Rui Huang, Bo Xu
Ionad R&D tagraidh
Ro-ràdh
Is e todhar a th’ ann am peptide air a dhèanamh suas de amino-aigéid, agus tha feartan fiosaigeach is ceimigeach sònraichte aig gach fear dhiubh air sgàth nan diofar sheòrsaichean agus òrdugh de fhuigheall aminoideach a tha na shreath.Le leasachadh synthesis ceimigeach ìre cruaidh, tha an synthesis ceimigeach de dhiofar peptides gnìomhach air adhartas mòr a dhèanamh.Ach, mar thoradh air co-dhèanamh iom-fhillte na peptide a gheibhear le synthesis ìre cruaidh, bu chòir an toradh deireannach a bhith air a ghlanadh le dòighean dealachaidh earbsach.Tha na dòighean glanaidh a thathas a’ cleachdadh gu cumanta airson peptides a’ toirt a-steach cromatagrafaidheachd iomlaid ian (IEC) agus cromatagrafaidheachd lionn àrd-choileanadh aig ìre cùil (RP-HPLC), aig a bheil eas-bhuannachdan comas luchdachadh sampall ìosal, cosgais àrd meadhanan dealachaidh, uidheamachd dealachaidh iom-fhillte agus cosgail, Airson glanadh luath de pheptidean beaga moileciuil (MW <1 kDa), chaidh cùis tagraidh soirbheachail fhoillseachadh roimhe le Santai Technologies, anns an deach cetris SepaFlash RP C18 a chleachdadh airson glanadh luath de thymopentin (TP-5) agus an chaidh toradh targaid a choinnicheas ri riatanasan fhaighinn.
Figear 1. 20 amino-aigéid cumanta (air an ath-riochdachadh bho www.bachem.com).
Tha 20 seòrsa de amino-aigéid ann a tha cumanta ann an co-dhèanamh peptides.Faodar na h-amino-aigéid sin a roinn anns na buidhnean a leanas a rèir an cuid polarity agus seilbh bonn searbhagach: neo-polar (hydrophobic), polar (gun chìsean), searbhagach no bunaiteach (mar a chithear ann am Figear 1).Ann an sreath peptide, ma tha na h-amino-aigéid anns an t-sreath mar as trice feadhainn pòlach (mar a tha air an comharrachadh ann an dath pinc ann am Figear 1), leithid Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, msaa, is dòcha gu bheil neart làidir aig a’ pheptide seo. polarity agus a bhith gu math solubhail ann an uisge.Rè a ’mhodh glanaidh airson na sampallan peptide polar làidir sin le cromatagrafaidheachd ìre cùil, bidh iongantas ris an canar tuiteam ìre hydrophobic a’ tachairt (thoir sùil air nota tagraidh a chaidh fhoillseachadh roimhe le Santai Technologies: Ìre Hydrophobic Collapse, Colbhan Chromatography Ìre AQ air ais agus na tagraidhean aca).An coimeas ris na colbhan àbhaisteach C18, tha na colbhan C18AQ leasaichte as freagarraiche airson sampallan làidir polar no hydrophilic a ghlanadh.Anns an dreuchd seo, chaidh peptide polar làidir a chleachdadh mar an sampall agus a ghlanadh le colbh C18AQ.Mar thoradh air an sin, chaidh an toradh targaid a choinnicheas ris na riatanasan fhaighinn agus faodar a chleachdadh anns an rannsachadh agus an leasachadh a leanas.
| Ionnsramaid | SepaBean™inneal 2 | |||
| Cartridan | 12 g SepaFlash C18 RP flash cartridge (spherical silica, 20 - 45 μm, 100 Å, Òrdugh àireamh-sluaigh: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP flash cartridge (spherical silica, 20 - 45 μm, 100 Å, àireamh òrduigh: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Tonn-thonn | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Ìre gluasadach | Fuasgladh A: Uisge Fuasgladh B: Acetonitrile | |||
| Ìre sruth | 15 mL / min | 20 mL / min | ||
| Eisimpleir luchdachadh | 30 mg | |||
| Caisead | Uair (CV) | Fuasgladh B (%) | Uair (mion) | Fuasgladh B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Toraidhean agus Deasbaireachd
Gus coimeas a dhèanamh eadar coileanadh glanaidh an t-sampall polar peptide eadar colbh cunbhalach C18 agus colbh C18AQ, chleachd sinn colbh C18 cunbhalach airson glanadh flash an t-sampall mar thoiseach tòiseachaidh.Mar a chithear ann am Figear 2, mar thoradh air tuiteam ìre hydrophobic de na slabhraidhean C18 air adhbhrachadh le co-mheas àrd uisgeach, is gann gun deach an sampall a chumail air a’ chairt àbhaisteach C18 agus chaidh a chuir a-mach gu dìreach leis an ìre gluasadach.Mar thoradh air an sin, cha deach an sampall a sgaradh agus a ghlanadh gu h-èifeachdach.
Figear 2. Cromatogram flash an t-sampall air cairt àbhaisteach C18.
An uairsin, chleachd sinn colbh C18AQ airson an sampall a ghlanadh.Mar a chithear ann am Figear 3, chaidh am peptide a chumail gu h-èifeachdach air a’ cholbh agus an uairsin a chuir a-mach.Chaidh an toradh targaid a sgaradh bho na neo-chunbhalachd san sampall amh agus a chruinneachadh.Às deidh lyophilization agus an uairsin air a sgrùdadh le HPLC, tha purrachd de 98.2% aig an toradh fìor-ghlan agus dh ’fhaodadh e a bhith air a chleachdadh tuilleadh airson an ath cheum rannsachadh agus leasachadh.
Figear 3. Cromatogram flash an t-sampall air cairt C18AQ.
Ann an co-dhùnadh, SepaFlash C18AQ RP flash cartridge còmhla ris an t-siostam cromatagrafaidheachd flash SepaBean™dh’ fhaodadh inneal fuasgladh luath is èifeachdach a thabhann airson a bhith a’ glanadh sampaill làidir polar no hydrophilic.
Tha sreath de chairtean flash SepaFlash C18AQ RP le diofar shònrachaidhean bho Santai Technology (mar a chithear ann an Clàr 2).
| Àireamh Nì | Meud Colbh | Ìre sruth (mL/mion) | Max.Brùthadh (psi/bàr) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Clàr 2. SepaFlash C18AQ RP flash chairtean.Stuthan pacaidh: spherical àrd-èifeachdais C18 (AQ) le ceangal silica, 20 - 45 μm, 100 Å.
Airson tuilleadh fiosrachaidh mu shònrachaidhean mionaideach inneal SepaBean ™, no am fiosrachadh òrdachaidh mu chairtean flash sreath SepaFlash, tadhal air an làrach-lìn againn.
Ùine puist: Oct-12-2018