Rui Huang, bo xu
Sovellus- ja kehityskeskus
Esittely
Peptidi on yhdiste, joka koostuu aminohapoista, joista jokaisella on ainutlaatuiset fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet johtuen sen sekvenssistä muodostuvien aminohappotähteiden eri tyypeistä ja järjestyksestä. Kiinteän faasikemiallisen synteesin kehittymisen myötä erilaisten aktiivisten peptidien kemiallinen synteesi on edistynyt huomattavasti. Kiinteän vaiheen synteesillä saadun peptidin monimutkaisen koostumuksen vuoksi lopputuote tulisi kuitenkin puhdistaa luotettavilla erotusmenetelmillä. Yleisesti käytettyjä peptidien puhdistusmenetelmiä ovat ioninvaihtokromatografia (IEC) ja käännetyn faasin korkean suorituskyvyn nestekromatografia (RP-HPLC), joilla on alhaisen näytteen lastauskapasiteetin haitat, erotteluvälineiden korkeat kustannukset, monimutkaiset ja kalliit erottelulaitteet jne. Sepaflash RP C18 -patruunaa käytettiin tymopentiinin nopeaan puhdistukseen (TP-5) ja vaatimusten kohdetuotteen täyttämiseen.
Kuvio 1. 20 Yleiset aminohapot (toistettu osoitteesta www.bachem.com).
Aminohappoja on 20 erilaista, jotka ovat yleisiä peptidien koostumuksessa. Nämä aminohapot voidaan jakaa seuraaviin ryhmiin niiden polaarisuuden ja happo-emäsominaisuuden mukaan: ei-polaarinen (hydrofobinen), polaarinen (lataamaton), hapan tai emäksinen (kuten kuviossa 1 esitetään). Peptidisekvenssissä, jos sekvenssin muodostavat aminohapot ovat enimmäkseen polaarisia (kuten vaaleanpunaisella värillä kuviossa 1), kuten kysteiini, glutamiini, asparagiini, seriini, treoniini, tyrosiini jne. Sitten tällä peptidillä voi olla voimakas napaisuus ja olla erittäin liukeneminen vedessä. Näiden vahvojen polaaristen peptidinäytteiden puhdistusmenettelyn aikana tapahtuu käännettyjen faasikromatografian avulla ilmiö, nimeltään hydrofobinen faasin romahtaminen (katso aiemmin julkaistu SANTAI-tekniikan julkaistu sovellushuomautus: hydrofobinen vaiheen romahtaminen, AQ: n käänteiset vaihekromatografiapylväät ja niiden sovellukset). Tavallisten C18 -pylväiden verrattuna parannetut C18AQ -pylväät ovat sopivimpia vahvojen polaaristen tai hydrofiilisten näytteiden puhdistamiseen. Tässä viestissä käytettiin voimakasta polaarista peptidiä näytteenä ja puhdistettiin C18AQ -pylväällä. Seurauksena on, että vaatimusten kohteena oleva kohdetuote saatiin ja sitä voidaan käyttää seuraavassa tutkimuksessa ja kehityksessä.
| Instrumentti | Ali-™Kone 2 | |||
| Patruunat | 12 g Sepaflash C18 RP Flash -patruuna (pallomainen piidioksidi, 20-45 μm, 100 Å, tilaus Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP Flash -patruuna (pallomainen piidioksidi, 20-45 μm, 100 Å, tilausnumero ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Aallonpituus | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Liikkuva vaihe | Liuotin A: Vesi Liuotin B: asetonitriili | |||
| Virtausnopeus | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Näytteenkuormitus | 30 mg | |||
| Kaltevuus | Aika (CV) | Liuotin B (%) | Aika (min) | Liuotin B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29,0 | 87 | |||
Tulokset ja keskustelu
Polaarisen peptidinäytteen puhdistussuorituskyvyn vertaamiseksi tavallisen C18 -pylvään ja C18AQ -pylvään välillä käytimme säännöllistä C18 -pylvästä näytteen salamanpuhdistukseen alkamiseksi. Kuten kuviossa 2 esitetään, johtuen korkean vesisuhteen aiheuttamien C18 -ketjujen hydrofobisen faasin romahtamisen vuoksi näyte säilytettiin tuskin tavallisessa C18 Seurauksena näytettä ei erotettu tehokkaasti ja puhdistettu.
Kuva 2. Näytteen flash -kromatogrammi tavallisella C18 -patruunassa.
Seuraavaksi käytimme C18AQ -saraketta näytteen salamanpuhdistukseen. Kuten kuviossa 3 esitetään, peptidi pidettiin tehokkaasti pylväässä ja eluoitiin sitten. Kohdetuote erotettiin raa'an näytteen epäpuhtauksista ja kerättiin. Lyophilisoinnin jälkeen ja sitten analysoidaan HPLC: llä puhdistetun tuotteen puhtaus on 98,2% ja sitä voidaan edelleen käyttää seuraavaa vaiheen tutkimusta ja kehitystä varten.
Kuva 3. Näytteen flash -kromatogrammi C18AQ -patruunassa.
Yhteenvetona voidaan todeta,™Kone voisi tarjota nopean ja tehokkaan ratkaisun voimakkaiden polaaristen tai hydrofiilisten näytteiden puhdistamiseksi.
Siellä on sarja SEPAFlash C18AQ RP -salamapatruunoita, joilla on erilaiset eritelmät SANTAI -tekniikasta (kuten taulukossa 2 esitetään).
| Kohteenumero | Pylväskoko | Virtausnopeus (ml/min) | Enimmäispaine (psi/baari) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17,2 |
Taulukko 2. Sepaflash C18AQ RP Flash -patruunat. Pakkausmateriaalit: Korkean tehokkuuden pallomainen C18 (AQ) -pidetty piidioksidi, 20-45 μm, 100 Å.
Lisätietoja Sepaflash -sarjan Flash -patruunoista saadaan lisätietoja Sepaflash -sarjan yksityiskohtaisista eritelmistä tai tilaustiedoista verkkosivustollamme.
Viestin aika: lokakuu-12-2018