Rui Huang, Bo Xu
Ionad T&F na bhFeidhmchlár
Réamhrá
Is comhdhúil é peptide atá comhdhéanta d’aimínaigéid, a bhfuil airíonna fisiceacha agus ceimiceacha uathúla ag gach ceann acu mar gheall ar na cineálacha éagsúla agus ord na n-iarmhar aimínaigéad atá ina sheicheamh.Le forbairt sintéise ceimiceach céim soladach, tá dul chun cinn mór déanta ag sintéis cheimiceach peptídí gníomhacha éagsúla.Mar sin féin, mar gheall ar chomhdhéanamh casta an pheptíde a fhaightear trí shintéis chéim soladach, ba cheart an táirge deiridh a íonú trí mhodhanna deighilte iontaofa.I measc na modhanna íonú a úsáidtear go coitianta le haghaidh peptídí tá crómatagrafaíocht malairte ian (IEC) agus crómatagrafaíocht leachta ardfheidhmíochta céim droim ar ais (RP-HPLC), a bhfuil na míbhuntáistí a bhaineann le cumas luchtaithe sampla íseal, ardchostas meán deighilte, trealamh deighilte casta agus costasach, etc. Chun peiptídí móilíní beaga (MW < 1 kDa) a íonú go tapa, d'fhoilsigh Santai Technologies cás iarratais rathúil roimhe seo, inar úsáideadh cartús SepaFlash RP C18 le haghaidh íonú tapa thymopentin (TP-5) agus an fuarthas sprioctháirge a chomhlíon na ceanglais.
Fíor 1. 20 aimínaigéid coitianta (atáirgeadh ó www.bachem.com).
Tá 20 cineál aimínaigéid ann atá coitianta i gcomhdhéanamh peptídí.Is féidir na aimínaigéid seo a roinnt sna grúpaí seo a leanas de réir a bpolúlachta agus a n-airíonna bun-aigéad: neamhpholach (hidreafóbach), polar (neamhluchtaithe), aigéadach nó bunúsach (mar a thaispeántar i bhFíor 1).I seicheamh peptíde, más iad na aimínaigéid atá sa seicheamh cinn polar den chuid is mó (mar atá marcáilte le dath bándearg i bhFíor 1), mar shampla Cistéin, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, etc., d'fhéadfadh go mbeadh neart láidir ag an peptíd seo. polaraíocht agus a bheith an-intuaslagtha in uisce.Le linn an nós imeachta íonúcháin do na samplaí peiptíde polacha láidre seo trí chrómatagrafaíocht céime droim ar ais, tarlóidh feiniméan ar a dtugtar titim céime hidreafóbach (féach nóta iarratais a d'fhoilsigh Santai Technologies roimhe seo: Collapse Céim Hidreafóbach, Colúin Chrómatagrafaíochta Céim Droimnithe AQ agus A bhFeidhmchláir).I gcomparáid leis na colúin rialta C18, tá na colúin C18AQ feabhsaithe is oiriúnaí chun samplaí láidre polacha nó hidreafail a íonú.Sa phost seo, baineadh úsáid as peptide polar láidir mar an sampla agus íonaithe ag colún C18AQ.Mar thoradh air sin, fuarthas an sprioctháirge a chomhlíonann na ceanglais agus d'fhéadfaí é a úsáid sa taighde agus san fhorbairt seo a leanas.
| Ionstraim | SepaBean™meaisín 2 | |||
| Cartúis | Cartús flash 12 g SepaFlash C18 RP (silice sféarúil, 20 - 45 μm, 100 Å, uimhir Ordaithe: SW-5222-012-SP) | Cartús flash 12 g SepaFlash C18AQ RP (silice sféarúil, 20 - 45 μm, 100 Å, Uimhir Ordaithe: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Tonnfhad | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Céim soghluaiste | Tuaslagóir A: Uisce Tuaslagóir B: Aicéatóintríle | |||
| Ráta sreafa | 15 ml/nóiméad | 20 ml/nim | ||
| Luchtú samplach | 30 mg | |||
| Grádán | Am (CV) | Tuaslagóir B (%) | Am (nóiméad) | Tuaslagóir B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Torthaí agus Plé
Chun comparáid a dhéanamh ar fheidhmíocht íonú an tsampla peptide polar idir colún rialta C18 agus colún C18AQ, d'úsáidamar colún C18 rialta chun an sampla a íonú mar thús.Mar a léirítear i bhFíor 2, mar gheall ar thitim chéim hidreafóbach na slabhraí C18 mar gheall ar chóimheas ard uiscí, is ar éigean a coinníodh an sampla ar an gcartán rialta C18 agus cuireadh amach go díreach é ag an gcéim shoghluaiste.Mar thoradh air sin, ní raibh an sampla scartha agus íonaithe go héifeachtach.
Fíor 2. Crómatagram splanc an tsampla ar chartúis rialta C18.
Ansin, d'úsáideamar colún C18AQ le haghaidh íonú flash an tsampla.Mar a thaispeántar i bhFíor 3, coinníodh an peptide go héifeachtach ar an gcolún agus ansin é a dhíbirt.Scaradh an sprioctháirge ó na neamhíonachtaí sa sampla amh agus bailíodh é.Tar éis lyophilization agus ansin anailíse ag HPLC, tá íonacht 98.2% ag an táirge íonaithe agus d'fhéadfaí é a úsáid tuilleadh le haghaidh taighde agus forbairt chéad chéim eile.
Fíor 3. Crómatagram splanc an tsampla ar chartúis C18AQ.
Mar fhocal scoir, cartús flash SepaFlash C18AQ RP in éineacht leis an gcóras crómatagrafaíochta splanc SepaBean™d'fhéadfadh meaisín réiteach tapa agus éifeachtach a thairiscint chun samplaí láidre polacha nó hidreafail a íonú.
Tá sraith de na cartúis flash SepaFlash C18AQ RP le sonraíochtaí éagsúla ó Santai Technology (mar a thaispeántar i dTábla 2).
| Uimhir na Míre | Méid Colún | Ráta Sreafa (mL/nóim) | Uas.Brú (psi/barra) |
| SW-5222-004- SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025- SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330- SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tábla 2. Cartúis flash SepaFlash C18AQ RP.Ábhair phacála: Silice sféarúil ard-éifeachtúlachta C18(AQ)-nasctha, 20 - 45 μm, 100 Å.
Le haghaidh tuilleadh faisnéise ar shonraíochtaí mionsonraithe meaisín SepaBean™, nó an fhaisnéis ordaithe ar cartúis splanc shraith SepaFlash, tabhair cuairt ar ár láithreán gréasáin.
Am postála: Oct-12-2018