Hongcheng Wang, Bo Xu
Applikaasje R & D-sintrum
Ynlieding
Neffens de relative politêre fan stasjonêre faze en mobile faze kin floeibere chromatografy ferdield wurde yn normale faze chromatografy (NPC) en omkeard faze chromatografy (RPC). Foar RPC is de polariteit fan 'e mobile faze sterker dan dat fan' e stasjonêre faze. RPC is de meast wurden brûkt ien yn floeibere chromatografy skieding fan chromatografy fanwege syn hege effisjinsje, goede resolúsje en dúdlike redmeganisme. Dêrom is RPC geskikt foar de skieding en suvering fan ferskate polêre ferbiningen, ynklusyf alkoalen, snoeren, pakt, ensfh. Yn RPC, ynklusyf is bondele mei ferskate funksjonele groepen, ynklusyf c18, C4, Phenyl, Cyano, Amino, ensfh. Under dizze bondele funksjonele groepen, brûkte de meast brûkt ien. It wurdt rûsd dat mear dan 80% fan RPC no brûke C5 Bonded Fase. Dêrom is C18 chromatografy-kolom in must-ha-universele kolom wurden foar elk laboratoarium.
Hoewol C18-kolom kin wurde brûkt yn in heul breed oanbod fan applikaasjes, lykwols, wat heul polêr as heul hydrophyl is, kinne reguliere C18-kolommen problemen hawwe as se brûkt wurde om sokke samples te reinigjen. Yn RPC kinne de gewoane brûkte ferwidere Solvents besteld wurde neffens har polariteit: wetter <methanitrile <Ethanol <Tetrahrofuran <isopropanol. Om goede retinsje te garandearjen op 'e kolom foar dizze samples (sterke polêr as heul hydrophilysk), heech diel fan waterde systeem nedich is om te brûken as de mobile faze. As jo lykwols pure wettersysteem brûke (ynklusyf pure wetter- of pure sâlt-oplossing) as de mobile faze op 'e stasjonable-faze, nimt dan mei elkoar oan, resultearre yn in direkte fermindering fan' e befeiliging fan 'e kolom of sels gjin behâld. Dit ferskynsel hjit "hydrophobyske faze-ynstoarting" (lykas werjûn yn it linker diel fan figuer 1). Hoewol dizze situaasje omkeard is as de kolom wurdt wosken mei organyske solventen lykas methanol of acetonitrile, kin it noch skea feroarsaakje oan 'e kolom. Dêrom is it nedich om te foarkommen dat dizze situaasje bart.
Figuer 1. It skematysk diagram fan 'e bondele fazen op it oerflak fan Silica gel yn reguliere C18-kolom (links) en C18AQ-kolom (rjochts).
Om de boppesteande problemen oan te pakken, hawwe de MATHCOME PACEMATIERS MATERIALS TECHEGANSE FERGESEFORMEMENTEN. Ien fan dizze ferbetteringen makket wat oanpassingen op it oerflak fan 'e Silica Matrix, lykas de yntroduksje fan hydrophilyske Syboyske groepen (lykas werjûn yn it rjochter diel fan' e Silica gel mear hydrophilic. Sa koe de C5-keatlingen op it Silica-oerflak folslein ferlingd wurde ûnder heechwearde omstannichheden en de hydrophobyske faze-ynstoarting koe wurde foarkommen. Dizze wizige C18-kolommen wurde Aquéous C6-kolommen neamd, nammentlik C18Q-kolommen, dy't binne ûntworpen foar heul waterige elution-elollegaasje fan 100% Aqueous System tolerearje. C18AQ-kolommen binne breed tapast yn 'e skieding en suvering fan sterke polêre ferbiningen, ynklusyf organyske soeren, passe, nukleosides en wetteroplosbere vitaminen.
Desalting is ien fan 'e typyske applikaasjes fan C18Q-kolommen yn' e flits-suvering foar samples, wêrtroch de sâlt- of bufferkomponinten ferwideret yn it stekproef fan 'e stekproef fan it stekproef yn' e folgjende stúdzjes. Yn dizze post waard de briljante blauwe FCFER mei sterke polariteit brûkt as de stekproef en suvere op 'e c18aq-kolom. It stekproef Solvent waard ferfongen troch Organic Solvent fan Buffer-oplossing, dus fasilitearje, dus fasilitearje de folgjende draaiende ferdamping, lykas besparjende oplosmiddel en operearjende tiid besparje. Fierder waard de suverens fan 'e stekproef ferbettere troch guon ûnreinheden yn it stekproef te ferwiderjen.
Eksperimintele seksje
Figuer 2. De gemyske struktuer fan 'e stekproef.
De briljant Blue FCF waard brûkt as de stekproef yn dizze post. De suverens fan it rau-stekproef wie 86% en de gemyske struktuer fan 'e stekproef waard toand yn' e sample-oplossing, 300 Mg Poederige rauwe fan Briljante Blue BlueS yn 1 M Nah2Po4 Buffer-oplossing en skodde in folslein heldere oplossing te wurden. De stekproef-oplossing waard doe ynjitten yn 'e Flash-kolom troch in ynjeksje. De eksperimintele opset fan 'e Flash-suvering wurdt yn' e tabel 1 neamd.
| Ynstrumint | Sepabean ™ -masjine2 | |||
| Patroanges | 12 G Sepaflash C18 RP Flash Cartridge (Sferyske Silica, 20 - 45 μm, 100 å, bestelnûmer: SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18aq RP Flash Cartridge (Sferyske Silica, 20 - 45 μ, 100,, Å, bestelnûmer: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Golflingl | 254 nm | |||
| MOBILE FASE | Solvent A: Wetter Solvent B: methanol | |||
| Flow Rate | 30 ml / min | |||
| SAMPLE LOADING | 300 mg (briljante blue FCF mei de suverens fan 86%) | |||
| Gradient | Tiid (cv) | Solvent B (%) | Tiid (cv) | Solvent B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Resultaten en diskusje
In Sepaflash C18Q RP Flash Cartridge waard brûkt foar stekproef winske en suvering. Stapgradient waard brûkt wêryn pure wetter waard brûkt as de mobile faze by it begjin fan eljochting en run foar 10 kolom volumes (CV). Lykas werjûn yn figuer 3, as jo pure wetter brûke as de mobile faze, waard de stekproef folslein behâlden op 'e Flashcartridge. Folgjende, de methanol yn 'e mobile faze waard direkt ferhege nei 100% en de helling waard behâlden foar 7,5 CV. De stekproef waard útskeakele fan 11,5 oant 13,5 CV. Yn 'e sammele fraksjes waard de stekproef-oplossing ferfongen troch Nah2Po4 Buffer-oplossing foar methanol. Fergeliking mei heul waterige oplossing, metanol wie folle makliker te ferwiderjen troch rotêre ferdamping yn 'e folgjende stap, dy't it folgjende ûndersyk fasiliteart.
Figuer 3. It flash chromaNogram fan 'e stekproef op in C18Aq Cartridge.
Om it behâld fan gedrach fan C18AQ-cartridge en reguliere C18-cartridge te fergelykje foar samples fan sterke polariteit, is parallelle fergelikingstest útfierd. In Sepaflash C18 RP Flash Cartridge waard brûkt en it Flash ChromaNogram waard yn 'e figuer ynskeakele yn figuer 4. Foar reguliere C18-karrideare, de heechste tolereare kweade faze-ferhâlding sawat 90%. Dêrom waard de startgradient op 10% methanol ynsteld yn 90% wetter. Lykas werjûn yn figuer 4, fanwege de hydrophobyske faze-ynstoarting fan 'e Croepen feroarsake troch hege wetterlike ferhâlding, waard it stekproef amper behâlden op' e reguliere C18-cartridge en waard direkt útsteld troch de mobile faze. As resultaat is de wurking fan sample Desalting of suvering net foltôge.
Figuer 4. It flash chromogram fan it stekproef op in gewoane c18 cartridge.
Fergelykje mei lineêre gradient, it gebrûk fan stap gradient hat de folgjende foardielen:
1. Solvent-gebrûk en rintiid foar sample-suvering wurdt fermindere.
2. It doelprodukt yn in skerpe peak, dy't it folume fan sammele fraksjes ferminderet en dus de folgjende draaiende ferdamping is as besparrings.
3 It sammele produkt is yn methanol dy't maklik is te wifeljen, dus droech tiid wurdt fermindere.
Ta beslút, foar de suvering fan 'e stekproef dat sterk as heul hydrophil is, is Sepaflash C18-snelle RK Flash Catriding Combining mei it Parting Chromatografy System Sepabean ™ koe in rappe en effisjinte oplossing oanbiede.
Oer de Sepaflash Bonded Series C18 RP Flashcartridges
D'r binne in searje fan 'e Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges mei ferskate spesifikaasjes út Santai Technology (lykas werjûn yn Tabel 2).
| Item nûmer | Kolomgrutte | Flow Rate (ml / min) | Max.pressure (PSI / Bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/201.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/201.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/201.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/201.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/36.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/2.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/2.7 |
| SW-5222-330-sp (aq) | 420 g | 40-80 | 250 / 17.2 |
Tabel 2. Sepaflash c18aq rp flashcartridges.
Ynpakken: Hege-effisjinsje sferyske C18 (AQ) -Bonded Silica, 20 - 45 μm, 100 å.
logy (lykas werjûn yn Tabel 2).
Posttiid: aug-27-2018