A aplicación das columnas de cromatografía de intercambio aniónico forte SepaFlash na purificación de compostos ácidos

Resultados e discusión

En primeiro lugar, a mestura de mostra foi separada por un cartucho flash de fase normal pre-embalado con sílice normal.Como se mostra na Figura 3, os dous compoñentes da mostra eluíronse do cartucho un tras outro.A continuación, utilizouse un cartucho flash SAX para a purificación da mostra.Como se mostra na Figura 4, o compoñente ácido B retivo completamente no cartucho SAX.O compoñente neutro A eluíuse gradualmente do cartucho coa elución da fase móbil.

Figura 3. O cromatograma flash da mostra nun cartucho normal de fase normal.

Figura 4. O cromatograma flash da mostra nun cartucho SAX.
Comparando a figura 3 e a figura 4, o compoñente A ten forma de pico inconsistente nos dous cartuchos flash diferentes.Para confirmar se o pico de elución corresponde ao compoñente, podemos utilizar a función de dixitalización de lonxitude de onda completa que está integrada no software de control da máquina SepaBean™.Abra os datos experimentais das dúas separacións, arrastre ata a liña indicadora no eixe do tempo (CV) no cromatograma ata o punto máis alto e o segundo punto máis alto do pico de elución correspondente ao compoñente A e o espectro completo de lonxitudes de onda destes dous. puntos mostraranse automaticamente debaixo do cromatograma (como se mostra na Figura 5 e Figura 6).Comparando os datos do espectro de lonxitude de onda completo destas dúas separacións, o compoñente A ten un espectro de absorción consistente en dous experimentos.Debido a que o compoñente A ten forma de pico inconsistente en dous cartuchos flash diferentes, especúlase que hai impurezas específicas no compoñente A que ten unha retención diferente no cartucho de fase normal e no cartucho SAX.Polo tanto, a secuencia de elución é diferente para o compoñente A e a impureza destes dous cartuchos flash, resultando unha forma de pico inconsistente nos cromatogramas.

Figura 5. O espectro completo de lonxitudes de onda do compoñente A e a impureza separados polo cartucho de fase normal.

Figura 6. O espectro completo de lonxitudes de onda do compoñente A e a impureza separada polo cartucho SAX.

Se o produto obxectivo a recoller é o compoñente neutro A, a tarefa de purificación pódese completar facilmente utilizando directamente o cartucho SAX para a elución despois da carga da mostra.Por outra banda, se o produto obxectivo a recoller é o compoñente ácido B, a forma de captura-liberación poderíase adoptar con só un lixeiro axuste nos pasos experimentais: cando a mostra se cargaba no cartucho SAX e o compoñente neutro A. foi completamente eluída con disolventes orgánicos de fase normal, cambiar a fase móbil a solución de metanol que contén ácido acético ao 5%.Os ións acetato na fase móbil competirán co compoñente B para unirse aos grupos iónicos amina cuaternario na fase estacionaria do cartucho SAX, eluíndo así o compoñente B do cartucho para obter o produto obxectivo.O cromatograma da mostra separada en modo de intercambio iónico mostrouse na Figura 7.

Figura 7. O cromatograma flash do compoñente B eluído en modo de intercambio iónico nun cartucho SAX.

En conclusión, a mostra ácida ou neutra podería ser purificada rapidamente mediante un cartucho SAX combinado cun cartucho de fase normal utilizando diferentes estratexias de purificación.Ademais, coa axuda da función de dixitalización de lonxitude de onda completa integrada no software de control da máquina SepaBean™, o espectro de absorción característico das fraccións eluídas podería compararse e confirmarse facilmente, axudando aos investigadores a determinar rapidamente a composición e pureza das fraccións eluidas e mellorar así. eficiencia laboral.