Hongcheng Wang, Bo Xu
Ionad T&F na bhFeidhmchlár
Réamhrá
De réir polaraíochtaí coibhneasta na céime seasta agus na céime soghluaiste, is féidir crómatagrafaíocht leachta a roinnt ina chromatagrafaíocht gnáthchéim (NPC) agus crómatagrafaíocht chéim droim ar ais (RPC).Maidir le RPC, tá polaraíocht na céime soghluaiste níos láidre ná an chéim sheasta.Is é RPC an ceann is mó a úsáidtear go forleathan i modhanna deighilte crómatagrafaíochta leachtacha mar gheall ar a éifeachtacht ard, dea-réiteach agus meicníocht coinneála soiléir.Dá bhrí sin tá RPC oiriúnach chun comhdhúile polacha nó neamhpholacha éagsúla a scaradh agus a íonú, lena n-áirítear alcalóidigh, carbaihiodráití, aigéid sailleacha, stéaróidigh, aigéid núicléacha, aimínaigéid, peptídí, próitéiní, etc. I RPC, is é an chéim stáiseanóireachta is coitianta a úsáidtear an maitrís glóthach shilice atá nasctha le grúpaí feidhme éagsúla, lena n-áirítear C18, C8, C4, feinil, cianó, aimín, etc. I measc na ngrúpaí feidhme bannaithe seo, is é C18 an ceann is mó a úsáidtear go forleathan.Meastar go bhfuil níos mó ná 80% de RPC ag baint úsáide as céim bannaithe C18 anois.Mar sin tá colún crómatagrafaíochta C18 ina cholún uilíoch riachtanach do gach saotharlann.
Cé gur féidir colún C18 a úsáid i raon feidhme an-leathan, áfach, i gcás roinnt samplaí atá an-polar nó an-hydrophilic, d'fhéadfadh fadhbanna a bheith ag colúin rialta C18 nuair a úsáidtear iad chun samplaí den sórt sin a íonú.In RPC, is féidir na tuaslagóirí elution a úsáidtear go coitianta a ordú de réir a bpolúlachta: uisce < meatánól < acetonitrile < eatánól < tetrahydrofuran < isopropanol.Chun a chinntiú go bhfuil coinneáil mhaith ar an gcolún do na samplaí seo (polar láidir nó an-hydrophilic), tá gá le cion ard de chóras uiscí a úsáid mar chéim shoghluaiste.Mar sin féin, nuair a úsáidtear córas uisce íon (lena n-áirítear uisce íon nó tuaslagán salainn íon) mar an chéim soghluaiste, is gnách go seachnóidh an slabhra fada carbóin ar an gcéim stadach de cholún C18 an t-uisce agus meascán lena chéile, rud a fhágann go dtiocfaidh laghdú meandarach ar an. cumas coinneála an cholúin nó fiú gan coinneáil.Tugtar “titim céime hidreafóbach” ar an bhfeiniméan seo (mar a léirítear sa chuid clé de Fíor 1).Cé go bhfuil an cás seo inchúlaithe nuair a nitear an colún le tuaslagóirí orgánacha cosúil le meatánól nó aicéataitrile, féadfaidh sé damáiste a dhéanamh don cholún fós.Dá bhrí sin, is gá cosc a chur ar an staid seo.
Fíor 1. An léaráid scéimeach de na céimeanna nasctha ar dhromchla glóthach shilice i gcolún rialta C18 (ar chlé) agus colún C18AQ (ar dheis).
Chun aghaidh a thabhairt ar na fadhbanna thuasluaite, tá feabhsuithe teicniúla déanta ag na monaróirí ábhar pacála crómatagrafaíochta.Is é ceann de na feabhsuithe seo ná roinnt modhnuithe a dhéanamh ar dhromchla an mhaitrís shilice, mar shampla grúpaí cianó hidreafhile a thabhairt isteach (mar a thaispeántar sa chuid ceart i bhFíor 1), chun dromchla an glóthach shilice a dhéanamh níos hydrophilic.Mar sin d’fhéadfaí na slabhraí C18 ar an dromchla shilice a shíneadh go hiomlán faoi choinníollacha an-uiscí agus d’fhéadfaí titim na céime hidreafóbach a sheachaint.Tugtar colúin uiscí C18 ar na colúin C18 modhnaithe seo, eadhon colúin C18AQ, atá deartha le haghaidh coinníollacha elution an-uiscí agus is féidir leo córas uiscí 100% a fhulaingt.Cuireadh colúin C18AQ i bhfeidhm go forleathan i scaradh agus íonú comhdhúile polacha láidre, lena n-áirítear aigéid orgánacha, peptides, nucleosides agus vitimíní intuaslagtha in uisce.
Tá díshalannú ar cheann de na feidhmeanna tipiciúla a bhaineann le colúin C18AQ san íonú flash le haghaidh samplaí, a bhaineann na comhpháirteanna salainn nó maoláin sa tuaslagóir samplach chun cur i bhfeidhm an tsampla a éascú i staidéir ina dhiaidh sin.Sa phost seo, baineadh úsáid as an Brilliant Blue FCF le polaraíocht láidir mar an sampla agus íonaithe ar an gcolún C18AQ.Cuireadh tuaslagóir orgánach ó réiteach maolánach in ionad an tuaslagóir samplach, rud a d'éascaigh an galú rothlach seo a leanas chomh maith le tuaslagóirí agus am oibriúcháin a shábháil.Ina theannta sin, feabhsaíodh íonacht an tsampla trí roinnt neamhíonachtaí sa sampla a bhaint.
Rannóg Turgnamhach
Fíor 2. Struchtúr ceimiceach an tsampla.
Baineadh úsáid as an Brilliant Blue FCF mar an sampla sa phost seo.Ba é íonacht an tsampla amh ná 86% agus léiríodh struchtúr ceimiceach an tsampla i bhFíor 2. Chun an réiteach samplach a ullmhú, tuaslagadh 300 mg solad amh púdaraithe de Brilliant Blue FCF i dtuaslagán maolánach 1 M NaH2PO4 agus chroith sé go maith le bheith. réiteach go hiomlán soiléir.Ansin instealladh an tuaslagán samplach isteach sa cholún splanc ag instealladh.Tá socrú turgnamhach an íonú splanc liostaithe i dTábla 1.
| Ionstraim | Meaisín SepaBean™2 | |||
| Cartúis | 12 g cartúis flash SepaFlash C18 RP (silice sféarúil, 20 - 45 μm, 100 Å, Uimhir Ordaithe: SW-5222-012-SP) | Cartús splanc 12 g SepaFlash C18AQ RP (silice sféarúil, 20 - 45 μm, 100 Å, Uimhir Ordaithe: SW-5222-012-SP(AQ)） | ||
| Tonnfhad | 254 nm | |||
| Céim soghluaiste | Tuaslagóir A: Uisce Tuaslagóir B: meatánól | |||
| Ráta sreafa | 30 ml/nim | |||
| Luchtú samplach | 300 mg (Brilliant Blue FCF leis an íonacht 86%) | |||
| Grádán | Am (CV) | Tuaslagóir B (%) | Am (CV) | Tuaslagóir B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Torthaí agus Plé
Baineadh úsáid as cartús splanc SepaFlash C18AQ RP le haghaidh díshaillte agus íonú samplach.Baineadh úsáid as grádán céime inar úsáideadh fíoruisce mar chéim shoghluaiste ag tús an elution agus a rith ar feadh 10 n-imleabhar colún (CV).Mar a thaispeántar i bhFíor 3, nuair a úsáidtear uisce íon mar an chéim soghluaiste, coinníodh an sampla go hiomlán ar an gcartán flash.Ansin, méadaíodh an meatánól sa chéim shoghluaiste go díreach go 100% agus coinníodh an grádán le haghaidh 7.5 CV.Cuireadh an sampla ar ceal ó 11.5 go 13.5 CV.Sna codáin a bailíodh, athsholáthraíodh an tuaslagán samplach ó thuaslagán maolánach NaH2PO4 go meatánól.I gcomparáid le tuaslagán an-uiscí, bhí meatánól i bhfad níos éasca a bhaint trí ghalú rothlacha sa chéim ina dhiaidh sin, a éascaíonn an taighde seo a leanas.
Fíor 3. Crómatagram splanc an tsampla ar chartúis C18AQ.
Chun comparáid a dhéanamh idir iompar coinneála cartús C18AQ agus cartús rialta C18 le haghaidh samplaí de polaraíocht láidir, rinneadh tástáil chomparáide comhthreomhar.Baineadh úsáid as cartús flash SepaFlash C18 RP agus léiríodh an crómatagram flash don sampla i bhFíor 4. I gcás cartúis rialta C18, is é an cóimheas céim uiscí is airde atá suas le thart ar 90%.Mar sin socraíodh an grádán tosaigh ag meatánól 10% in uisce 90%.Mar a léirítear i bhFíor 4, mar gheall ar thitim na slabhraí C18 sa chéim hidreafóbach de bharr cóimheas ard uiscí, is ar éigean a coinníodh an sampla ar an gcartán rialta C18 agus bhí sé caolaithe go díreach ag an gcéim shoghluaiste.Mar thoradh air sin, ní féidir oibriú díshaillte nó íonú samplach a chríochnú.
Fíor 4. Crómatagram splanc an tsampla ar chartúis rialta C18.
I gcomparáid le grádán líneach, tá na buntáistí seo a leanas ag baint le húsáid grádán céime:
1. Laghdaítear úsáid tuaslagóirí agus am reáchtála le haghaidh íonú samplach.
2. Elutes an táirge sprioc i buaic géar, a laghdaíonn líon na codáin a bhailítear agus dá bhrí sin éascaíonn an galú rothlacha seo a leanas chomh maith le am a shábháil.
3. Tá an táirge bailithe i meatánól atá éasca le galú, agus mar sin laghdaítear an t-am a thriomú.
Mar fhocal scoir, chun an sampla atá láidir polar nó thar a bheith hidreafail a íonú, d'fhéadfadh cartúis splanc SepaFlash C18AQ RP a chomhcheangal leis an gcóras ullmhúcháin splanc-chrómatagrafaíochta SepaBean™ Machine réiteach tapa agus éifeachtach a thairiscint.
Maidir leis na cartúis flash SepaFlash Bonded Series C18 RP
Tá sraith de na cartúis flash SepaFlash C18AQ RP le sonraíochtaí éagsúla ó Santai Technology (mar a thaispeántar i dTábla 2).
| Uimhir na Míre | Méid Colún | Ráta Sreafa (mL/nóim) | Uas.Brú (psi/barra) |
| SW-5222-004- SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025- SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330- SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tábla 2. Cartúis flash SepaFlash C18AQ RP.
Ábhair phacála: Silice sféarúil ard-éifeachtúlachta C18(AQ)-nasctha, 20 - 45 μm, 100 Å.
eolaíocht (mar a thaispeántar i dTábla 2).
Am postála: Lúnasa-27-2018