મોબાઇલ તબક્કો | દ્રાવક A: પાણી દ્રાવક B: એસેટોનિટ્રિલ | |||
| પ્રવાહ દર | 15 એમએલ/મિનિટ | 20 એમએલ/મિનિટ | ||
| નમૂના લોડ કરી રહ્યું છે | 30 મિલિગ્રામ | |||
| ઢાળ | સમય (CV) | દ્રાવક B (%) | સમય (મિનિટ) | દ્રાવક B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
પરિણામો અને ચર્ચા
નિયમિત C18 કૉલમ અને C18AQ કૉલમ વચ્ચે ધ્રુવીય પેપ્ટાઇડ નમૂના માટે શુદ્ધિકરણ કામગીરીની સરખામણી કરવા માટે, અમે શરૂઆત તરીકે નમૂનાના ફ્લેશ શુદ્ધિકરણ માટે નિયમિત C18 કૉલમનો ઉપયોગ કર્યો.આકૃતિ 2 માં બતાવ્યા પ્રમાણે, ઉચ્ચ જલીય ગુણોત્તરને કારણે C18 સાંકળોના હાઇડ્રોફોબિક તબક્કાના પતનને કારણે, નમૂનાને નિયમિત C18 કારતૂસ પર ભાગ્યે જ જાળવી રાખવામાં આવ્યો હતો અને મોબાઇલ તબક્કા દ્વારા સીધો જ બહાર કાઢવામાં આવ્યો હતો.પરિણામે, નમૂનાને અસરકારક રીતે અલગ અને શુદ્ધ કરવામાં આવ્યું ન હતું.
આકૃતિ 2. નિયમિત C18 કારતૂસ પર નમૂનાનું ફ્લેશ ક્રોમેટોગ્રામ.
આગળ, અમે નમૂનાના ફ્લેશ શુદ્ધિકરણ માટે C18AQ કૉલમનો ઉપયોગ કર્યો.આકૃતિ 3 માં બતાવ્યા પ્રમાણે, પેપ્ટાઈડ અસરકારક રીતે કોલમ પર જાળવી રાખવામાં આવ્યું હતું અને પછી બહાર નીકળી ગયું હતું.લક્ષ્ય ઉત્પાદનને કાચા નમૂનામાં રહેલી અશુદ્ધિઓથી અલગ કરીને એકત્રિત કરવામાં આવ્યું હતું.લાયોફિલાઇઝેશન અને પછી HPLC દ્વારા વિશ્લેષણ કર્યા પછી, શુદ્ધ ઉત્પાદનની શુદ્ધતા 98.2% છે અને તેનો આગળના પગલાના સંશોધન અને વિકાસ માટે વધુ ઉપયોગ કરી શકાય છે.
આકૃતિ 3. C18AQ કારતૂસ પરના નમૂનાનો ફ્લેશ ક્રોમેટોગ્રામ.
નિષ્કર્ષમાં, SepaFlash C18AQ RP ફ્લેશ કારતૂસ ફ્લેશ ક્રોમેટોગ્રાફી સિસ્ટમ SepaBean સાથે જોડાયેલું છે.™મશીન મજબૂત ધ્રુવીય અથવા હાઇડ્રોફિલિક નમૂનાઓના શુદ્ધિકરણ માટે ઝડપી અને અસરકારક ઉકેલ પ્રદાન કરી શકે છે.
સેન્ટાઈ ટેક્નોલોજી (કોષ્ટક 2 માં બતાવ્યા પ્રમાણે) ના વિવિધ વિશિષ્ટતાઓ સાથે SepaFlash C18AQ RP ફ્લેશ કારતુસની શ્રેણી છે.
| આઇટમ નંબર | કૉલમનું કદ | પ્રવાહ દર (એમએલ/મિનિટ) | મહત્તમ દબાણ (psi/બાર) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ગ્રામ | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ગ્રામ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ગ્રામ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ગ્રામ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ગ્રામ | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ગ્રામ | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ગ્રામ | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ગ્રામ | 40-80 | 250/17.2 |
કોષ્ટક 2. SepaFlash C18AQ RP ફ્લેશ કારતુસ.પેકિંગ સામગ્રી: ઉચ્ચ કાર્યક્ષમતા ગોળાકાર C18(AQ)-બોન્ડેડ સિલિકા, 20 - 45 μm, 100 Å.
SepaBean™ મશીનની વિગતવાર વિશિષ્ટતાઓ અથવા SepaFlash શ્રેણીના ફ્લેશ કારતુસ પર ઓર્ડરિંગ માહિતી વિશે વધુ માહિતી માટે, કૃપા કરીને અમારી વેબસાઇટની મુલાકાત લો.
પોસ્ટ સમય: ઑક્ટો-12-2018