
Hongcheng Wang, Bo XU
Ionad T&F Iarratais
Tabhairt isteach
De réir na bpolaíochtaí coibhneasta a bhaineann le céim stáiseanóireacht agus céim soghluaiste, is féidir crómatagrafaíocht leachtach a roinnt i ngnáth -chrómatagrafaíocht chéim (NPC) agus crómatagrafaíocht chéim (RPC) a aisiompú. Maidir le RPC, tá polaraíocht na céime soghluaiste níos láidre ná polaraíocht na céime ina stad. Is é RPC an ceann is mó a úsáidtear i modhanna deighilte crómatagrafaíochta leachtacha mar gheall ar a éifeachtúlacht ard, a mheicníocht mhaith agus a mheicníocht choinneála soiléir. Therefore RPC is suitable for the separation and purification of various polar or non-polar compounds, including alkaloids, carbohydrates, fatty acids, steroids, nucleic acids, amino acids, peptides, proteins, etc. In RPC, the most commonly used stationary phase is the silica gel matrix which is bonded with various functional groups, including C18, C8, C4, phenyl, Cyano, aimín, etc. I measc na ngrúpaí feidhme bannaí seo, is é C18 an ceann is mó a úsáidtear go forleathan. Meastar go bhfuil níos mó ná 80% den RPC ag baint úsáide as céim bhanna C18 anois. Dá bhrí sin, tá colún crómatagrafaíochta C18 ina cholún uilíoch nach mór do gach saotharlann.
Cé gur féidir colún C18 a úsáid i raon an -leathan d'iarratais, áfach, i gcás roinnt samplaí atá an -pholar nó an -hydrophilic, d'fhéadfadh fadhbanna a bheith ag colúin rialta C18 nuair a úsáidtear iad chun na samplaí sin a íonú. I RPC, is féidir na tuaslagóirí truaillithe a úsáidtear go coitianta a ordú de réir a bpolaraíocht: uisce <meatánól <acetonitrile <eatánól <tetrahydrofuran <isopropanol. Chun coinneáil mhaith a chinntiú ar an gcolún do na samplaí seo (polar láidir nó an -hydrophilic), tá gá le cion ard den chóras uiscí le húsáid mar chéim soghluaiste. Mar sin féin, nuair a bhíonn córas uisce íon á úsáid (lena n -áirítear tuaslagán uisce íon nó tuaslagán salainn íon) mar an chéim shoghluaiste, bíonn claonadh ag an slabhra carbóin fada ar an gcéim fos de cholún C18 an t -uisce a sheachaint agus a mheascadh lena chéile, rud a fhágann go bhfuil laghdú láithreach ar acmhainn choinneála an cholúin nó fiú gan coinneáil. Tugtar “titim chéim hidreafóbach” ar an bhfeiniméan seo (mar a thaispeántar sa chuid chlé de fhigiúr 1). Cé go bhfuil an cás seo inchúlaithe nuair a dhéantar an colún a ní le tuaslagóirí orgánacha amhail meatánól nó acetonitrile, is féidir leis damáiste a dhéanamh don cholún fós. Dá bhrí sin, is gá cosc a chur ar an gcás seo tarlú.

Figiúr.
Chun aghaidh a thabhairt ar na fadhbanna thuasluaite, tá feabhsuithe teicniúla déanta ag monaróirí na n -ábhar pacála crómatagrafaíochta. Ceann de na feabhsuithe seo ná roinnt modhnuithe a dhéanamh ar dhromchla na maitríse shilice, mar shampla grúpaí cyano hydrophilic a thabhairt isteach (mar a thaispeántar sa chuid cheart de fhigiúr 1), chun dromchla an ghlóthach shilice a dhéanamh níos hydrophilic. Dá bhrí sin d'fhéadfaí na slabhraí C18 ar dhromchla shilice a leathnú go hiomlán faoi choinníollacha an -uiscí agus d'fhéadfaí an titim chéim hidreafóbach a sheachaint. Tugtar colúin uiscí C18 ar na colúin modhnaithe C18 seo, eadhon colúin C18AQ, atá deartha le haghaidh coinníollacha truaillithe an -uiscí agus is féidir leo glacadh le córas uiscí 100%. Cuireadh colúin C18AQ i bhfeidhm go forleathan i scaradh agus íonú comhdhúile polar láidre, lena n-áirítear aigéid orgánacha, peiptídí, núicléasdáin agus vitimíní intuaslagtha in uisce.
Tá díscaoileadh ar cheann de na tipiciúla a bhaineann le colúin C18AQ sa íonú flash le haghaidh samplaí, a chuireann deireadh leis na comhpháirteanna salainn nó maolánacha sa tuaslagóir samplach chun cur i bhfeidhm an tsampla a éascú i staidéir ina dhiaidh sin. Sa phost seo, baineadh úsáid as an FCF gorm iontach le polaraíocht láidir mar an sampla agus íonaíodh é ar cholún C18AQ. Cuireadh tuaslagóir orgánach in ionad an tuaslagóra samplach ó thuaslagán maolánach, rud a d'éascaigh an galú rothlach seo a leanas chomh maith le tuaslagóirí agus am oibriúcháin a shábháil. Ina theannta sin, feabhsaíodh íonacht an tsampla trí roinnt eisíontas a bhaint sa sampla.
Rannóg thrialach

Figiúr 1. Struchtúr ceimiceach an tsampla.
Baineadh úsáid as an FCF gorm iontach mar an sampla sa phost seo. Ba é íonacht an tsampla amh ná 86% agus taispeánadh struchtúr ceimiceach an tsampla i bhFíor 2. Chun an tuaslagán samplach a ullmhú, tuaslagadh 300 mg solad amhola 300 mg de FCF gorm iontach i dtuaslagán maolánach 1 M Nah2po4 agus chroith sé go maith le bheith ina réiteach go hiomlán soiléir. Rinneadh instealladh ar an tuaslagán samplach ansin sa cholún flash ag instealladh. Tá an leagan turgnamhach den íonú flash liostaithe i dTábla 1.
Ionstraim | Meaisín Sepabean ™2 | |||
Cartúis | 12 g sepaflash c18 rp flash datha (shilice sféarúil, 20-45 μm, 100 Å, uimhir ordaithe: SW-5222-012-SP) | 12 g sepaflash C18AQ RP Flash datha (shilice sféarúil, 20-45 μm, 100 Å, uimhir ordaithe : SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
Tonnfhad | 254 nm | |||
Céim soghluaiste | Tuaslagóir a: uisce Tuaslagóir B: meatánól | |||
Ráta sreafa | 30 ml/min | |||
Luchtú samplach | 300 mg (FCF gorm iontach leis an íonacht de 86%) | |||
Gráda | Am (CV) | Tuaslagóir B (%) | Am (CV) | Tuaslagóir B (%) |
0 | 10 | 0 | 0 | |
10 | 10 | 10 | 0 | |
10.1 | 100 bliain d'aois | 10.1 | 100 bliain d'aois | |
17.5 | 100 bliain d'aois | 17.5 | 100 bliain d'aois | |
17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
22.6 | 10 | 22.6 | 0 |
Torthaí agus plé
Baineadh úsáid as datha flash sepaflash C18AQ RP chun sampla a dhéanamh agus íonú a dhéanamh. Baineadh úsáid as grádán céim inar úsáideadh uisce íon mar an chéim shoghluaiste ag tús an truaillithe agus ag rith le haghaidh 10 méid colúin (CV). Mar a thaispeántar i bhFigiúr 3, agus uisce íon á úsáid mar an chéim shoghluaiste, coinníodh an sampla go hiomlán ar an datha flash. Ansin, méadaíodh an meatánól sa chéim shoghluaiste go 100% agus coinníodh an grádán ar feadh 7.5 cv. Rinneadh an sampla a ídiú amach ó 11.5 go 13.5 cv. Sna codáin bailithe, cuireadh an tuaslagán samplach in ionad tuaslagán maolánach NaH2po4 go meatánól. I gcomparáid le tuaslagán an -uiscí, bhí sé níos éasca meatánól a bhaint trí ghalú rothlach sa chéim ina dhiaidh sin, a éascaíonn an taighde seo a leanas.

Figiúr 3. Crómatagram flash an tsampla ar datha C18AQ.
Chun comparáid a dhéanamh idir iompar coinneála datha C18AQ agus datha rialta C18 le haghaidh samplaí de pholaraíocht láidir, rinneadh tástáil chomparáide comhthreomhar. Baineadh úsáid as datha flash sepaflash C18 RP agus taispeánadh an crómatagram flash don sampla i bhFigiúr. Dá bhrí sin socraíodh an grádán tosaithe ag 10% meatánóil in uisce 90%. Mar a léirítear i bhFigiúr 4, mar gheall ar an gcéim hidreafóbach a thit na slabhraí C18 de bharr cóimheas ard uiscí, is beag a coinníodh an sampla ar an datha rialta C18 agus bhí sé á dhíscaoileadh go díreach ag an gcéim shoghluaiste. Mar thoradh air sin, ní féidir oibriú an tsampla de dhíbirt nó íonú a chomhlánú.

Figiúr 4. Crómatagram flash an tsampla ar datha rialta C18.
I gcomparáid le grádán líneach, tá na buntáistí seo a leanas ag baint le húsáid grádán céimnithe:
1. Laghdaítear úsáid tuaslagóra agus am rith le haghaidh íonú samplach.
2.Tá an táirge sprice i mbuaic ghéar, a laghdaíonn méid na gcodán bailithe agus a éascaíonn an galú rothlach seo a leanas chomh maith le ham a shábháil.
3. Tá an táirge bailithe i meatánól atá éasca le galú, agus mar sin laghdaítear an t -am triomaithe.
Mar fhocal scoir, chun an sampla a íonú atá go láidir polar nó an -hydrophilic, d’fhéadfadh sé go mbeadh réiteach tapa agus éifeachtúil ag baint le cartúis flash sepaflash C18AQ RP a chomhcheanglaíonn leis an gcóras crómatagrafaíochta ullmhúcháin.
Maidir leis an tsraith bhannaithe sepaflash C18 RP Flash cartúis
Tá sraith de chartúis flash sepaflash C18AQ RP le sonraíochtaí éagsúla ó theicneolaíocht Santai (mar a thaispeántar i dTábla 2).
Uimhir earra | Méid an cholúin | Ráta sreafa (ml/min) | Max.pressure (PSI/Bar) |
SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tábla.
Ábhair phacála: Silice sféarúil ardéifeachtúlachta (aq)-shilice, 20-45 μm, 100 Å.
logy (mar a thaispeántar i dTábla 2).

Am Post: Lúnasa-27-2018