Rui Huang, Bo Xu
Eskaera I + G zentroa
Sarrera
Peptido bat aminoazidoez osatutako konposatua da, eta bakoitzak propietate fisiko eta kimiko bereziak ditu bere sekuentzia osatzen duten aminoazidoen hondakinen mota eta orden desberdinengatik. Fase solidoaren sintesi kimikoaren garapenarekin batera, peptido aktiboen sintesi kimikoek aurrerapen handia egin dute. Hala ere, fase solidoaren sintesia lortutako peptidoaren konposizio konplikatuaren ondorioz, azken produktua bereizketa metodo fidagarriek arautu beharko lukete. Peptidoen ohiko arazketa metodoak ioia trukatzeko kromatografia (IEC) eta alderantzizkoa da. Teknologiak, zeinetan Sepaflash RP C18 kartutxoa erabili zen Thymopentin (TP-5) eta eskakizunak betetzeko xede produktuen arazketa lortzeko.
1. irudia. 20 aminoazido arrunt (www.bachem.com webgunetik erreproduzituak).
Peptidoen konposizioan ohikoak diren aminoazido mota daude. Aminoazido hauek honako talde hauetan banatu daitezke polaritatearen eta azido base propietatearen arabera: polar (hidrofoboa), polarra (kargatu gabea), azidoa edo oinarrizkoa (1. irudian erakusten den moduan). Sekuentzia peptido batean, sekuentzia sekuentzia osatzen duten aminoazidoak gehienetan poloak badira (1. irudian, zisteina, glutamina, zainzagina, serine, tropelak, tirosak eta abar bezalakoak dira. Peptido honek polaritate sendoa izan dezake eta uretan oso disolbagarria izan daiteke. Petaren peptido peptido indartsu horien arazketa prozeduran, fase hidrofobikoaren kolapsoa deitzen den fenomenoa gertatuko da (aurrez argitaratutako aplikazio oharra Santai Technologies-ek eginda: Fase hidrofoboen kolapsoa, AQ alderantzikatu gabeko fasearen kromatografia zutabeak eta haien aplikazioak. C18 zutabe arruntekin alderatuta, C18AQ zutabe hobetuak dira, lagin polar edo hidrofiliko sendoak arazteko. Post honetan, peptido polar sendoa lagin gisa erabili zen eta C18AQ zutabe batek arautu zuen. Ondorioz, xede produktuen baldintzak betetzea lortu zen eta hurrengo ikerketa eta garapenean erabil liteke.
| Tresna | EsagaitzMeMakina 2 | |||
| Kartutxoak | 12 g Sepaflash C18 RP Flash kartutxoa (silizea esferikoa, 20 - 45 μm, 100 Å, ordenatu nunber: sw-5222-012-sp) | 12 g Sepaflash C18AQ RP Flash kartutxoa (silizea esferikoa, 20 - 45 μm, 100 Å, Agindu zenbakia: SW-5222-012-sp (AQ)) | ||
| Uhin-luzera | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Fase mugikorra | Disolbatzailea A: ura Disolbatzailea B: Acetonitrile | |||
| Fluxu-tasa | 15 ml / min | 20 ml / min | ||
| Lagina Kargatzen | 30 mg | |||
| Pribatu | Ordua (CV) | Disolbatzailea b (%) | Ordua (min) | Disolbatzailea b (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10,0 | 6 | 7,9 | 18 | |
| 12,5 | 6 | 13,0 | 18 | |
| 16,5 | 10 | 14,0 | 22 | |
| 19,0 | 41 | 15,5 | 22 | |
| 21,0 | 41 | 18,0 | 38 | |
| / | / | 20,0 | 38 | |
| 22,0 | 87 | |||
| 29,0 | 87 | |||
Emaitzak eta Eztabaida
C18 zutabe eta C18AQ zutabe arruntaren arteko peptido polarraren laginaren arazketa errendimendua alderatuz, C18 zutabe arrunt bat erabili genuen laginaren flash arazketa abiapuntu gisa. 2. irudian erakusten den moduan, fase hidrofobikoaren arabera, C18 ratio altuko kateen kolapsoaren ondorioz, lagina apenas mantendu zen C18 kartutxo arruntean eta zuzenean fase mugikorrak zuzendu zuen. Ondorioz, lagina ez zen modu eraginkorrean bereizi eta araztu.
2. irudia. Laginaren flash kromomograma C18 kartutxo arrunt batean.
Ondoren, C18AQ zutabea erabili genuen laginaren flash arazketarako. 3. irudian erakusten den moduan, peptidoa zutabean mantendu zen eta gero kanpora atera zen. Xede produktua lagin gordinaren ezpurutasunetatik bereizten zen eta bildu da. Liofilizazioaren ondoren eta ondoren HPLC-k aztertu ondoren, produktu araztuak% 98,2ko garbitasuna du eta hurrengo urratsean ikerketa eta garapenerako erabil liteke.
3. irudia. C18AQ kartutxo batean laginaren flash kromatraketa.
Ondorioz, sepaflash c18aq rp flash kartutxoa flash kromatografia sistemarekin konbinatuta SepabeanMemakinak soluzio azkarra eta eraginkorra eskain dezake lagin polar edo hidrofiliko sendoak arazteko.
SPAFLASH C18AQ RP flash kartutxo batzuk daude Santai teknologiatik zehaztapen desberdinak dituztenak (2. taulan erakusten den moduan).
| Elementuaren zenbakia | Zutabeen tamaina | Fluxu-tasa (ml / min) | Max.pressure (PSI / Taberna) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 | 5-15 | 400 / 27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400 / 27,5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400 / 27,5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400 / 27,5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250 / 17.2 |
2. taula. Sepaflash C18AQ RP flash kartutxoak. Enbalatzeko materialak: Eraginkortasun handiko C18 (AQ) - silizea, 20 - 45 μm, 100 å.
Sepabean ™ makinaren zehaztapen zehatzak egiteko edo SEPAFLASH serieko flash kartutxoei buruzko informazio gehiago lortzeko, bisitatu gure webgunea.
Posta: 2018ko urriaren 12a