Rui Huang, Bo xu
Ionad T&F Iarratais
Tabhairt isteach
Is comhdhúil é peiptíd atá comhdhéanta d'aigéid aimín, a bhfuil airíonna fisiceacha agus ceimiceacha uathúla ag gach ceann acu mar gheall ar na cineálacha éagsúla agus na hordú aimínaigéid arb ionann iad agus a seicheamh. Le forbairt sintéis cheimiceach chéim sholadach, tá dul chun cinn mór déanta ag sintéis cheimiceach peiptídí gníomhacha éagsúla. Mar sin féin, mar gheall ar chomhdhéanamh casta na peiptíde a fhaightear trí shintéis chéim sholadach, ba cheart an táirge deiridh a íonú trí mhodhanna idirscartha iontaofa. I measc na modhanna íonaithe a úsáidtear go coitianta le haghaidh peiptídí tá crómatagrafaíocht mhalartaithe ian (IEC) agus crómatagrafaíocht leachtach ardfheidhmíochta (RP-HPLC), a bhfuil míbhuntáistí acu maidir le cumas luchtaithe sampla íseal, costas ard deighilte sna meáin idirscartha, trealamh casta agus costasach, srl. Teicneolaíochtaí, inar úsáideadh datha sepaflash RP C18 chun íonú tapa thymopentin (TP-5) agus an sprioc-tháirge a fhuarthas. Fuarthas na riachtanais.
Figiúr 1. 20 aimínaigéid choitianta (atáirgthe ó www.bachem.com).
Tá 20 cineál aimínaigéid ann atá coitianta i gcomhdhéanamh peiptídí. Is féidir na haigéid aimín seo a roinnt sna grúpaí seo a leanas de réir a bpolaraíocht agus a gcuid maoine aigéad-aigéad: neamhphola (hidreafóbach), polar (neamh-mhuirearaithe), aigéadach nó bunúsach (mar a thaispeántar i bhFigiúr 1). I seicheamh peiptíde, má tá na haigéid aimín arb ionann iad agus na cinn is mó a bhfuil an seicheamh acu (mar atá marcáilte i ndath bándearg i bhFigiúr 1), mar shampla cistéin, glutamine, asparagine, serine, theonine, tyrosine, etc. Le linn an nós imeachta íonaithe do na samplaí láidre peiptíde polar seo trí chrómatagrafaíocht chéim droim ar ais, tarlóidh feiniméan ar a dtugtar titim chéim hidreafóbach (déan tagairt do nóta iarratais a foilsíodh roimhe seo ag Santai Technologies: Titim Céim Hydrophobic, Colúnáin Chramatagrafaíochta Céim-Chramatagrafaíochta agus a n-iarratas). I gcomparáid leis na colúin rialta C18, tá na colúin feabhsaithe C18AQ an -oiriúnach chun samplaí láidre polar nó hydrophilic a íonú. Sa phost seo, baineadh úsáid as peptide Polar láidir mar an sampla agus íonaíodh é le colún C18AQ. Mar thoradh air sin, fuarthas an sprioc -tháirge go bhfuarthas na riachtanais agus go bhféadfaí é a úsáid sa taighde agus sa fhorbairt seo a leanas.
| Ionstraim | Sepabean™meaisín 2 | |||
| Cartúis | 12 g sepaflash C18 RP Flash datha (shilice sféarúil, 20-45 μm, 100 Å, Ordú Nunber: SW-5222-012-SP) | 12 g sepaflash C18AQ RP Flash datha (shilice sféarúil, 20-45 μm, 100 Å, uimhir ordaithe ： SW-5222-012-SP (aq)) | ||
| Tonnfhad | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Céim soghluaiste | Tuaslagóir A: Uisce Tuaslagóir B: acetonitrile | |||
| Ráta sreafa | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Luchtú samplach | 30 mg | |||
| Gráda | Am (CV) | Tuaslagóir B (%) | Am (min) | Tuaslagóir B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Torthaí agus plé
Chun comparáid a dhéanamh idir an fheidhmíocht íonaithe don sampla peiptíde Polar idir colún rialta C18 agus colún C18AQ, d'úsáid muid colún rialta C18 chun an sampla a íonú mar thús. Mar a léirítear i bhFigiúr 2, mar gheall ar an gcéim hidreafóbach a thit na slabhraí C18 de bharr cóimheas ard uiscí, is beag a coinníodh an sampla ar an datha rialta C18 agus bhí sé á dhíscaoileadh go díreach ag an gcéim shoghluaiste. Mar thoradh air sin, ní dhearnadh an sampla a dheighilt agus a íonú go héifeachtach.
Figiúr 2. Crómatagram flash an tsampla ar datha rialta C18.
Ansin, d'úsáid muid colún C18AQ chun an sampla a íonú. Mar a thaispeántar i bhFigiúr 3, coinníodh an peiptíd go héifeachtach ar an gcolún agus ansin í a ídiú. Rinneadh an sprioc -tháirge a dheighilt ó na heisíontais sa sampla amh agus bailíodh é. Tar éis lyophilization agus a anailísiú ansin ag HPLC, tá íonacht 98.2% ag an táirge íonaithe agus d'fhéadfaí é a úsáid a thuilleadh le haghaidh taighde agus forbairt eile.
Figiúr 3. Crómatagram flash an tsampla ar datha C18AQ.
Mar fhocal scoir, datha flash sepaflash C18AQ RP in éineacht leis an gcóras crómatagrafaíochta Flash Sepabean™D'fhéadfadh an meaisín réiteach tapa agus éifeachtach a thairiscint chun samplaí láidre polar nó hydrophilic a íonú.
Tá sraith de chartúis flash sepaflash C18AQ RP le sonraíochtaí éagsúla ó theicneolaíocht Santai (mar a thaispeántar i dTábla 2).
| Uimhir earra | Méid an cholúin | Ráta sreafa (ml/min) | Max.pressure (PSI/Bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tábla. Ábhair phacála: Silice sféarúil ardéifeachtúlachta (aq)-shilice, 20-45 μm, 100 Å.
Le haghaidh tuilleadh eolais ar shonraíochtaí mionsonraithe Meaisín Sepabean ™, nó an t -eolas a ordú ar Flash Cartúis Sraith Sepaflash, tabhair cuairt ar ár láithreán gréasáin.
Am Post: Deireadh Fómhair-12-2018