L'application des colonnes C18AQ dans la purification de peptides polaires forts

Rui Huang, Bo Xu
Centre de R&D applicatif

Introduction
Un peptide est un composé composé d'acides aminés, chacun possédant des propriétés physiques et chimiques uniques en raison des différents types et ordres de résidus d'acides aminés constituant sa séquence.Avec le développement de la synthèse chimique en phase solide, la synthèse chimique de divers peptides actifs a fait de grands progrès.Cependant, en raison de la composition complexe du peptide obtenu par synthèse en phase solide, le produit final doit être purifié par des méthodes de séparation fiables.Les méthodes de purification couramment utilisées pour les peptides comprennent la chromatographie par échange d'ions (IEC) et la chromatographie liquide haute performance en phase inversée (RP-HPLC), qui présentent les inconvénients d'une faible capacité de chargement d'échantillon, d'un coût élevé des milieux de séparation, d'un équipement de séparation compliqué et coûteux, etc. Pour la purification rapide de peptides à petites molécules (MW < 1 kDa), un cas d'application réussi a été précédemment publié par Santai Technologies, dans lequel une cartouche SepaFlash RP C18 a été utilisée pour la purification rapide de la thymopentine (TP-5) et du Un produit cible répondant aux exigences a été obtenu.

Figure 1. 20 acides aminés courants (reproduit de www.bachem.com).

Il existe 20 types d’acides aminés courants dans la composition des peptides.Ces acides aminés peuvent être divisés dans les groupes suivants selon leur polarité et leurs propriétés acido-basiques : non polaires (hydrophobes), polaires (non chargés), acides ou basiques (comme le montre la figure 1).Dans une séquence peptidique, si les acides aminés constituant la séquence sont principalement polaires (comme indiqué en rose sur la figure 1), tels que la cystéine, la glutamine, l'asparagine, la sérine, la thréonine, la tyrosine, etc., alors ce peptide pourrait avoir un fort effet. polarité et être hautement soluble dans l’eau.Au cours de la procédure de purification de ces échantillons de peptides polaires forts par chromatographie en phase inversée, un phénomène appelé effondrement de la phase hydrophobe se produira (se référer à une note d'application précédemment publiée par Santai Technologies : Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns and Their Applications).Par rapport aux colonnes C18 classiques, les colonnes C18AQ améliorées sont les plus adaptées à la purification d'échantillons fortement polaires ou hydrophiles.Dans cet article, un peptide polaire puissant a été utilisé comme échantillon et purifié par une colonne C18AQ.En conséquence, le produit cible répondant aux exigences a été obtenu et a pu être utilisé dans les recherches et développements suivants.