مینگزو یانگ، بو خو
مرکز تحقیق و توسعه برنامه
معرفی
آنتی‌بیوتیک‌ها دسته‌ای از متابولیت‌های ثانویه هستند که توسط میکروارگانیسم‌ها (از جمله باکتری‌ها، قارچ‌ها، اکتینومیست‌ها) یا ترکیبات مشابه تولید می‌شوند که از نظر شیمیایی سنتز یا نیمه سنتز می‌شوند.آنتی بیوتیک ها می توانند از رشد و بقای سایر میکروارگانیسم ها جلوگیری کنند.اولین آنتی بیوتیک کشف شده توسط انسان، پنی سیلین، توسط میکروبیولوژیست بریتانیایی الکساندر فلمینگ در سال 1928 کشف شد. او مشاهده کرد که باکتری های موجود در مجاورت کپک نمی توانند در ظرف کشت استافیلوکوک که به کپک آلوده شده بود رشد کنند.او فرض کرد که کپک باید یک ماده ضد باکتریایی ترشح کند که در سال 1928 آن را پنی سیلین نامید. با این حال، مواد فعال در آن زمان خالص نشده بودند.در سال 1939، ارنست چین و هوارد فلوری از دانشگاه آکسفورد تصمیم گرفتند دارویی بسازند که می تواند عفونت های باکتریایی را درمان کند.پس از تماس با فلمینگ برای به دست آوردن سویه ها، آنها با موفقیت پنی سیلین را از سویه ها استخراج و خالص کردند.فلمینگ، چین و فلوری برای توسعه موفقیت آمیز پنی سیلین به عنوان یک داروی درمانی، جایزه نوبل پزشکی 1945 را به اشتراک گذاشتند.
آنتی بیوتیک ها به عنوان عوامل ضد باکتریایی برای درمان یا پیشگیری از عفونت های باکتریایی استفاده می شوند.چندین دسته اصلی از آنتی بیوتیک ها وجود دارد که به عنوان عوامل ضد باکتریایی مورد استفاده قرار می گیرند: آنتی بیوتیک های بتالاکتام (شامل پنی سیلین، سفالوسپورین و غیره)، آنتی بیوتیک های آمینوگلیکوزید، آنتی بیوتیک های ماکرولید، آنتی بیوتیک های تتراسایکلین، کلرامفنیکل (آنتی بیوتیک مصنوعی کامل) و غیره. منابع آنتی بیوتیک ها عبارتند از: تخمیر بیولوژیکی، نیمه سنتز و سنتز کل.آنتی بیوتیک های تولید شده توسط تخمیر بیولوژیکی به دلیل پایداری شیمیایی، عوارض جانبی سمی، طیف ضد باکتریایی و سایر مسائل نیاز به اصلاح ساختاری با روش های شیمیایی دارند.پس از اصلاح شیمیایی، آنتی بیوتیک ها می توانند به افزایش پایداری، کاهش عوارض جانبی سمی، گسترش طیف ضد باکتریایی، کاهش مقاومت دارویی، بهبود فراهمی زیستی و در نتیجه بهبود اثر درمان دارویی دست یابند.بنابراین، آنتی بیوتیک های نیمه مصنوعی در حال حاضر محبوب ترین جهت در توسعه داروهای آنتی بیوتیکی هستند.
در توسعه آنتی بیوتیک های نیمه مصنوعی، آنتی بیوتیک ها دارای خواص خلوص کم، محصولات جانبی زیاد و اجزای پیچیده هستند زیرا از محصولات تخمیر میکروبی مشتق می شوند.در این مورد، تجزیه و تحلیل و کنترل ناخالصی ها در آنتی بیوتیک های نیمه مصنوعی اهمیت ویژه ای دارد.به منظور شناسایی و شناسایی موثر ناخالصی ها، لازم است مقدار کافی ناخالصی از محصول مصنوعی آنتی بیوتیک های نیمه مصنوعی بدست آید.در میان روش های متداول تهیه ناخالصی، کروماتوگرافی فلش یک روش مقرون به صرفه است که دارای مزایایی مانند مقدار بارگذاری نمونه زیاد، هزینه کم، صرفه جویی در زمان و غیره است. کروماتوگرافی فلش بیش از پیش توسط محققان مصنوعی مورد استفاده قرار گرفته است.
در این پست، ناخالصی اصلی یک آنتی بیوتیک آمینوگلیکوزید نیمه مصنوعی به عنوان نمونه مورد استفاده قرار گرفت و توسط یک کارتریج SepaFlash C18AQ همراه با دستگاه کروماتوگرافی فلش SepaBean™ خالص سازی شد.محصول مورد نظر مطابق با الزامات با موفقیت به دست آمد که راه حل بسیار کارآمدی را برای خالص سازی این ترکیبات پیشنهاد می کند.
بخش تجربی
نمونه توسط یک شرکت داروسازی محلی ارائه شده است.نمونه، نوعی آمینو کربوهیدرات چند حلقه ای بود و ساختار مولکولی آن مشابه آنتی بیوتیک های آمینوگلیکوزید بود.قطبیت نمونه نسبتاً بالا بود و آن را بسیار محلول در آب می کرد.نمودار شماتیک ساختار مولکولی نمونه در شکل 1 نشان داده شده است. خلوص نمونه خام حدود 88% بود که توسط HPLC آنالیز شد.برای خالص سازی این ترکیبات با قطبیت بالا، نمونه بر اساس تجربیات قبلی ما به سختی روی ستون های معمولی C18 باقی می ماند.بنابراین، یک ستون C18AQ برای خالص سازی نمونه استفاده شد.
شکل 1. نمودار شماتیک ساختار مولکولی نمونه.
برای تهیه محلول نمونه، 50 میلی‌گرم نمونه خام در 5 میلی‌لیتر آب خالص حل شد و سپس فراصوت شد تا به محلولی کاملاً شفاف تبدیل شود.سپس محلول نمونه توسط یک انژکتور به ستون فلاش تزریق شد.تنظیمات آزمایشی تصفیه فلاش در جدول 1 فهرست شده است.
| ابزار | دستگاه SepaBean™ 2 | |
| کارتریج | کارتریج فلاش 12 گرمی SepaFlash C18AQ RP (سیلیکا کروی، 20 - 45μm، 100 Å، شماره سفارش：SW-5222-012-SP(AQ)) | |
| طول موج | 204 نانومتر، 220 نانومتر | |
| فاز موبایل | حلال الف: آب حلال B: استونیتریل | |
| نرخ جریان | 15 میلی لیتر در دقیقه | |
| بارگذاری نمونه | 50 میلی گرم | |
| شیب | زمان (دقیقه) | حلال B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
نتایج و بحث
کروماتوگرام فلش نمونه روی کارتریج C18AQ در شکل 2 نشان داده شده است. همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است، نمونه بسیار قطبی به طور موثر بر روی کارتریج C18AQ حفظ شد.پس از لیوفولیزاسیون برای فراکسیون های جمع آوری شده، محصول مورد نظر دارای خلوص 96.2٪ (همانطور که در شکل 3 نشان داده شده است) با تجزیه و تحلیل HPLC بود.نتایج نشان داد که محصول خالص شده می تواند در مرحله بعدی تحقیق و توسعه مورد استفاده قرار گیرد.
شکل 2. کروماتوگرام فلش نمونه روی کارتریج C18AQ.
شکل 3. کروماتوگرام HPLC محصول مورد نظر.
در نتیجه، کارتریج فلش SepaFlash C18AQ RP همراه با سیستم کروماتوگرافی فلش دستگاه SepaBean™ می‌تواند راه‌حلی سریع و موثر برای خالص‌سازی نمونه‌های بسیار قطبی ارائه دهد.
درباره کارتریج های فلش SepaFlash C18AQ RP
یک سری کارتریج فلش SepaFlash C18AQ RP با مشخصات متفاوت از Santai Technology (همانطور که در جدول 2 نشان داده شده است) وجود دارد.
| شماره مورد | اندازه ستون | نرخ جریان (میلی لیتر در دقیقه) | حداکثر فشار (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 گرم | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 گرم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 گرم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 گرم | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 گرم | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 گرم | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 گرم | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 گرم | 40-80 | 250/17.2 |
جدول 2. کارتریج فلش SepaFlash C18AQ RP.مواد بسته بندی: سیلیس کروی با باند C18 (AQ) با کارایی بالا، 20 - 45 میکرومتر، 100 Å.
برای اطلاعات بیشتر در مورد مشخصات دقیق دستگاه SepaBean™ یا اطلاعات سفارش در مورد کارتریج های فلش سری SepaFlash، لطفاً از وب سایت ما دیدن کنید.
زمان ارسال: اکتبر-26-2018