Mingzu Yang, Bo Xu
Centro de I + D de aplicación
Introdución
Os antibióticos son unha clase de metabolitos secundarios producidos por microorganismos (incluíndo bacterias, fungos, actinomicetos) ou compostos similares sintetizados ou semi-sintésizados químicamente. Os antibióticos poderían inhibir o crecemento e supervivencia doutros microorganismos. O primeiro antibiótico descuberto pola humana, a penicilina, foi descuberto polo microbiólogo británico Alexander Fleming en 1928. Observou que as bacterias nas proximidades do molde non podían crecer no prato de cultivo de Staphylococcus que estaba contaminado con moldes. Postulou que o molde debe segregar unha sustancia antibacteriana, que nomeou a penicilina en 1928. Non obstante, os ingredientes activos non se purificaron nese momento. En 1939, a cadea Ernst e Howard Florey, da Universidade de Oxford, decidiron desenvolver un medicamento que poida tratar infeccións bacterianas. Despois de contactar con Fleming para obter cepas, extraeron con éxito a penicilina das cepas. Para o seu exitoso desenvolvemento de penicilina como droga terapéutica, Fleming, Chain e Florey compartiron o Premio Nobel de Medicina de 1945.
Os antibióticos úsanse como axentes antibacterianos para tratar ou previr infeccións bacterianas. Hai varias categorías principais de antibióticos empregados como axentes antibacterianos: antibióticos β-lactam (incluíndo penicilina, cefalosporina, etc.), antibióticos aminoglicósidos, antibióticos macrólidos, tetraciclina antibióticos, cloramfenicol (total sintético), etc. A antibiótica inclúen o biolóxico (total sintético), e as fontes. semi-síntese e síntese total. Os antibióticos producidos pola fermentación biolóxica deben ser modificados estruturalmente mediante métodos químicos debido á estabilidade química, efectos secundarios tóxicos, espectro antibacteriano e outros problemas. Despois de modificar químicamente, os antibióticos poderían obter unha maior estabilidade, reducir os efectos secundarios tóxicos, ampliar o espectro antibacteriano, reducir a resistencia aos fármacos, mellorar a biodisponibilidade e mellorar o efecto do tratamento con drogas. Polo tanto, os antibióticos semi-sintéticos son actualmente a dirección máis popular no desenvolvemento de fármacos antibióticos.
No desenvolvemento de antibióticos semisintéticos, os antibióticos teñen as propiedades de baixa pureza, moitos subprodutos e compoñentes complexos xa que se derivan de produtos de fermentación microbiana. Neste caso, é especialmente importante a análise e control de impurezas en antibióticos semisintéticos. Para identificar e caracterizar de xeito eficaz as impurezas, é necesario obter unha cantidade suficiente de impurezas do produto sintético de antibióticos semi-sintéticos. Entre as técnicas de preparación de impureza de uso común, a cromatografía flash é un método rendible con vantaxes como a cantidade de gran cantidade de mostras, o baixo custo, o aforro de tempo, etc. A cromatografía flash foi cada vez máis empregada por investigadores sintéticos.
Neste post, a principal impureza dun antibiótico aminoglicósido semi-sintético utilizouse como a mostra e purificouse por un cartucho Sepaflash C18AQ combinado coa máquina do sistema de cromatografía flash sepabean ™. O produto obxectivo que cumpría os requisitos obtívose con éxito, suxerindo unha solución altamente eficiente para a purificación destes compostos.
Sección experimental
A mostra foi amablemente proporcionada por unha empresa farmacéutica local. A mostra foi unha especie de carbohidratos amino policíclicos e a súa estrutura molecular foi similar con antibióticos aminoglicósidos. A polaridade da mostra foi bastante alta, tornándoa moi soluble en auga. O diagrama esquemático da estrutura molecular da mostra mostrouse na figura 1. A pureza da mostra en bruto foi de aproximadamente o 88% segundo o analizado por HPLC. Para a purificación destes compostos de alta polaridade, a mostra apenas se conservaría nas columnas C18 regulares segundo as nosas experiencias anteriores. Polo tanto, empregouse unha columna C18AQ para a purificación da mostra.
Figura 1. O diagrama esquemático da estrutura molecular da mostra.
Para preparar a solución de mostra, disolveuse unha mostra bruta de 50 mg en 5 ml de auga pura e logo ultrasónica para facelo converterse nunha solución completamente clara. A solución da mostra foi inxectada na columna Flash por un inxector. A configuración experimental da purificación do flash foi listada na táboa 1.
| Instrumento | Máquina Sepabean ™ 2 | |
| Cartuchos | 12 g Sepaflash C18AQ RP Cartucho flash (sílice esférica, 20-45μm, 100 Å, número de orde ： SW-5222-012-Sp (aq)) | |
| Lonxitude de onda | 204 nm, 220 nm | |
| Fase móbil | Disolvente A: auga Disolvente B: acetonitrilo | |
| Caudal | 15 ml/min | |
| Carga de mostra | 50 mg | |
| Gradiente | Tempo (min) | Disolvente B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47,0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Resultados e discusión
O cromatograma flash da mostra no cartucho C18AQ mostrouse na figura 2. Como se mostra na figura 2, a mostra altamente polar mantívose efectivamente no cartucho C18AQ. Despois da liofolización para as fraccións recollidas, o produto obxectivo tiña unha pureza do 96,2% (como se mostra na figura 3) pola análise de HPLC. Os resultados indicaron que o produto purificado podería utilizarse máis na investigación e desenvolvemento do seguinte paso.
Figura 2. O cromatograma flash da mostra nun cartucho C18AQ.
Figura 3. O cromatograma HPLC do produto obxectivo.
En conclusión, o cartucho flash sepaflash C18AQ RP combinado co sistema de cromatografía flash Sepabean ™ Machine podería ofrecer unha solución rápida e eficaz para a purificación de mostras altamente polares.
Sobre os cartuchos de flash sepaflash C18AQ RP
Hai unha serie de cartuchos de flash Sepaflash C18AQ RP con diferentes especificacións da tecnoloxía Santai (como se mostra na táboa 2).
| Número de elemento | Tamaño da columna | Caudal (ml/min) | Max.pressura (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Táboa 2. Sepaflash C18AQ RP Cartuchos flash. Materiais de embalaxe: sílice esférica de alta eficiencia C18 (aq) sílice, 20-45 μm, 100 Å.
Para obter máis información sobre especificacións detalladas da máquina Sepabean ™ ou a información de pedido sobre cartuchos de flash da serie Sepaflash, visite o noso sitio web.
Tempo de publicación: outubro-26-2018