Mingzu Yang, Bo Xu
Applikaasje R&D Sintrum
Ynlieding
Antibiotika binne in klasse fan sekundêre metaboliten produsearre troch mikro-organismen (ynklusyf baktearjes, fungi, actinomycetes) of ferlykbere ferbiningen dy't gemysk of semi-synthesized binne.Antibiotika kinne de groei en it oerlibjen fan oare mikroorganismen remme.It earste troch de minske ûntdutsen antibiotikum, penisilline, waard ûntdutsen troch de Britske mikrobiolooch Alexander Fleming yn 1928. Hy konstatearre dat de baktearjes yn de omkriten fan de skimmel net groeie koenen yn it mei skimmel besmette staphylococcus-kultuerskûtel.Hy postulearre dat de skimmel in antibakteriële stof útskiede moast, dy't er penisilline neamde yn 1928. De aktive yngrediïnten waarden lykwols net suvere yn dy tiid.Yn 1939 besleaten Ernst Chain en Howard Florey fan Oxford University in medisyn te ûntwikkeljen dat baktearjele ynfeksjes behannelje koe.Nei kontakt mei Fleming om stammen te krijen, hawwe se penisilline mei súkses ekstrahearre en suvere út 'e stammen.Foar har suksesfolle ûntwikkeling fan penisilline as therapeutysk medisyn, dielde Fleming, Chain en Florey de Nobelpriis foar medisinen yn 1945.
Antibiotika wurde brûkt as antibakteriële aginten om baktearjele ynfeksjes te behanneljen of te foarkommen.Der binne ferskate haadkategoryen fan antibiotika dy't brûkt wurde as antibakteriële aginten: β-lactam antibiotika (ynklusyf penicilline, cephalosporine, ensfh.), Aminoglycoside antibiotika, makrolide antibiotika, tetracycline antibiotika, chloramphenicol (totale syntetyske antibiotika), en ensfh. De boarnen fan antibiotika biologyske fermentaasje, semi-synteze en totale synteze.De antibiotika produsearre troch biologyske fermentaasje moatte struktureel wizige wurde troch gemyske metoaden fanwegen gemyske stabiliteit, giftige side-effekten, antibakteriel spektrum en oare problemen.Nei gemysk modifisearre, kinne de antibiotika ferhege stabiliteit berikke, fermindere giftige side-effekten, útwreide antibakteriële spektrum, fermindere medisynferset, ferbettere biobeskikberens, en dêrmei ferbettere effekt fan medisynbehanneling.Dêrom binne semi-syntetyske antibiotika op it stuit de populêrste rjochting yn 'e ûntwikkeling fan antibiotika.
Yn 'e ûntwikkeling fan semi-syntetyske antibiotika hawwe antibiotika de eigenskippen fan lege suverens, in protte byprodukten en komplekse komponinten, om't se ôflaat binne fan mikrobiële fermentaasjeprodukten.Yn dit gefal is de analyze en kontrôle fan ûnreinheden yn semi-syntetyske antibiotika benammen wichtich.Om effektyf te identifisearjen en karakterisearjen ûnreinheden, is it needsaaklik om in foldwaande hoemannichte ûnreinheden te krijen út it syntetyske produkt fan semi-syntetyske antibiotika.Under de meast brûkte ûnreinens tarieding techniken, flash chromatography is in kosten-effektive metoade mei foardielen lykas grutte sample lading bedrach, lege kosten, tiid besparje, ensfh Flash chromatography is mear en mear brûkt troch syntetyske ûndersikers.
Yn dizze post waard de wichtichste ûnreinheid fan in semi-syntetyske aminoglycoside-antibiotika brûkt as it stekproef en suvere troch in SepaFlash C18AQ-cartridge kombineare mei it flashchromatografysysteem SepaBean ™ masine.It doelprodukt dat oan 'e easken foldocht, waard mei súkses krigen, wat suggerearret in heul effisjinte oplossing foar de suvering fan dizze ferbiningen.
Eksperimintele seksje
De stekproef waard freonlik levere troch in pleatslik farmaseutysk bedriuw.De stekproef wie in soarte fan amino polycyclic koalhydraten en syn molekulêre struktuer wie fergelykber mei aminoglycoside antibiotika.De polariteit fan it stekproef wie frij heech, wêrtroch it tige oplosber is yn wetter.It skematyske diagram fan 'e molekulêre struktuer fan' e stekproef waard werjûn yn figuer 1. De suverens fan 'e rau stekproef wie sawat 88% as analysearre troch HPLC.Foar de suvering fan dizze ferbiningen mei hege polariteit soe it stekproef amper wurde bewarre op 'e reguliere C18-kolommen neffens ús eardere ûnderfiningen.Dêrom waard in C18AQ-kolom brûkt foar de suvering fan it monster.
figuer 1. It skematyske diagram fan de stekproef syn molekulêre struktuer.
Om de sample-oplossing te meitsjen, waard 50 mg rûge sample oplost yn 5 mL suver wetter en dan ultrasonicearre om it in folslein dúdlike oplossing te meitsjen.De probleemoplossing waard dêrnei yn 'e flitskolom ynjeksje troch in ynjeksje.De eksperimintele opset fan 'e flitsreiniging waard neamd yn' e tabel 1.
| Ynstrumint | SepaBean™ masine 2 | |
| Cartridges | 12 g SepaFlash C18AQ RP flash cartridge (sferysk silika, 20 - 45μm, 100 Å, bestelnûmer: SW-5222-012-SP(AQ)) | |
| Golflingte | 204 nm, 220 nm | |
| Mobile faze | Oplosmiddel A: wetter Oplosmiddel B: Acetonitrile | |
| Flow rate | 15 ml/min | |
| Sample laden | 50 mg | |
| Gradient | Tiid (min) | Oplosmiddel B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47,0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Resultaten en diskusje
It flashchromatogram fan 'e stekproef op' e C18AQ-cartridge waard werjûn yn figuer 2. Lykas werjûn yn figuer 2, waard it tige polêre probleem effektyf bewarre op 'e C18AQ-cartridge.Nei lyofolisaasje foar de sammele fraksjes hie it doelprodukt in suverens fan 96.2% (lykas werjûn yn figuer 3) troch HPLC-analyse.De resultaten jouwe oan dat it suvere produkt fierder koe wurde brûkt yn 'e folgjende stap ûndersyk en ûntwikkeling.
figuer 2. De flash chromatogram fan de stekproef op in C18AQ cartridge.
figuer 3. It HPLC-chromatogram fan it doelprodukt.
Ta beslút, SepaFlash C18AQ RP flash cartridge kombinearre mei it flash chromatography systeem SepaBean ™ masine koe biede in flugge en effektive oplossing foar de suvering fan tige polar samples.
Oer de SepaFlash C18AQ RP flash cartridges
Der binne in rige fan de SepaFlash C18AQ RP flash cartridges mei ferskillende spesifikaasjes fan Santai Technology (lykas werjûn yn Tabel 2).
| Item nûmer | Kolom Grutte | Flow Rate (ml/min) | Max. Druk (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
tabel 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges.Ferpakkingsmateriaal: Hege effisjinsje sfearysk C18(AQ)-bûn silika, 20 - 45 μm, 100 Å.
Foar fierdere ynformaasje oer detaillearre spesifikaasjes fan SepaBean ™ masine, of de oarder ynformaasje oer SepaFlash rige flash cartridges, besykje ús webside.
Post tiid: okt-26-2018