Hongcheng Wang, Bo Xu
Ionad R&D tagraidh
Ro-ràdh
A rèir polarities coimeasach ìre pàipearachd agus ìre gluasadach, faodar cromatagrafaidheachd liùlach a roinn ann an cromatagrafaidheachd ìre àbhaisteach (NPC) agus cromatagrafaidheachd ìre air ais (RPC).Airson RPC, tha polarity na h-ìre gluasadach nas làidire na an ìre pàipearachd.Tha RPC air a thighinn gu bhith mar an tè as fharsainge a thathas a’ cleachdadh ann am modhan dealachaidh cromatagrafaidheachd liùlach air sgàth cho àrd-èifeachdais, deagh rùn agus inneal gleidhidh soilleir.Mar sin tha RPC freagarrach airson a bhith a 'sgaradh agus a' glanadh diofar choimeasgaidhean pòlach no neo-phòla, a 'gabhail a-steach alkaloids, carbohydrates, fatty acids, steroids, nucleic acids, amino acids, peptides, proteins, etc. Ann an RPC, is e an ìre pàipearachd as cumanta. am matrix gel silica a tha ceangailte ri diofar bhuidhnean gnìomh, nam measg C18, C8, C4, phenyl, cyano, amino, msaa. Am measg nam buidhnean gnìomh bannaichte sin, is e C18 am fear as fharsainge a thathas a’ cleachdadh.Thathas a’ meas gu bheil còrr air 80% de RPC a-nis a’ cleachdadh ìre bannaichte C18.Mar sin tha colbh cromatagrafaidheachd C18 air a thighinn gu bhith na cholbh uile-choitcheann airson gach obair-lann.
Ged a dh’fhaodar colbh C18 a chleachdadh ann an raon farsaing de thagraidhean, ge-tà, airson cuid de shamhlaichean a tha gu math pòlach no fìor hydrophilic, dh’ fhaodadh gum bi duilgheadasan aig colbhan cunbhalach C18 nuair a thathas gan cleachdadh airson na sampallan sin a ghlanadh.Ann an RPC, faodar na fuasglaidhean elution a chleachdar gu cumanta òrdachadh a rèir am polarity: uisge < methanol < acetonitrile < ethanol < tetrahydrofuran < isopropanol.Gus dèanamh cinnteach à glèidheadh math air a’ cholbh airson na sampallan sin (polar làidir no fìor hydrophilic), feumar cuibhreann àrd de shiostam uisgeach a chleachdadh mar an ìre gluasadach.Ach, nuair a bhios tu a’ cleachdadh siostam uisge fìor-ghlan (a’ toirt a-steach uisge fìor-ghlan no fuasgladh salainn fìor-ghlan) mar an ìre gluasadach, tha an t-sreath fhada gualain air ìre pàipearachd colbh C18 buailteach an uisge a sheachnadh agus measgachadh le chèile, a’ leantainn gu lùghdachadh sa bhad anns an comas glèidhidh a’ cholbh no eadhon gun gleidheadh.Canar “tuiteam ìre hydrophobic” ris an iongantas seo (mar a chithear ann am pàirt clì Figear 1).Ged a ghabhas an suidheachadh seo a thionndadh air ais nuair a thèid an colbh a nighe le fuasglaidhean organach leithid methanol no acetonitrile, faodaidh e fhathast milleadh a dhèanamh air a’ cholbh.Mar sin, feumar casg a chuir air an t-suidheachadh seo.
Figear 1. An diagram sgeamach de na h-ìrean ceangail air uachdar gel silica ann an colbh cunbhalach C18 (clì) agus colbh C18AQ (deas).
Gus dèiligeadh ris na duilgheadasan gu h-àrd, tha an luchd-saothrachaidh stuthan pacaidh cromatagrafach air leasachaidhean teignigeach a dhèanamh.Tha aon de na leasachaidhean sin a 'dèanamh beagan atharrachaidhean air uachdar an silica matrix, leithid toirt a-steach buidhnean hydrophilic cyano (mar a chithear anns a' phàirt cheart de Figear 1), gus uachdar an silica gel a dhèanamh nas hydrophilic.Mar sin dh’ fhaodadh na slabhraidhean C18 air an uachdar silica a bhith air an leudachadh gu h-iomlan fo chumhachan fìor uisgeach agus dh’ fhaodadh tuiteam ìre hydrophobic a sheachnadh.Canar colbhan uisgeach C18 ris na colbhan C18 atharraichte seo, is e sin colbhan C18AQ, a tha air an dealbhadh airson suidheachaidhean elution fìor uisgeach agus as urrainn gabhail ri siostam uisgeach 100%.Tha colbhan C18AQ air an cur an sàs gu farsaing ann a bhith a’ sgaradh agus a’ glanadh todhar pòla làidir, a’ toirt a-steach searbhagan organach, peptides, nucleosides agus vitamain a tha soluiteach ann an uisge.
Is e desalting aon de na tagraidhean àbhaisteach de cholbhan C18AQ anns an glanadh flash airson sampaill, a bheir air falbh na pàirtean salainn no bufair anns an t-sampall fuasglaidh gus cleachdadh an t-sampall ann an sgrùdaidhean às deidh sin a dhèanamh comasach.Anns an dreuchd seo, chaidh an Brilliant Blue FCF le polarity làidir a chleachdadh mar an sampall agus a ghlanadh air colbh C18AQ.Chaidh fuasgladh organach bho fhuasgladh bufair a chuir an àite an t-sampall solvent, mar sin a’ comasachadh an falmhachadh rothlach a leanas a bharrachd air a bhith a’ sàbhaladh fuasglaidh agus ùine obrachaidh.A bharrachd air an sin, chaidh purrachd an t-sampall a leasachadh le bhith a’ toirt air falbh cuid de neo-chunbhalachd san sampall.
Earrann Deuchainneach
Figear 2. Structar ceimigeach an t-sampall.
Chaidh an Brilliant Blue FCF a chleachdadh mar an sampall san dreuchd seo.B' e purrachd an t-sampall amh 86% agus chaidh structar ceimigeach an t-sampall a shealltainn ann am Figear 2. Gus am fuasgladh sampall ullachadh, chaidh 300 mg de chruaidh amh pùdarrach de Brilliant Blue FCF a sgaoileadh ann am fuasgladh bufair 1 M NaH2PO4 agus chrath e gu math gus a bhith. fuasgladh gu tur soilleir.Chaidh am fuasgladh sampall an uairsin a chuir a-steach don cholbh flash le inneal-stealladh.Tha suidheachadh deuchainneach an glanadh flash air a liostadh ann an Clàr 1.
| Ionnsramaid | Inneal SepaBean™2 | |||
| Cartridan | 12 g SepaFlash C18 RP flash cartridge (spherical silica, 20 - 45 μm, 100 Å, àireamh òrduigh: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP flash cartridge (spherical silica, 20 - 45 μm, 100 Å, àireamh òrduigh: SW-5222-012-SP (AQ)） | ||
| Tonn-thonn | 254 nm | |||
| Ìre gluasadach | Fuasgladh A: Uisge Fuasgladh B: meatanal | |||
| Ìre sruth | 30 mL / min | |||
| Eisimpleir luchdachadh | 300 mg (Brilliant Blue FCF le purrachd 86%) | |||
| Caisead | Uair (CV) | Fuasgladh B (%) | Uair (CV) | Fuasgladh B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Toraidhean agus Deasbaireachd
Chaidh cetris flash SepaFlash C18AQ RP a chleachdadh airson sampallan desalting agus glanadh.Chaidh caisead ceum a chleachdadh anns an deach uisge fìor-ghlan a chleachdadh mar an ìre gluasadach aig toiseach elution agus ruith airson 10 leabhraichean colbh (CV).Mar a chithear ann am Figear 3, nuair a chaidh uisge fìor-ghlan a chleachdadh mar an ìre gluasadach, chaidh an sampall a chumail gu tur air a’ chairt flash.An uairsin, chaidh am methanol anns an ìre gluasadach àrdachadh gu dìreach gu 100% agus chaidh an caisead a chumail airson 7.5 CV.Chaidh an sampall a chuir a-mach bho 11.5 gu 13.5 CV.Anns na bloighean cruinnichte, chaidh am fuasgladh sampall a chuir na àite bho fhuasgladh bufair NaH2PO4 gu methanol.An coimeas ri fuasgladh fìor uisgeach, bha e mòran na b’ fhasa methanol a thoirt air falbh le falmhachadh rothlach anns a’ cheum às deidh sin, a tha a’ comasachadh an rannsachadh a leanas.
Figear 3. Cromatogram flash an t-sampall air cairt C18AQ.
Gus coimeas a dhèanamh eadar giùlan gleidhidh cartridge C18AQ agus cartridge C18 cunbhalach airson sampallan de phòla làidir, chaidh deuchainn coimeas co-shìnte a dhèanamh.Chaidh cartris flash SepaFlash C18 RP a chleachdadh agus chaidh a’ chromatogram flash airson an t-sampall a shealltainn ann am Figear 4. Airson cartridan cunbhalach C18, tha an co-mheas ìre uisgeach as àirde a tha fo fhulangas timcheall air 90%.Mar sin chaidh an caisead tòiseachaidh a shuidheachadh aig 10% methanol ann an 90% uisge.Mar a chithear ann am Figear 4, mar thoradh air tuiteam ìre hydrophobic de na slabhraidhean C18 air adhbhrachadh le co-mheas àrd uisgeach, is gann gun deach an sampall a chumail air a’ chairt àbhaisteach C18 agus chaidh a chuir a-mach gu dìreach leis an ìre gluasadach.Mar thoradh air an sin, chan urrainnear crìoch a chuir air obrachadh desalting no glanadh sampall.
Figear 4. Cromatogram flash an t-sampall air cairt àbhaisteach C18.
An coimeas ri caisead sreathach, tha na buannachdan a leanas aig cleachdadh caisead ceum:
1. Tha cleachdadh fuasglaidh agus ùine ruith airson glanadh sampall air a lùghdachadh.
2. Bidh an toradh targaid a 'falach ann an stùc biorach, a tha a' lùghdachadh na tha de bhloighean cruinnichte agus mar sin a 'comasachadh a' ghluasad rothlach a leanas a bharrachd air a bhith a 'sàbhaladh ùine.
3. Tha an toradh cruinnichte ann am methanol a tha furasta a ghluasad, agus mar sin tha an ùine tiormachaidh air a lughdachadh.
Ann an co-dhùnadh, airson an sampall a tha gu math polar no fìor hydrophilic a ghlanadh, dh’ fhaodadh cartridan flash SepaFlash C18AQ RP a bhith còmhla ris an t-siostam cromatagrafaidheachd flash ullachaidh SepaBean ™ Machine fuasgladh luath is èifeachdach a thabhann.
Mu na cartridan flash SepaFlash Bonded Series C18 RP
Tha sreath de chairtean flash SepaFlash C18AQ RP le diofar shònrachaidhean bho Santai Technology (mar a chithear ann an Clàr 2).
| Àireamh Nì | Meud Colbh | Ìre sruth (mL/mion) | Max.Brùthadh (psi/bàr) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Clàr 2. SepaFlash C18AQ RP flash chairtean.
Stuthan pacaidh: spherical àrd-èifeachdais C18 (AQ) le ceangal silica, 20 - 45 μm, 100 Å.
logic (mar a chithear ann an Clàr 2).
Ùine puist: Lùnastal-27-2018