Rui Huang, Bo Xu
Applikaasje R & D-sintrum
Ynlieding
In peptide is in ferbining gearstald út aminosoeren, elk dat jo unike fysike en gemyske eigenskippen hat fanwege de ferskillende soarten en oarder fan amino acidresidues dy't har sekwinsje foarmje. Mei de ûntwikkeling fan solide faze gemyske gemyske synthese, de gemyske synthese fan ferskate aktive peptiden hawwe geweldige foarútgong makke. Fanwegen de yngewikkelde gearhing fan 'e peptide krigen troch solide fase synthese, moat it definitive produkt wurde suvere troch betroubere skiedingmetoaden. De mienskiplike brûkte suveringmetoaden foar peptiden omfetsje ion útwikseling chromatografy (rp-hplc), dy't de rap fan lege sampedrapparaat hawwe (MW <1 KDA), in suksesfolle applikaasje is earder publisearre troch Santai-technologyen, wêryn in Sepaflash RP C18-cartridge waard brûkt foar de rappe suvering fan Thymopentin (TP-5) en it doelproduktgearkomt de easken dat de easken wurde krigen.
Figuer 1. 20 mienskiplike aminosoeren (reprodusearre fan www.bachem.com).
D'r binne 20 soarten aminosoeren dy't mienskiplik binne yn 'e gearhing fan peptiden. Dizze aminosoeren kinne wurde ferdield yn 'e folgjende groepen neffens har polariteit en acarity-eigendom: net-polêr (hydrophobysk), polêr (uncharged), soere as basis (lykas werjûn yn figuer 1). Yn in peptideekwinsje, as de aminosoeren dy't de sekwinsje foarmt, binne meast polaren (lykas markearre yn roze kleur 1), as byterine, Serine, ensfh. Dan kin dizze reptide in sterke polible hawwe yn wetter. Tidens de Preinproseduere foar dizze sterke Polar Peptide-samples troch omkeare-faze-chromatografy, sil in fenomeen-kollega's foarkomme troch Santai Pubhologies, AQ omkeard faze chromatografy kolommen en har applikaasjes). Yn ferliking mei de reguliere C18-kolommen binne de ferbettere C18Q-kolommen it meast geskikt foar de suvering fan sterke polêr as hydrophilyske samples. Yn dizze post waard in sterke Polar reptide brûkt as it stekproef en suvere troch in c18aq-kolom. As resultaat wie it doelprodukt dat de easken wurdt moete de easken krigen en koe wurde brûkt yn 'e folgjende ûndersyk en ûntwikkeling.
| Ynstrumint | Sepabean™Machine 2 | |||
| Patroanges | 12 G Sepaflash C18 RP Flash Cartridge (Sherical Silica, 20 - 45 μ, 100 å, Bestel Nunber: SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18aq RP Flash Cartridge (Sferyske Silica, 20 - 45 μ, 100,, Oardernûmer: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Golflingl | 254 NM, 220 NM | 214 nm | ||
| MOBILE FASE | Solvent A: Wetter SOLVERVEN B: AcetonitRile | |||
| Flow Rate | 15 ml / min | 20 ml / min | ||
| SAMPLE LOADING | 30 mg | |||
| Gradient | Tiid (cv) | Solvent B (%) | Tiid (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Resultaten en diskusje
Om de PRANSIFION-prestaasjes te fergelykje foar it iispearder foar it iispijmproef tusken reguliere C18-kolom en C18Q-kolom brûkt, brûkte wy in reguliere C18-kolom foar de flits-suvere fan it stekproef as begjin. Lykas werjûn yn figuer 2, fanwegen de hydrophobyske faze-ynstoarting fan 'e C5-kettingen feroarsake troch hege wetterlike ferhâlding, waard it stekproef amper behâlden op' e reguliere C18-cartridge en waard direkt útsteld troch de mobile faze. As resultaat wie it stekproef net effektyf skieden en suvere.
Figuer 2. It flash chromaNogram fan 'e stekproef op in reguliere C18-cartridge.
Folgjende brûkten wy in C18AQ-kolom foar de Flash-suvering fan it stekproef. Lykas werjûn yn figuer 3 waard de peptide effektyf op 'e kolom behâlden en dan útskeakele. It doelprodukt waard skieden fan 'e ûnreinheden yn' e rau stekproef en sammele. Nei lyofilisaasje en dan analysearre troch HPLC, hat it suvere produkt in suverens fan 98,2% en koe fierder wurde brûkt foar folgjende stapûndersyk.
Figuer 3. It flash chromaNogram fan 'e stekproef op in C18Aq Cartridge.
Yn konklúzje, sepaflash c18aq rp flash cartridge kombineare mei it flash chromatografysteem sepabean™Masine koe in rappe en effektive oplossing oanbiede foar de suvering fan sterke polêre as hydrophilyske samples.
D'r binne in searje fan 'e Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges mei ferskate spesifikaasjes út Santai Technology (lykas werjûn yn Tabel 2).
| Item nûmer | Kolomgrutte | Flow Rate (ml / min) | Max.pressure (PSI / Bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/201.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/201.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/201.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/201.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/36.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/2.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/2.7 |
| SW-5222-330-sp (aq) | 420 g | 40-80 | 250 / 17.2 |
Tabel 2. Sepaflash c18aq rp flashcartridges. Ynpakken: Hege-effisjinsje sferyske C18 (AQ) -Bonded Silica, 20 - 45 μm, 100 å.
Foar fierdere ynformaasje oer detaillearre spesifikaasjes fan Sepabean ™ -masjine, as de bestellingynformaasje op Sepraflash-searje Flashcartridges Besykje asjebleaft ús webside.
Posttiid: okt-12-2018