Hongcheng Wang, Bo Xu
Eskaera I + G zentroa
Sarrera
Fase geldoaren eta fase mugikorraren polaritate erlatiboen arabera, likido kromatografia faseko kromatografian (NPC) eta alderantzizko fasearen kromatografia (RPC) bana daiteke. RPCrako, fase mugikorraren polaritatea fase geldirik baino indartsuagoa da. RPC likidoen bereizketa moduetan gehien erabiltzen da, eraginkortasun handia, ebazpen ona eta atxikipen mekanismo garbia direla eta. Hori dela eta, RPC-k hainbat konposatu polarrak, karbohidratoak, esteroideak, esteroideak, esteroideak, aminoazidoak, peptidoak, proteinak eta abar garbitzeko egokia da, gehien erabiltzen den fasea da. Fenil, cyano, amino eta abar talde funtzional horien artean, gehien erabiltzen dena C18 da. Kalkulatzen da RPCren% 80 baino gehiago C18 lotura fasea erabiltzen ari direla. Beraz, C18 Kromatografia Zutabea laborategi guztientzako zutabe unibertsala izan behar da.
C18 zutabea aplikazio sorta oso zabalean erabil daiteke, hala ere, oso polar edo oso hidrofilikoak diren laginetarako, C18 zutabe arruntak arazoak izan ditzakete horrelako laginak arazteko erabiltzen direnean. RPCn, normalean erabilitako eluzio disolbatzaileak bere polaritatearen arabera eska daitezke: ura <metanola <cetonitrile <etanol <etanol <tetrahydrofuran <isopropanol. Lagin horietarako zutabean atxikipen ona ziurtatzeko (polar handi edo hidrofiliko sendoa), sistema akusosoaren proportzio handia beharrezkoa da fase mugikor gisa erabiltzeko. Hala ere, ur-sistema hutsa (ur purua edo gatz irtenbide hutsa erabiltzerakoan), C18 zutabearen fase geldoaren gaineko karbono-kate luzea ura saihestu eta bata bestearekin nahastu ohi da, zutabearen atxikipen-ahalmena edo atxikipen-ahalmenean berehalako jaitsiera izan ohi da. Fenomeno honek "fase hidrofobiko kolapsoa" deitzen zaio (1. irudian ezkerreko aldean erakusten den moduan). Egoera hori itzulgarria izan arren, zutabea metanol edo acetonitrile bezalako disolbatzaile organikoekin garbitzen denean, oraindik zutabean kalteak sor ditzake. Hori dela eta, beharrezkoa da egoera hori gertatzea eragoztea.
1. irudia. Silizea gelaren gainazalean loturiko faseen eskema C18 zutabean (ezkerrean) eta C18AQ zutabea (eskuinean).
Arestian aipatutako arazoei aurre egiteko, ontziratze material kromatografikoek hobekuntza teknikoak egin dituzte. Hobekuntza horietako bat silizea matrizearen gainazalean aldaketa batzuk egiten ari da, esate baterako, ziano-talde hidrofilikoen sartzea (1. irudiaren eskuinaldean agertzen den moduan), silizea gelaren hidrofilikoagoa izan dadin. Horrela, Silizea gainazaleko C18 kateak oso erabilgarriak izan litezke baldintza paregabeetan eta fase hidrofobikoen kolapsoak saihestu litezke. Aldatutako C18 zutabe hauek C18 zutabe akuosoak dira, hots, C18aq zutabeak, eluzio baldintza oso paregabeetarako diseinatuta daude eta% 100eko sistema urriaren toleratzea. C18AQ zutabeak oso aplikatu dira konposatu polar indartsuak, azido organikoak, peptidoak, nukleoak eta ura disolbagarriak diren bitaminak.
Desorting C18AQ zutabeen aplikazio tipikoetako bat da laginen flash arazketan, gatza edo buffer osagaiak laginaren disolbatzailearen laginean kentzen dituena, lagina ondorengo ikerketetan aplikatzea errazteko. Post honetan, polaritate sendoa duen FCF urdin distiratsua lagin gisa erabili zen eta C18AQ zutabean garbitu zen. Disolbatzaile lagina disolbatzaile organikoaren bidez ordezkatu zen bufferraren soluzioaren bidez, eta, beraz, honako lurrunketa birakaria errazten da, baita disolbatzaile eta funtzionamendu denbora aurreztuz ere. Gainera, laginaren garbitasuna hobetu zen laginean ezpurutasun batzuk kenduz.
Atal esperimentala
2. irudia. Laginaren egitura kimikoa.
FCF urdin distiratsua lagin gisa erabili zen mezu honetan. Lagin gordinaren garbitasuna% 86koa zen eta laginaren egitura kimikoa erakutsi zen 2. irudian. Laginaren konponbidea injektore baten bidez flash zutabean injektatu zen. Flash arazketaren konfigurazio esperimentala 1. taulan agertzen da.
| Tresna | Sepabean ™ makina2 | |||
| Kartutxoak | 12 g Sepaflash C18 RP Flash kartutxoa (silizea esferikoa, 20 - 45 μm, 100 Å, Agindu zenbakia: SW-5222-012-sp) | 12 g Sepaflash C18AQ RP Flash kartutxoa (silizea esferikoa, 20 - 45 μm, 100 Å, Agindu zenbakia: SW-5222-012-sp (AQ)Diagnesuka | ||
| Uhin-luzera | 254 nm | |||
| Fase mugikorra | Disolbatzailea A: ura Disolbatzailea B: Metanola | |||
| Fluxu-tasa | 30 ml / min | |||
| Lagina Kargatzen | 300 mg (FCF urdin distiratsua% 86ko garbitasunarekin) | |||
| Pribatu | Ordua (CV) | Disolbatzailea b (%) | Ordua (CV) | Disolbatzailea b (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17,5 | 100 | 17,5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22,6 | 10 | 22,6 | 0 | |
Emaitzak eta Eztabaida
Sepaflash C18AQ RP Flash kartutxoa erabiltzeko laginak eta arazketa egiteko erabili zen. Urrats gradientea erabili zen ur purua fase mugikor gisa erabiltzen zen elauste hasieran eta 10 zutabe bolumen (CV) exekutatzen da. 3. irudian erakusten den bezala, ur purua fase mugikor gisa erabiltzen denean, lagina Flash kartutxoan erabat mantendu zen. Ondoren, fase mugikorreko metanola% 100era igo zen eta gradientea 7,5 cv-rentzat mantendu zen. Lagina 11,5 eta 13,5 cv bitartekoa zen. Bildutako zatikietan, laginaren konponbidea Nah2po4 bufferraren konponbidetik methanolera aldatu zen. Irtenbide paregabearekin alderatzea, metanola askoz errazagoa zen ondorengo urratsean lurruntze birakaria kentzea, eta horrek ikerketa hau errazten du.
3. irudia. C18AQ kartutxo batean laginaren flash kromatraketa.
C18AQ kartutxoaren eta C18 kartutxoaren atxikipen portaera alderatuz, polaritate sendoaren laginetarako, paraleloko konparazio proba egin zen. Sepaflash C18 RP Flash kartutxoa erabili zen eta laginaren flash kromatograma 4. irudian erakutsi zen. C18 kartutxo erregularrentzat, toleratuen faseko erlazio altuena% 90 ingurukoa da. Hori dela eta, hasiberritako gradientea% 10eko metanolean ezarri zen% 90eko uretan. 4. irudian erakusten den moduan, C18 kateak erlazio altuko C18 kateen kolapsoaren ondorioz, lagina apenas mantendu zen C18 kartutxo arruntean eta zuzenean sakelako faseak zuzendu zuen. Ondorioz, laginak desaltatzeko edo arazteko funtzionamendua ezin da burutu.
4. irudia. Laginaren flash kromograma C18 kartutxo arrunt batean.
Gradiente linealarekin alderatuta, urrats gradientearen erabilera abantaila hauek ditu:
1. Disolbatzailearen erabilera eta laginaren arazketa egiteko denbora murrizten da.
2. Xede produktuen xede-produktuak gailur zorrotz batean daude, eta horrek bildutako zatikien bolumena murrizten du eta, beraz, honako lurrunketa birakaria errazten du eta denbora aurreztea errazten du.
3. Bildutako produktua metanoletan lurruntzen erraza da eta, beraz, lehortzeko denbora murrizten da.
Amaitzeko, lagina polar edo oso hidrofilikoa da, sepaflash C18AQ RP Flash kartutxoak Flash kromatografia sistemarekin konbinatzen direnak Sepabean ™ makinak konponbide azkarra eta eraginkorra eskain diezaieke.
Sepaflash Lotutako serieari buruz C18 RP Flash kartutxoak
SPAFLASH C18AQ RP flash kartutxo batzuk daude Santai teknologiatik zehaztapen desberdinak dituztenak (2. taulan erakusten den moduan).
| Elementuaren zenbakia | Zutabeen tamaina | Fluxu-tasa (ml / min) | Max.pressure (PSI / Taberna) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 | 5-15 | 400 / 27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400 / 27,5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400 / 27,5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400 / 27,5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250 / 17.2 |
2. taula. Sepaflash C18AQ RP flash kartutxoak.
Enbalatzeko materialak: Eraginkortasun handiko C18 (AQ) - silizea, 20 - 45 μm, 100 å.
logia (2. taulan erakusten den moduan).
Ordua: 2018ko abuztuaren 27a