A aplicación das columnas C18AQ na purificación de péptidos polares fortes

Rui Huang, Bo Xu
Centro de I+D de aplicación

Introdución
Un péptido é un composto composto por aminoácidos, cada un dos cales ten propiedades físicas e químicas únicas debido aos diferentes tipos e ordes de residuos de aminoácidos que constitúen a súa secuencia.Co desenvolvemento da síntese química en fase sólida, a síntese química de varios péptidos activos avanzou moito.Non obstante, debido á complicada composición do péptido obtido por síntese en fase sólida, o produto final debe purificarse mediante métodos de separación fiables.Os métodos de purificación de péptidos comúnmente utilizados inclúen a cromatografía de intercambio iónico (IEC) e a cromatografía líquida de alto rendemento en fase inversa (RP-HPLC), que teñen as desvantaxes de baixa capacidade de carga de mostras, alto custo dos medios de separación, equipos de separación complicados e custosos, etc. Para a purificación rápida de péptidos de moléculas pequenas (PM < 1 kDa), Santai Technologies publicou previamente un caso de aplicación exitoso no que se utilizou un cartucho SepaFlash RP C18 para a purificación rápida de timopentina (TP-5) e obtívose o produto obxectivo que cumpre os requisitos.

Figura 1. 20 aminoácidos comúns (reproducidos a partir de www.bachem.com).

Hai 20 tipos de aminoácidos que son comúns na composición dos péptidos.Estes aminoácidos pódense dividir nos seguintes grupos segundo a súa polaridade e propiedade ácido-base: non polares (hidrófobos), polares (sen carga), ácidos ou básicos (como se mostra na Figura 1).Nunha secuencia peptídica, se os aminoácidos que constitúen a secuencia son na súa maioría polares (como se indica en cor rosa na Figura 1), como a cisteína, glutamina, asparagina, serina, treonina, tirosina, etc., entón este péptido pode ter un forte polaridade e ser moi soluble en auga.Durante o procedemento de purificación destas mostras de péptidos polares fortes mediante cromatografía en fase inversa, producirase un fenómeno chamado colapso de fase hidrofóbica (consulte unha nota de aplicación publicada anteriormente por Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns and Their Applications).En comparación coas columnas C18 normais, as columnas C18AQ melloradas son máis adecuadas para a purificación de mostras polares ou hidrófilas fortes.Nesta publicación, utilizouse un péptido polar forte como mostra e purificouse mediante unha columna C18AQ.Como resultado, obtívose o produto obxectivo que cumpre os requisitos e podería usarse nas seguintes investigacións e desenvolvementos.