Rui Huang, Bo Xu
Applikaasje R & D-sintrum
Ynlieding
ION Exchange Chromatography (IEC) is in chromatografyske metoade brûkt om de ferbiningen te skieden en te suverjen dy't wurde presinteare yn ionyske foarm yn 'e oplossing. Neffens de ferskate lading fan útwikselbere útwikselbere ionen kinne IEC ferdield wurde yn twa soarten, kattenwikseling chromatografy en Anion Exchange chromatografy. Yn Cation Exchange Chromatografy binne soere, bûnen oan it oerflak fan 'e skiedingmedia. Bygelyks Sulfonic Acid (-So3h) is in gewoan brûkte groep yn sterke kattenwiksel (SCX), dy't H + ûntwurpen en de negatyf laden groep -o3- kinne oare tekene advertinsjes yn 'e oplossing. Yn Anion Exchange Chromatografy binne Alkaline groepen bûn oan it oerflak fan 'e skiedingsmedia. Bygelyks, Quaternary Amine (-NR3OH, Where R-dydrocarbon Group) wurdt normaal brûkt yn sterke Anion-útwikseling, dy't dissosjeare + R3 kinne oare anions yn 'e oplossing, wat resultearje, resultearret yn' e oplossing.
Under natuerlike produkten hawwe flavonoïden de oandacht fan ûndersikers oanlutsen fanwegen har rol yn 'e previnsje en behanneling fan kardiovaskulêre sykten. Sûnt de flavendemoles binne soere fanwege de oanwêzigens fan 'e oanwêzigens fan fenolexylgroepen, is ION-útwikselings chromatografy in alternative opsje as omkearde faze- of rasing en suvering fan dizze soere ferbiningen. Yn Flash Chromatography, de mienskiplike brûkte skieding Media foar ION-útwikseling is Silica gelmatrix wêr't Ion Exchangegroepen binne bondele oan syn oerflak. De meast brûkte ion-útwikselingsmodi yn Flash Chromatografy binne SCX (meast sulfonyske soere groep) en SAX (meast quaternary amine-groep). Yn 'e earder publisearre oanfraach "De tapassing fan' e titel" De tapassing fan Sepaflash Stuver-kolommen wikselje yn 'e reiniging fan Alkalyske ferbiningen, waarden SCX-kolommen ynset foar de suvering fan Alkaline-ferbiningen. Yn dizze post waard in miks fan neutrale en soere noarmen brûkt as de stekproef om de tapassing fan SAX-kolommen te ferkennen yn 'e suvering fan soere ferbiningen.
Eksperimintele seksje
Figuer 1. It skematysk diagram fan 'e stasjonêre faze bondele oan it oerflak fan SAx Speed-skieding Media.
Yn dizze post, in SAX-kolom Pre-ynpakt mei Quaternary Amine Bonded Silica brûkt (lykas werjûn yn figuer 1). In miks fan chromone en 2,4-dihydroxybenzoïsoer waard brûkt as de stekproef om suvere te wurden (lykas werjûn yn figuer 2). It mingsel waard oplost yn methanol en laden op 'e flashcartridge troch in ynjeksje. De eksperimintele opset fan 'e Flash-suvering wurdt yn' e tabel 1 neamd.
Figuer 2. De gemyske struktuer fan 'e twa komponinten yn it samplemengsel.
| Ynstrumint | Sepabean ™ Machine T | |||||
| Patroanges | 4 G Sepaflash Standert Series Flash Catridge (Unregelmjittige Silica, 40 - 63 μ, 60 Å, bestelnûmer: S-5101-0004) | 4 G Sepaflash Bonded Series Sax Flash Cartridge (Unregelmjittige Silica, 40 - 63 μ, 60 Å, bestelnûmer: SW-5001-004-IR) | ||||
| Golflingl | 254 NM (Deteksje), 280 NM (Monitoring) | |||||
| MOBILE FASE | Solvent A: N-Hexane | |||||
| SOLVERVENT B: Ebethyl acetaat | ||||||
| Flow Rate | 30 ml / min | 20 ml / min | ||||
| SAMPLE LOADING | 20 mg (in miks fan komponint A en komponint B) | |||||
| Gradient | Tiid (cv) | Solvent B (%) | Tiid (cv) | Solvent B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3,7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Resultaten en diskusje
Earst waard it stekproefmiksel skieden troch in normale faze-flashcatroon-pre-ynpakt mei reguliere silika. As show yn figuer 3 waarden de twa komponinten yn 'e stekproef yn' e patroon nei de oare elutearre. Folgjende waard in SAX Flash Catridge brûkt foar de suvering fan 'e stekproef. As sjen litte yn figuer 4, waard de acidyske komponint B folslein behâlden op 'e SAs-cartridge. De neutrale komponint A waard stadichoan elmed út 'e cartridge mei de ellossing fan' e mobile faze.
Figuer 3. It flash chromaNogram fan 'e stekproef op in reguliere normale fazepartridge.
Figuer 4. It flash chromaNogram fan 'e stekproef op in SAX Cartridge.
Fergeliking figuer 3 en figuer 4, it komponint hat in inkonsistinte peak-foarm op 'e twa ferskillende flashcartridges. Om te befêstigjen oft it ferkiezingspiel oerienkomt mei it komponint, kinne wy de folsleine golflengte-scanning-funksje brûke dy't is boud yn 'e kontrôle software fan SOPABEAN ™ -masjine. Iepenje de eksperimintele gegevens fan 'e twa skieding, slepe nei yndikatorline (CV) yn it haadpul en it folsleine heidensput fan' e ûnderwinning fan dizze twa punten wurde werjûn ûnder it chromatogram (lykas werjûn yn ôfbylding 5 en figuer 6). Fergeliking fan de folsleine golflingte SPECTRUM fan dizze twa skieding, it komponint dat A hat dat A-konsistint absorptionspektrum hat yn twa eksperiminten. Om 'e reden fan' e komponint hat A inkonsistinte peak-foarm op twa ferskillende flashpartridgen, wurdt spekulearre dat d'r spesifike ûnpresje is yn it komponent dy't ferskate behâld hat op 'e normale faze-cartridge en de SAx Cartridge. Dêrom is de elutearjende sekwinsje oars foar it komponent A en de ûnmooglik op dizze twa flashcartridges, resultearjende inkonsistente peak-foarm op 'e chromatogrammen.
Figuer 5. It folsleine golflingte spektrum fan 'e komponint A en de ûnhandigens skieden troch normale fase cartridge.
Figuer 6. It folsleine golflingte spektrum fan 'e komponint A en de ûnhandel skieden troch SAX Cartridge.
As it doelprodukt wurdt sammele is, is de neutrale komponint dat A, de suvere taak maklik kin wurde foltôge troch de SAx Cartridge foar SAX-Cartridge foar Saklidge nei SAMS te stjoeren. Oan 'e oare kant, as it doelprodukt wurdt sammele, kin de acidyske komponint wêze, koe de ienige oanpassing oan' e SA-oanpak yn 'e SA-oanpak fan' e Mobile-organiseare wurde, wikselje de mobile faze nei Modanol-oplossing mei 5% Azuur. De acetaat-ioanen yn 'e mobile faze konkurrearje mei de komponint B foar it binde fan' e quaternary Amine-Ion-groepen op 'e stasjonêre faze fan SAx dy't de komponint B binne fan' e cartridge om it doelprodukt te krijen. It chromatogram fan it stekproef dat skieden yn ION Exchange-modus waard toand yn figuer 7.
Figuer 7. It flash chromaNogram fan 'e komponinte Bleune yn ION Exchange-modus op in SAX Cartridge.
Ta beslút, kin soere as neutrale sample rap wurde suvere troch SAx Cartridge kombineare mei normale faze-cartridge mei ferskate suverstrategyen. Fierder, mei de help fan folsleine golflingte scanning boud yn 'e kontrôle software fan Sepabean-spektrum fan' e eluteare absjoneart, dy't de komposysje en suvere fan 'e eluteare fraksjes hawwe bepaald en ferbetterje sa ferbetterje.
| Item nûmer | Kolomgrutte | Flow Rate (ml / min) | Max.pressure (PSI / Bar) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/201.5 |
| SW-5001-012-ir | 23 G | 15-30 | 400/201.5 |
| SW-5001-025-ir | 38 g | 15-30 | 400/201.5 |
| SW-5001-040-iR | 55 g | 20-40 | 400/201.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/36.0 |
| SW-5001-120-Ir | 180 g | 40-80 | 300/2.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/2.7 |
| SW-5001-330-ir | 475 g | 50-100 | 250 / 17.2
|
Tabel 2. Seplash bondele searje SAx flashcartridges. Ynpakken: Ultra-pure unregelmjittige Saks-bonded Silica, 40 - 63 inger, 60 å.
Foar fierdere ynformaasje oer detaillearre spesifikaasjes fan Sepabean ™Masine, as de bestellingsynformaasje oer Seprafash-searje Flashcartridges Besykje asjebleaft ús webside.
Posttiid: NOV-09-2018