L'application des colonnes de chromatographie par échange d'anions forts SepaFlash dans la purification de composés acides

Résultats et discussion

Tout d’abord, le mélange d’échantillons a été séparé par une cartouche flash en phase normale pré-remplie de silice ordinaire.Comme le montre la figure 3, les deux composants de l'échantillon ont été élués de la cartouche l'un après l'autre.Ensuite, une cartouche flash SAX a été utilisée pour la purification de l’échantillon.Comme le montre la figure 4, le composant acide B a été complètement retenu sur la cartouche SAX.Le composant neutre A a été progressivement élué de la cartouche avec l'élution de la phase mobile.

Figure 3. Le chromatogramme flash de l'échantillon sur une cartouche à phase normale ordinaire.

Figure 4. Le chromatogramme flash de l'échantillon sur une cartouche SAX.
En comparant les figures 3 et 4, le composant A présente une forme de pic incohérente sur les deux cartouches flash différentes.Pour confirmer si le pic d'élution correspond au composant, nous pouvons utiliser la fonction de balayage pleine longueur d'onde intégrée au logiciel de contrôle de la machine SepaBean™.Ouvrez les données expérimentales des deux séparations, faites glisser vers la ligne indicatrice sur l'axe du temps (CV) dans le chromatogramme jusqu'au point le plus élevé et au deuxième point le plus élevé du pic d'élution correspondant au composant A, et le spectre complet de longueur d'onde de ces deux les points seront automatiquement affichés sous le chromatogramme (comme le montrent les figures 5 et 6).En comparant les données du spectre de longueur d'onde complet de ces deux séparations, le composant A présente un spectre d'absorption cohérent dans deux expériences.Étant donné que le composant A a une forme de pic incohérente sur deux cartouches flash différentes, on suppose qu'il existe une impureté spécifique dans le composant A qui a une rétention différente sur la cartouche de phase normale et la cartouche SAX.Par conséquent, la séquence d'élution est différente pour le composant A et l'impureté sur ces deux cartouches flash, ce qui entraîne une forme de pic incohérente sur les chromatogrammes.

Figure 5. Le spectre complet de longueur d'onde du composant A et de l'impureté séparée par la cartouche de phase normale.

Figure 6. Le spectre complet de longueurs d'onde du composant A et de l'impureté séparée par la cartouche SAX.

Si le produit cible à collecter est le composant neutre A, la tâche de purification peut facilement être complétée en utilisant directement la cartouche SAX pour l'élution après le chargement de l'échantillon.En revanche, si le produit cible à collecter est le composant acide B, la méthode capture-libération pourrait être adoptée avec seulement un léger ajustement dans les étapes expérimentales : lorsque l'échantillon a été chargé sur la cartouche SAX et le composant neutre A a été complètement éluée avec des solvants organiques en phase normale, remplacez la phase mobile par une solution de méthanol contenant 5 % d'acide acétique.Les ions acétate dans la phase mobile entreront en compétition avec le composant B pour se lier aux groupes d'ions amine quaternaire sur la phase stationnaire de la cartouche SAX, éluant ainsi le composant B de la cartouche pour obtenir le produit cible.Le chromatogramme de l'échantillon séparé en mode échange d'ions a été présenté à la figure 7.

Figure 7. Le chromatogramme flash du composant B élué en mode échange d'ions sur une cartouche SAX.

En conclusion, un échantillon acide ou neutre pourrait être rapidement purifié par une cartouche SAX combinée à une cartouche en phase normale en utilisant différentes stratégies de purification.De plus, grâce à la fonction de balayage pleine longueur d'onde intégrée au logiciel de contrôle de la machine SepaBean™, le spectre d'absorption caractéristique des fractions éluées a pu être facilement comparé et confirmé, aidant ainsi les chercheurs à déterminer rapidement la composition et la pureté des fractions éluées et améliorant ainsi efficacité du travail.