Rui Huang, Bo Xu
Rakenduse teadus- ja arendustegevuse keskus
Sissejuhatus
Ioonvahetuse kromatograafia (IEC) on kromatograafiline meetod, mida tavaliselt kasutatakse ioonvormis lahuses esitatud ühendite eraldamiseks ja puhastamiseks. Vahetatavate ioonide erinevate laadimisseisundite kohaselt võib IEC jagada kahte tüüpi: katioonvahetuse kromatograafia ja anioonvahetuse kromatograafia. Katioonivahetuse kromatograafias ühendatakse happelised rühmad eraldamise söötme pinnaga. Näiteks on sulfoonhape (-SO3H) tavaliselt kasutatav rühm tugevas katioonivahetuses (SCX), mis dissotsieerub H+ ja negatiivselt laetud rühm -SO3- seega võib see seega adsorbeerida lahuses olevaid teisi katioone. Anioonvahetuskromatograafias ühendatakse aluselised rühmad eraldussöötme pinnaga. Näiteks kvaternaarset amiini (-NR3OH, kus R on süsivesinike rühm) kasutatakse tavaliselt tugevas anioonvahetuses (SAX), mis dissotsieerub OH- ja positiivselt laetud rühm -N+R3 suudab adsorbeerida teisi anioone, mille tulemuseks on anioonvahetuse mõju.
Looduslike toodete hulgas on flavonoidid pälvinud teadlaste tähelepanu tänu nende rollile kardiovaskulaarsete haiguste ennetamisel ja ravis. Kuna flavonoidsed molekulid on fenoolsete hüdroksüülrühmade olemasolu tõttu happelised, on ioonvahetuskromatograafia lisaks tavalisele normaalfaasile või ümberpööratud faasikromatograafiale ka nende happeliste ühendite eraldamiseks ja puhastamiseks. Flash -kromatograafias on ioonivahetuse jaoks tavaliselt kasutatav eraldusvahend ränidioksiidi geeli maatriks, kus ioonvahetusrühmad on ühendatud selle pinnaga. Kõige sagedamini kasutatavad ioonvahetusrežiimid Flash -kromatograafias on SCX (tavaliselt sulfoonhappe rühm) ja SAX (tavaliselt kvaternaarne amiinirühm). Varem avaldatud rakenduses märkuses pealkirjaga “Sepaflash tugeva katioonvahetuse kromatograafia kolonnide rakendamine aluseliste ühendite puhastamisel” Santai Technologies abil kasutati aluseliste ühendite puhastamiseks SCX -kolonge. Selles postituses kasutati proovina segu neutraalsete ja happeliste standardite segu, et uurida saksikolonnide kasutamist happeliste ühendite puhastamisel.
Eksperimentaalne osa
Joonis 1. Statsionaarse faasi skemaatiline diagramm ühendatud saksi eraldamise söötme pinnaga.
Selles postituses kasutati kvaternaarse amiiniga ühendatud ränidioksiidiga eelnevat saksist kolonni (nagu näidatud joonisel 1). Puhastava proovina kasutati kromoni ja 2,4-dihüdroksübensoehappe segu (nagu näidatud joonisel 2). Segu lahustati metanoolis ja laaditi injektori abil välkikassetile. Välituspuhastuse eksperimentaalne seadistus on loetletud tabelis 1.
Joonis 2. Kahe komponendi keemiline struktuur proovisegus.
| Instrument | Sepabean ™ masin T | |||||
| Padrunid | 4 g Sepaflashi standardseeria välk kassett (ebaregulaarne ränidioksiid, 40–63 μm, 60 Å, tellimisnumber: S-5101-0004) | 4 g sepaflash-seeria saksivälkikassetti (ebaregulaarne ränidioksiid, 40-63 μm, 60 Å, tellimisnumber ： SW-5001-004-IR) | ||||
| Lainepikkus | 254 nm (tuvastamine), 280 nm (seire) | |||||
| Mobiilne etapp | Lahusti a: n-heksaan | |||||
| Lahusti B: etüülatsetaat | ||||||
| Voolukiirus | 30 ml/min | 20 ml/min | ||||
| Proovi laadimine | 20 mg (komponendi A ja komponendi B segu) | |||||
| Gradient | Aeg (CV) | Lahusti B (%) | Aeg (CV) | Lahusti B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1,7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Tulemused ja arutelu
Esiteks eraldati proovisegu tavalise faasiga välklambi abil, mis oli ette pakitud tavalise ränidioksiidiga. Nagu joonisel 3 näidatud, elueeriti proovis olevad kaks komponenti kassetist üksteise järel. Järgmisena kasutati proovi puhastamiseks saksi välk kassetti. Nagu näidatud joonisel 4, säilitati happeline komponent B täielikult saksikassetil. Neutraalne komponent A elueeriti järk -järgult kassetist koos liikuva faasi elueerimisega.
Joonis 3. Proovi välklambi kromatogramm regulaarsel normaalfaasi kassetil.
Joonis 4. Proovi välklambi kromatogramm saksa kassetil.
Võrreldes joonist 3 ja 4, on komponendil A kahel erineval välklambil ebajärjekindel tipukuju. Et kinnitada, kas elueerimise tipp vastab komponendile, saame kasutada täielikku lainepikkuse skannimisfunktsiooni, mis on sisseehitatud Sepabean ™ masina juhtimistarkvarasse. Avage kahe eraldamise eksperimentaalsed andmed, lohistage kromatogrammi ajatelje (CV) indikaatori joonele kõrgeimasse ja kõrgeimasse punkti kõrgeimasse punkti, mis vastab komponendile A -le, ja nende kahe punkti täislainepikkuse spektrit näidatakse automaatselt kromatogrammi all (nagu näidatud joonisel 5 ja joonis 6). Võrreldes nende kahe eraldumise täislainepikkuse spektri andmeid, on komponendil A kahes katses ühtlane neeldumisspektrit. Komponendi A põhjusel on kahel erineval välkpunktil ebajärjekindel tipptase, spekuleeritakse, et komponendis A -s on spetsiifiline lisand, millel on tavalise faasi kasseti ja saksi kasseti erinev säilitamine. Seetõttu on elutinev jada komponendi A puhul erinev ja nende kahe välkpunkti lisamine, mille tulemuseks on kromatogrammide ebajärjekindel piigi kuju.
Joonis 5. Komponendi A täislainepikkuse spekter ja normaalse faasi kassetiga eraldatud lisand.
Joonis 6. Komponendi A täislainepikkuse spekter ja saksi kassetiga eraldatud lisand.
Kui kogutav sihtprodukt on neutraalne komponent A, saab puhastusülesande hõlpsalt täita, kasutades otse saksi kasseti elueerimiseks pärast proovi laadimist. Teisest küljest, kui kogutav sihtprodukt on happeline komponent B, võiks hõivamisviisi kasutada eksperimentaalsetes etappides ainult kerge reguleerimisega: kui proov laaditi saksi kassetile ja neutraalne komponent A oli täielikult elustatud normaalse faasiga orgaaniliste lahustitega, lülitage mobiilne etapp 5% -line aines sisaldav 5% -line aine. Atsetaadiioonid liikuvas faasis konkureerivad komponendiga B, et seonduda kvaternaarse amiiniioonide rühmadega saksikas kasseti statsionaarses faasis, mis on seeläbi komponendi B kassetist B sihtarvise saamiseks. Ioonvahetusrežiimis eraldatud proovi kromatogramm oli näidatud joonisel 7.
Joonis 7. Komponendi B välklambi kromatogramm elustati ioonvahetusrežiimis saksikas kassetil.
Kokkuvõtteks võib öelda, et happelist või neutraalset proovi saab kiiresti puhastada saksi kasseti abil koos normaalse faasi kassetiga, kasutades erinevaid puhastusstrateegiaid. Lisaks saab Sepabean ™ masina juhtimistarkvarasse sisseehitatud täislainepikkuse skaneerimise funktsiooni abil hõlpsasti võrrelda ja kinnitada elueeritud fraktsioonide iseloomulikku neeldumisspektrit, aidates teadlastel kiiresti kindlaks teha elustatud fraktsioonide koostise ja puhtuse ning parandades sellega töötõhusust.
| Üksuse number | Veerusuurus | Voolukiirus (ml/min) | Maksimaalne rõhk (PSI/BAR) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
Tabel 2. Sepaflashiga ühendatud seeria saksi välk padrunid. Pakkematerjalid: ülimahuline ebaregulaarne saksaga seotud ränidioksiid, 40–63 μm, 60 Å.
Lisateavet Sepabean ™ üksikasjalike spetsifikatsioonide kohtaMasin või Sepaflash Series Flashikassettide tellimise teave külastage meie veebisaiti.
Postiaeg: november-09.-2018