Mingzu Yang ، Bo Xu
مرکز تحقیق و توسعه برنامه
مقدمه
آنتی بیوتیک ها کلاس متابولیتهای ثانویه تولید شده توسط میکروارگانیسم ها (از جمله باکتری ها ، قارچ ها ، اکتینومایس ها) یا ترکیبات مشابهی هستند که از نظر شیمیایی سنتز شده یا نیمه سنتز هستند. آنتی بیوتیک ها می توانند رشد و بقای سایر میکروارگانیسم ها را مهار کنند. اولین آنتی بیوتیک کشف شده توسط انسان ، پنی سیلین ، توسط میکروبیولوژیست بریتانیایی الكساندر فلمینگ در سال 1928 كشف شد. وی مشاهده كرد كه باكتریهای موجود در مجاورت قالب نمی توانند در ظرف كشت استافیلوكوكس كه با قالب آلوده شده بود ، رشد كنند. وی فرض کرد که قالب باید یک ماده ضد باکتریایی را ترشح کند ، که وی در سال 1928 به نام پنی سیلین نامید. با این حال ، مواد فعال در آن زمان خالص نمی شدند. در سال 1939 ، ارنست زنجیره ای و هوارد فلوری از دانشگاه آکسفورد تصمیم به ایجاد دارویی گرفتند که بتواند عفونت های باکتریایی را درمان کند. آنها پس از تماس با فلمینگ برای به دست آوردن سویه ها ، پنی سیلین را با موفقیت استخراج و خالص کردند. برای پیشرفت موفقیت آمیز پنی سیلین به عنوان یک داروی درمانی ، فلمینگ ، زنجیره ای و فلوری جایزه نوبل پزشکی در سال 1945 را به اشتراک گذاشتند.
آنتی بیوتیک ها به عنوان داروهای ضد باکتریایی برای درمان یا جلوگیری از عفونت های باکتریایی استفاده می شوند. چندین دسته اصلی از آنتی بیوتیک ها به عنوان عوامل ضد باکتریایی مورد استفاده قرار می گیرند: آنتی بیوتیک های β- لاکتام (از جمله پنی سیلین ، سفالوسپورین و غیره) ، آنتی بیوتیک های آمینوگلیکوزید ، آنتی بیوتیک های مانمولید ، آنتی بیوتیک های تتراسایکلین ، کلرامفنیک (کل آنتی بیوتیک سنتز) و غیره. سنتز کل آنتی بیوتیک های تولید شده توسط تخمیر بیولوژیکی باید به دلیل ثبات شیمیایی ، عوارض جانبی سمی ، طیف ضد باکتریایی و سایر موارد ، از نظر ساختاری اصلاح شوند. پس از اصلاح شیمیایی ، آنتی بیوتیک ها می توانند به افزایش پایداری ، کاهش عوارض جانبی سمی ، گسترش طیف ضد باکتریایی ، کاهش مقاومت به دارو ، بهبود فراهمی زیستی و در نتیجه بهبود اثر دارویی دست یابند. بنابراین ، آنتی بیوتیک های نیمه مصنوعی در حال حاضر محبوب ترین جهت در تولید داروهای آنتی بیوتیکی هستند.
در توسعه آنتی بیوتیک های نیمه سنتز ، آنتی بیوتیک ها دارای خواص خلوص کم ، بسیاری از محصولات جانبی و اجزای پیچیده هستند زیرا از محصولات تخمیر میکروبی حاصل می شوند. در این حالت ، تجزیه و تحلیل و کنترل ناخالصی در آنتی بیوتیک های نیمه سنتز از اهمیت ویژه ای برخوردار است. به منظور شناسایی و توصیف ناخالصی ها ، لازم است مقدار کافی ناخالصی از محصول مصنوعی آنتی بیوتیک های نیمه مصنوعی بدست آورید. از جمله تکنیک های آماده سازی ناخالصی متداول ، کروماتوگرافی فلش روشی مقرون به صرفه است که دارای مزایایی مانند مقدار بارگذاری نمونه بزرگ ، کم هزینه ، صرفه جویی در وقت و غیره است. کروماتوگرافی فلش بیشتر و بیشتر توسط محققان مصنوعی به کار رفته است.
در این پست ، ناخالصی اصلی یک آنتی بیوتیک آمینوگلیکوزید نیمه سنتز به عنوان نمونه مورد استفاده قرار گرفت و توسط یک کارتریج Sepaflash C18AQ همراه با سیستم کروماتوگرافی فلش Sepabean inted خالص شد. طرح محصول هدف مورد نیاز با موفقیت به دست آمد ، که یک راه حل بسیار کارآمد برای تصفیه این ترکیبات را نشان می دهد.
بخش تجربی
این نمونه توسط یک شرکت دارویی محلی ارائه شده است. نمونه نوعی کربوهیدرات های چند حلقه ای آمینه بود و ساختار مولکولی آن با آنتی بیوتیک های آمینوگلیکوزید مشابه بود. قطبیت نمونه نسبتاً زیاد بود و آن را در آب بسیار محلول می کرد. نمودار شماتیک ساختار مولکولی نمونه در شکل 1 نشان داده شده است. خلوص نمونه خام حدود 88 ٪ بود که توسط HPLC تجزیه و تحلیل شد. برای تصفیه این ترکیبات قطبیت بالا ، نمونه با توجه به تجربیات قبلی ما به سختی در ستون های معمولی C18 حفظ می شود. بنابراین ، یک ستون C18AQ برای تصفیه نمونه استفاده شد.
شکل 1. نمودار شماتیک ساختار مولکولی نمونه.
برای تهیه محلول نمونه ، 50 میلی گرم نمونه خام در 5 میلی لیتر آب خالص حل شد و سپس مافوق صوت به منظور تبدیل شدن به یک راه حل کاملاً واضح. محلول نمونه سپس توسط یک انژکتور به ستون فلش تزریق شد. تنظیم آزمایشی تصفیه فلش در جدول 1 ذکر شده است.
| ابزار | Sepabean ™ دستگاه 2 | |
| کارتریج | 12 گرم کارتریج فلش Sepaflash C18AQ RP (سیلیس کروی ، 20-45μm ، 100 Å ، شماره سفارش ： SW-5222-012-SP (AQ)) | |
| طول موج | 204 نانومتر ، 220 نانومتر | |
| مرحله متحرک | حلال A: آب حلال B: استونیتریل | |
| میزان جریان | 15 میلی لیتر در دقیقه | |
| بارگذاری نمونه | 50 میلی گرم | |
| شیب | زمان (دقیقه) | حلال B (٪) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
نتایج و بحث
کروماتوگرام فلش نمونه در کارتریج C18AQ در شکل 2 نشان داده شد. همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است ، نمونه بسیار قطبی به طور موثری در کارتریج C18AQ حفظ شد. پس از لئوفولیزاسیون برای کسری جمع آوری شده ، محصول هدف دارای خلوص 96.2 ٪ (همانطور که در شکل 3 نشان داده شده است) با تجزیه و تحلیل HPLC. نتایج نشان داد که از محصول خالص شده می تواند بیشتر در تحقیق و توسعه مرحله بعدی استفاده شود.
شکل 2 کروماتوگرام فلش نمونه در کارتریج C18AQ.
شکل 3 کروماتوگرام HPLC محصول هدف.
در نتیجه ، کارتریج فلش Sepaflash C18AQ RP همراه با سیستم کروماتوگرافی فلش Sepabean ™ می تواند یک راه حل سریع و مؤثر برای تصفیه نمونه های بسیار قطبی ارائه دهد.
درباره کارتریج های فلش Sepaflash C18AQ RP
مجموعه ای از کارتریج های فلش Sepaflash C18AQ RP با مشخصات مختلف از فناوری Santai (همانطور که در جدول 2 نشان داده شده است) وجود دارد.
| شماره مورد | اندازه ستون | میزان جریان (ML/min) | max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 گرم | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 گرم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 گرم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 گرم | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 گرم | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 گرم | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-52222220-SP (AQ) | 300 گرم | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 گرم | 40-80 | 250/17.2 |
جدول 2. کارتریج های فلش Sepaflash C18AQ RP. مواد بسته بندی: سیلیس کروی C18 (AQ) با راندمان بالا ، 20-45 میکرومتر ، 100.
برای کسب اطلاعات بیشتر در مورد مشخصات دقیق دستگاه Sepabean ™ یا اطلاعات سفارش در مورد کارتریج های فلش سری Sepaflash ، لطفاً به وب سایت ما مراجعه کنید.
زمان پست: اکتبر -26-2018