Mingzu Yang, Bo Xu
Aplikazio I+G Zentroa
Sarrera
Antibiotikoak mikroorganismoek (bakterioak, onddoak, aktinomizetoak barne) edo antzeko konposatuek ekoitzitako metabolito sekundarioak dira, kimikoki sintetizatuta edo erdi sintetizatuta daudenak.Antibiotikoek beste mikroorganismo batzuen hazkuntza eta biziraupena galarazi dezakete.Gizakiak aurkitutako lehen antibiotikoa, penizilina, Alexander Fleming mikrobiologo britainiarrak aurkitu zuen 1928an. Hark ikusi zuen lizunaren inguruan zeuden bakterioak ezin zirela hazi lizunez kutsatuta zegoen estafilokokoaren hazkuntza-plateran.Moldeak bakterioen aurkako substantzia bat jariatu behar zuela planteatu zuen, 1928an penizilina izena eman zion. Hala ere, osagai aktiboak ez ziren garai hartan araztu.1939an, Oxfordeko Unibertsitateko Ernst Chain-ek eta Howard Floreyk bakterioen infekzioak tratatzeko moduko botika bat garatzea erabaki zuten.Anduiak lortzeko Flemingekin harremanetan jarri ondoren, anduetatik penizilina arrakastaz atera eta araztu zuten.Penizilina sendagai terapeutiko gisa garatzeko arrakastagatik, Fleming, Chain eta Floreyk 1945eko Medikuntzako Nobel Saria partekatu zuten.
Antibiotikoak bakterioen infekzioak tratatzeko edo prebenitzeko agente antibacteriano gisa erabiltzen dira.Bakterioen aurkako agente gisa erabiltzen diren antibiotikoen kategoria nagusi batzuk daude: β-lactam antibiotikoak (penizilina, zefalosporina, etab. barne), aminoglukosidoen antibiotikoak, makrolidoen antibiotikoak, tetraziklina antibiotikoak, kloranfenikola (antibiotiko sintetiko osoa) eta abar. hartzidura biologikoa, erdi-sintesia eta erabateko sintesia.Hartzidura biologikoaren bidez sortutako antibiotikoak estrukturalki aldatu behar dira metodo kimikoen bidez, egonkortasun kimikoa, bigarren mailako efektu toxikoak, bakterioen aurkako espektroa eta beste arazo batzuengatik.Kimikoki aldatu ondoren, antibiotikoek egonkortasun handiagoa lor dezakete, bigarren mailako efektu toxikoak murriztea, bakterioen aurkako espektroa zabaldu, botiken erresistentzia murriztu, bioerabilgarritasuna hobetu eta, ondorioz, sendagaien tratamenduaren eragina hobetu.Hori dela eta, antibiotiko erdi-sintetikoak dira gaur egun antibiotikoen garapenerako norabiderik ezagunena.
Antibiotiko erdisintetikoen garapenean, antibiotikoek purutasun baxuko, azpiproduktu asko eta osagai konplexuen propietateak dituzte, hartzidura mikrobioen produktuetatik eratorritakoak baitira.Kasu honetan, bereziki garrantzitsua da antibiotiko erdisintetikoetan ezpurutasunen analisia eta kontrola.Ezpurutasunak eraginkortasunez identifikatu eta karakterizatzeko, beharrezkoa da antibiotiko erdi-sintetikoen produktu sintetikotik ezpurutasun kopuru nahikoa lortzea.Ezpurutasunak prestatzeko erabili ohi diren tekniken artean, flash kromatografia metodo errentagarria da, hala nola laginak kargatzeko kopuru handia, kostu txikia, denbora aurreztea, etab. Flash kromatografia ikertzaile sintetikoek gero eta gehiago erabiltzen dute.
Argitalpen honetan, aminoglukosido antibiotiko erdisintetiko baten ezpurutasun nagusia lagin gisa erabili eta SepaFlash C18AQ kartutxo baten bidez purifikatu zen SepaBean™ flash kromatografia sistemarekin konbinatuta.Baldintzak betetzen dituen xede-produktua arrakastaz lortu da, eta konposatu horiek arazteko soluzio oso eraginkorra iradokitzen du.
Atala Esperimentala
Lagina tokiko farmazia-enpresa batek eman zuen atsegin handiz.Lagina karbohidrato amino polizikliko moduko bat zen eta bere egitura molekularra aminoglukosido antibiotikoekin antzekoa zen.Laginaren polaritatea nahiko altua zen, eta oso disolbagarria zen uretan.Laginaren egitura molekularraren diagrama eskematikoa 1. Irudian erakusten da. Lagin gordinaren garbitasuna % 88 ingurukoa zen HPLC bidez aztertuta.Polaritate handiko konposatu horien arazketarako, lagina ozta-ozta mantenduko litzateke C18 zutabe arruntetan gure aurreko esperientzien arabera.Hori dela eta, C18AQ zutabe bat erabili zen laginaren arazketarako.
1. Irudia. Laginaren egitura molekularraren eskema.
Lagin-disoluzioa prestatzeko, 50 mg lagin gordina 5 ml-ko ur puruan disolbatu zen eta, ondoren, ultrasoinuak egin ziren guztiz argia izan zedin.Lagin-disoluzioa injektore baten bidez flash zutabean injektatu zen.Flash-arazketaren konfigurazio esperimentala 1. taulan zerrendatu zen.
| Instrumentua | SepaBean™ makina 2 | |
| Kartutxoak | 12 g SepaFlash C18AQ RP flash kartutxoa (silize esferikoa, 20 - 45μm, 100 Å, Eskaera zenbakia: SW-5222-012-SP(AQ)) | |
| Uhin-luzera | 204 nm, 220 nm | |
| Fase mugikorra | A disolbatzailea: ura B disolbatzailea: azetonitrilo | |
| Jario tasa | 15 ml/min | |
| Laginak kargatzea | 50 mg | |
| Gradientea | Denbora (min) | B disolbatzailea (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Emaitzak eta eztabaida
C18AQ kartutxoko laginaren flash-kromatograma 2. Irudian erakutsi zen. 2. Irudian ikusten den bezala, oso polar-lagina C18AQ kartutxoan mantendu zen.Bildutako frakzioen liofolizazioaren ondoren, xede-produktuak % 96,2ko purutasuna zuen (3. irudian ikusten den bezala) HPLC analisiaren bidez.Emaitzek adierazi zuten araztutako produktua hurrengo urratseko ikerketa eta garapenean gehiago erabil zitekeela.
2. Irudia. Laginaren flash-kromatograma C18AQ kartutxo batean.
3. Irudia. Helburu-produktuaren HPLC kromatograma.
Ondorioz, SepaFlash C18AQ RP flash kartutxoak SepaBean™ flash-kromatografia sistemarekin konbinatuta konponbide azkarra eta eraginkorra eskain dezake polartasun handiko laginak arazteko.
SepaFlash C18AQ RP flash kartutxoei buruz
Santai Technologyren zehaztapen desberdinak dituzten SepaFlash C18AQ RP flash kartutxoak daude (2. taulan agertzen den bezala).
| Elementu zenbakia | Zutabearen tamaina | Jario tasa (ml/min) | Max.Presioa (psi/barra) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
2. taula. SepaFlash C18AQ RP flash kartutxoak.Enbalatzeko materialak: eraginkortasun handiko C18 (AQ) loturiko silizea, 20 - 45 μm, 100 Å.
SepaBean™ makinaren zehaztapen zehatzei edo SepaFlash serieko flash kartutxoei buruzko informazio gehiago lortzeko, bisitatu gure webgunea.
Argitalpenaren ordua: 2018-10-26