Rui Huang ، Bo Xu
مرکز تحقیق و توسعه برنامه
مقدمه
پپتید ترکیبی است که از اسیدهای آمینه تشکیل شده است که هر یک از آنها به دلیل انواع مختلف و ترتیب باقیمانده اسیدهای آمینه که توالی آن را تشکیل می دهند ، دارای خواص فیزیکی و شیمیایی منحصر به فردی هستند. با توسعه سنتز شیمیایی فاز جامد ، سنتز شیمیایی پپتیدهای مختلف فعال پیشرفت زیادی داشته است. با این حال ، با توجه به ترکیب پیچیده پپتید به دست آمده توسط سنتز فاز جامد ، محصول نهایی باید با روش های جداسازی قابل اعتماد خالص شود. روشهای تصفیه متداول برای پپتیدها شامل کروماتوگرافی تبادل یونی (IEC) و فاز معکوس کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (RP-HPLC) است که دارای مضرات ظرفیت بارگذاری نمونه پایین ، هزینه بالای تجهیزات جداگانه ، و غیره است. که یک کارتریج Sepaflash RP C18 برای تصفیه سریع تیموپنتین (TP-5) مورد استفاده قرار گرفت و مورد نیاز محصول مورد نیاز به دست آمد.
شکل 1. 20 اسید آمینه رایج (بازتولید شده از www.bachem.com).
20 نوع اسید آمینه وجود دارد که در ترکیب پپتیدها رایج است. این اسیدهای آمینه را می توان با توجه به قطبیت و خاصیت اسید پایه آنها به گروههای زیر تقسیم کرد: غیر قطبی (آبگریز) ، قطبی (بدون شارژ) ، اسیدی یا اساسی (همانطور که در شکل 1 نشان داده شده است). در یک دنباله پپتید ، اگر اسیدهای آمینه تشکیل دهنده توالی بیشتر قطبی باشند (همانطور که در شکل صورتی در شکل 1 مشخص شده است) ، مانند سیستئین ، گلوتامین ، مارچوبین ، سرین ، تیرونین ، تیروزین و غیره. در طی روش تصفیه برای این نمونه های پپتید قطبی قوی توسط کروماتوگرافی فاز معکوس ، پدیده ای به نام فروپاشی فاز آبگریز رخ خواهد داد (به یک یادداشت قبلی منتشر شده توسط Santai Technologies: سقوط فاز آبگریز ، ستون های کروماتوگرافی فاز معکوس AQ و کاربردهای آنها مراجعه کنید). در مقایسه با ستون های معمولی C18 ، ستون های بهبود یافته C18AQ برای تصفیه نمونه های قطبی یا آبگریز قوی مناسب هستند. در این پست ، از یک پپتید قطبی قوی به عنوان نمونه استفاده شد و توسط یک ستون C18AQ خالص شد. در نتیجه ، پوشش محصول هدف مورد نیاز به دست آمد و می تواند در تحقیق و توسعه زیر مورد استفاده قرار گیرد.
| ابزار | ستارگان™دستگاه 2 | |||
| کارتریج | 12 گرم کارتریج فلش Sepaflash C18 Rp (سیلیس کروی ، 20-45 میکرومتر ، 100 Å ، سفارش Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 گرم کارتریج فلش Sepaflash C18AQ RP (سیلیس کروی ، 20-45 میکرومتر ، 100 Å ، شماره سفارش ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| طول موج | 254 نانومتر ، 220 نانومتر | 214 نانومتر | ||
| مرحله متحرک | حلال A: آب حلال B: استونیتریل | |||
| میزان جریان | 15 میلی لیتر در دقیقه | 20 میلی لیتر در دقیقه | ||
| بارگذاری نمونه | 30 میلی گرم | |||
| شیب | زمان (CV) | حلال B (٪) | زمان (دقیقه) | حلال B (٪) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
نتایج و بحث
برای مقایسه عملکرد تصفیه برای نمونه پپتید قطبی بین ستون معمولی C18 و ستون C18AQ ، ما از یک ستون معمولی C18 برای تصفیه فلش نمونه به عنوان شروع استفاده کردیم. همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است ، به دلیل فروپاشی فاز آبگریز زنجیرهای C18 ناشی از نسبت آبی بالا ، نمونه به سختی در کارتریج معمولی C18 حفظ شده و مستقیماً توسط فاز متحرک بیرون می رود. در نتیجه ، نمونه به طور مؤثر از هم جدا و تصفیه نشده بود.
شکل 2 کروماتوگرام فلش نمونه در کارتریج معمولی C18.
در مرحله بعد ، از یک ستون C18AQ برای تصفیه فلش نمونه استفاده کردیم. همانطور که در شکل 3 نشان داده شده است ، پپتید به طور موثری روی ستون حفظ شد و سپس بیرون آمد. محصول هدف از ناخالصی های موجود در نمونه خام جدا شد و جمع آوری شد. پس از لیوفیلیزاسیون و سپس توسط HPLC ، محصول تصفیه شده دارای خلوص 98.2 ٪ است و می تواند بیشتر برای تحقیق و توسعه مرحله بعدی مورد استفاده قرار گیرد.
شکل 3 کروماتوگرام فلش نمونه در کارتریج C18AQ.
در نتیجه ، کارتریج فلش Sepaflash C18AQ RP همراه با سیستم کروماتوگرافی فلش Sepabean™دستگاه می تواند یک راه حل سریع و مؤثر برای تصفیه نمونه های قطبی یا آبگریز قوی ارائه دهد.
مجموعه ای از کارتریج های فلش Sepaflash C18AQ RP با مشخصات مختلف از فناوری Santai (همانطور که در جدول 2 نشان داده شده است) وجود دارد.
| شماره مورد | اندازه ستون | میزان جریان (ML/min) | max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 گرم | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 گرم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 گرم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 گرم | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 گرم | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 گرم | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-52222220-SP (AQ) | 300 گرم | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 گرم | 40-80 | 250/17.2 |
جدول 2. کارتریج های فلش Sepaflash C18AQ RP. مواد بسته بندی: سیلیس کروی C18 (AQ) با راندمان بالا ، 20-45 میکرومتر ، 100.
برای کسب اطلاعات بیشتر در مورد مشخصات دقیق دستگاه Sepabean ™ یا اطلاعات سفارش در مورد کارتریج های فلش سری Sepaflash ، لطفاً به وب سایت ما مراجعه کنید.
زمان پست: اکتبر 12-2018