L'application de colonnes C18AQ dans la purification de forts peptides polaires

Rui Huang, Bo Xu
Centre de R&D d'application

Introduction
Un peptide est un composé composé d'acides aminés, dont chacun possède des propriétés physiques et chimiques uniques en raison des différents types et de l'ordre des résidus d'acides aminés constituant sa séquence. Avec le développement d'une synthèse chimique en phase solide, la synthèse chimique de divers peptides actifs a fait de grands progrès. Cependant, en raison de la composition compliquée du peptide obtenu par synthèse de phase solide, le produit final doit être purifié par des méthodes de séparation fiables. Les méthodes de purification couramment utilisées pour les peptides comprennent la chromatographie d'échange d'ions (IEC) et la chromatographie liquide à haute performance en phase inversée (RP-HPLC), qui ont les inconvénients de la capacité de chargement à faible échantillon, du coût élevé des médias de séparation, des équipements de séparation compliqués et coûteux, etc. dans lequel une cartouche SEPAFLASH RP C18 a été utilisée pour la purification rapide de la thymopentine (TP-5) et le produit cible répondant aux exigences a été obtenu.

Figure 1. 20 acides aminés communs (reproduits à partir de www.bachem.com).

Il existe 20 types d'acides aminés courants dans la composition des peptides. Ces acides aminés peuvent être divisés en groupes suivants en fonction de leur polarité et de leur propriété acide-base: non polaire (hydrophobe), polaire (non chargé), acide ou basique (comme le montre la figure 1). Dans une séquence de peptides, si les acides aminés constituant la séquence sont principalement polaires (comme marqué dans la couleur rose sur la figure 1), comme la cystéine, la glutamine, l'asparagine, la sérine, la thréonine, la tyrosine, etc. alors ce peptide pourrait avoir une forte polarité et être très soluble dans l'eau. Au cours de la procédure de purification pour ces forts échantillons de peptides polaires par chromatographie en phase inversée, un phénomène appelé effondrement de phase hydrophobe se produira (se référer à une note d'application publiée précédemment par Santai Technologies: effondrement de la phase hydrophobe, colonnes de chromatographie de phase inversée AQ et leurs applications). Par rapport aux colonnes C18 régulières, les colonnes C18AQ améliorées conviennent le plus à la purification de forts échantillons polaires ou hydrophiles. Dans ce post, un peptide polaire fort a été utilisé comme échantillon et purifié par une colonne C18AQ. En conséquence, le produit cible répondant aux exigences a été obtenu et pourrait être utilisé dans les recherches et développement suivants.