Rui Huang, Bo Xu
Applikaasje R&D Sintrum
Ynlieding
Ionenútwikselingschromatografy (IEC) is in chromatografyske metoade dy't faaks brûkt wurdt om de ferbiningen te skieden en te suverjen dy't yn ionyske foarm yn oplossing wurde presintearre.Neffens de ferskate ladingsstaten fan útwikselbere ioanen, kin IEC wurde ferdield yn twa soarten, kation-útwikselingchromatografy en anion-útwikselingchromatografy.Yn kation-útwikselingchromatografy wurde soere groepen bûn oan it oerflak fan 'e skiedingsmedia.Bygelyks, sulfonic acid (-SO3H) is in gewoan brûkte groep yn sterke kation útwikseling (SCX), dy't dissociates H+ en de negatyf laden groep -SO3- kin sadwaande oare kationen adsorbearje yn 'e oplossing.Yn anion-útwikselingchromatografy wurde alkaline groepen bûn oan it oerflak fan 'e skiedingsmedia.Bygelyks, quaternary amine (-NR3OH, dêr't R is koolwaterstof groep) wurdt meastal brûkt yn sterke anion útwikseling (SAX), dy't dissociates OH- en de posityf laden groep -N + R3 kin adsorbearje oare anionen yn 'e oplossing, resultearret yn anion útwikselingseffekt.
Under natuerlike produkten hawwe flavonoïden de oandacht fan ûndersikers lutsen fanwegen har rol yn 'e previnsje en behanneling fan kardiovaskulêre sykten.Sûnt de flavonoïde molekulen soer binne troch de oanwêzigens fan fenolyske hydroxylgroepen, is ionútwikselingchromatografy in alternative opsje neist konvinsjonele normale faze of omkearde faze chromatografy foar de skieding en suvering fan dizze soere ferbiningen.Yn flashchromatografy is de meast brûkte skiedingsmedia foar ion-útwikseling silikagelmatrix wêrby't ion-útwikselingsgroepen oan har oerflak binne bûn.De meast brûkte ion-útwikselingsmodi yn flashchromatografy binne SCX (meastentiids sulfonic acid groep) en SAX (meastentiids quaternary amine groep).Yn 'e earder publisearre applikaasjenotysje mei de titel "De tapassing fan SepaFlash Strong Cation Exchange Chromatography Columns yn' e suvering fan alkaline ferbiningen" troch Santai Technologies, waarden SCX-kolommen brûkt foar de suvering fan alkaline ferbiningen.Yn dizze post waard in mingsel fan neutrale en soere noarmen brûkt as it stekproef om de tapassing fan SAX-kolommen te ferkennen yn 'e suvering fan soere ferbiningen.
Eksperimintele seksje
figuer 1. It skematyske diagram fan de stasjonêre faze bûn oan it oerflak fan SAX skieding media.
Yn dit berjocht waard in SAX-kolom foarôf ynpakt mei quaternary amine bûn silika brûkt (lykas werjûn yn figuer 1).In mingsel fan Chromone en 2,4-dihydroxybenzoic acid waard brûkt as it te suverjen monster (lykas werjûn yn figuer 2).It mingsel waard oplost yn methanol en laden op 'e flash cartridge troch in ynjeksje.De eksperimintele opset fan 'e flitsreiniging wurdt neamd yn' e tabel 1.
figuer 2. De gemyske struktuer fan de twa komponinten yn de stekproef mingsel.
| Ynstrumint | SepaBean™ masine T | |||||
| Cartridges | 4 g SepaFlash Standard Series flash cartridge (ûnregelmjittich silika, 40 - 63 μm, 60 Å, Bestelnûmer: S-5101-0004) | 4 g SepaFlash Bonded Series SAX flash cartridge (ûnregelmjittich silika, 40 - 63 μm, 60 Å, bestelnûmer: SW-5001-004-IR) | ||||
| Golflingte | 254 nm (deteksje), 280 nm (monitoring) | |||||
| Mobile faze | Oplosmiddel A: N-hexaan | |||||
| Oplosmiddel B: Ethyl acetate | ||||||
| Flow rate | 30 ml/min | 20 ml/min | ||||
| Sample laden | 20 mg (in mingsel fan komponint A en komponint B) | |||||
| Gradient | Tiid (CV) | Oplosmiddel B (%) | Tiid (CV) | Oplosmiddel B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Resultaten en diskusje
As earste waard it monstergemik skieden troch in normale faze flash-cartridge foarôf ynpakt mei gewoane silika.Lykas sjen litten yn figuer 3, de twa komponinten yn 'e stekproef waarden eluted út de cartridge ien nei de oare.Dêrnei waard in SAX flash cartridge brûkt foar de suvering fan it stekproef.Lykas werjûn yn figuer 4, waard de soere komponint B folslein bewarre op 'e SAX-cartridge.De neutrale komponint A waard stadichoan út 'e cartridge eluearre mei de eluaasje fan' e mobile faze.
figuer 3. De flash chromatogram fan de stekproef op in reguliere normale faze cartridge.
figuer 4. De flash chromatogram fan de stekproef op in SAX cartridge.
Fergelykjen fan figuer 3 en figuer 4, de komponint A hat inkonsistente pykfoarm op 'e twa ferskillende flash-cartridges.Om te befestigjen oft de elueringspiek oerienkomt mei de komponint, kinne wy de scanfunksje foar folsleine golflingte brûke dy't is ynboud yn 'e kontrôlesoftware fan SepaBean ™ masine.Iepenje de eksperimintele gegevens fan 'e twa skiedingen, sleep nei de yndikatorline op' e tiidas (CV) yn 'e chromatogram nei it heechste punt en it op ien nei heechste punt fan' e elueringspiek dy't oerienkomt mei de komponint A, en it folsleine golflingtespektrum fan dizze twa punten wurde automatysk werjûn ûnder it chromatogram (lykas werjûn yn figuer 5 en figuer 6).Fergelykjen fan de folsleine golflingtespektrumgegevens fan dizze twa skiedingen, hat de Component A konsekwint absorptionsspektrum yn twa eksperiminten.Foar de reden fan 'e Component A hat inkonsistente pykfoarm op twa ferskillende flash-cartridges, wurdt spekulearre dat d'r spesifike ûnreinheid is yn' e Component A dy't ferskate retensjes hat op 'e normale faze-cartridge en de SAX-cartridge.Dêrom, de eluting folchoarder is oars foar de komponint A en de ûnreinheid op dizze twa flash cartridges, resultearret ynkonsekwint pyk foarm op 'e chromatograms.
figuer 5. De folsleine golflingte spektrum fan de Component A en de ûnreinheid skieden troch normale faze cartridge.
figuer 6. De folsleine golflingte spektrum fan de komponint A en de ûnreinheid skieden troch SAX cartridge.
As it te sammeljen doelprodukt de neutrale komponint A is, kin de reinigingstaak maklik wurde foltôge troch direkt de SAX-cartridge te brûken foar eluaasje nei it laden fan samples.Oan 'e oare kant, as it te sammeljen doelprodukt de soere komponint B is, koe de manier fan capture-release wurde oannommen mei mar in lichte oanpassing yn' e eksperimintele stappen: as de stekproef waard laden op 'e SAX-cartridge en de neutrale komponint A waard folslein eluted út mei normale faze organyske solvents, skeakelje de mobile faze nei methanol oplossing befettet 5% acetic acid.De acetate-ionen yn 'e mobile faze sille konkurrearje mei de Component B foar bining oan' e quaternary amine-ion-groepen op 'e stasjonêre faze fan SAX-cartridge, wêrtroch't de Component B út' e cartridge eluearret om it doelprodukt te krijen.It chromatogram fan it stekproef skieden yn ion-útwikselingsmodus waard werjûn yn figuer 7.
figuer 7. De flash chromatogram fan de Component B eluted yn ion útwikseling modus op in SAX cartridge.
Ta beslút, soere as neutraal monster koe rap wurde suvere troch SAX cartridge kombinearre mei normale faze cartridge brûkend ferskate suvering strategyen.Fierder, mei help fan folsleine golflingte skennen funksje boud yn de kontrôle software fan SepaBean ™ masine, koe it karakteristike absorption spektrum fan de eluted fraksjes maklik wurde fergelike en befêstige, helpt ûndersikers fluch bepale de gearstalling en suverens fan de eluted fraksjes en sa ferbetterjen wurk effisjinsje.
| Item nûmer | Kolom Grutte | Flow Rate (ml/min) | Max. Druk (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24,0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
tabel 2. SepaFlash Bonded Series SAX flash cartridges.Ferpakkingsmateriaal: Ultra-suver ûnregelmjittich SAX-bûn silika, 40 - 63 μm, 60 Å.
Foar fierdere ynformaasje oer detaillearre spesifikaasjes fan SepaBean ™masine, as de bestelynformaasje oer SepaFlash-serie flash-cartridges, besykje asjebleaft ús webside.
Post tiid: Nov-09-2018