La aplicación de las columnas de cromatografía de intercambio aniónico fuerte SepaFlash en la purificación de compuestos ácidos

Resultados y discusión

En primer lugar, la mezcla de muestra se separó mediante un cartucho flash de fase normal preenvasado con sílice regular.Como se muestra en la Figura 3, los dos componentes de la muestra se eluyeron del cartucho uno tras otro.A continuación, se utilizó un cartucho flash SAX para la purificación de la muestra.Como se muestra en la Figura 4, el componente ácido B quedó completamente retenido en el cartucho SAX.El Componente A neutro se eluyó gradualmente del cartucho con la elución de la fase móvil.

Figura 3. El cromatograma flash de la muestra en un cartucho de fase normal normal.

Figura 4. El cromatograma flash de la muestra en un cartucho SAX.
Comparando la Figura 3 y la Figura 4, el Componente A tiene una forma de pico inconsistente en los dos cartuchos flash diferentes.Para confirmar si el pico de elución corresponde al componente, podemos utilizar la función de escaneo de longitud de onda completa que está integrada en el software de control de la máquina SepaBean™.Abra los datos experimentales de las dos separaciones, arrastre hasta la línea indicadora en el eje de tiempo (CV) en el cromatograma hasta el punto más alto y el segundo punto más alto del pico de elución correspondiente al Componente A, y el espectro de longitud de onda completo de estos dos. Los puntos se mostrarán automáticamente debajo del cromatograma (como se muestra en la Figura 5 y la Figura 6).Al comparar los datos del espectro de longitud de onda completo de estas dos separaciones, el Componente A tiene un espectro de absorción consistente en dos experimentos.Debido a que el Componente A tiene una forma de pico inconsistente en dos cartuchos flash diferentes, se especula que hay una impureza específica en el Componente A que tiene una retención diferente en el cartucho de fase normal y en el cartucho SAX.Por lo tanto, la secuencia de elución es diferente para el Componente A y la impureza en estos dos cartuchos flash, lo que da como resultado una forma de pico inconsistente en los cromatogramas.

Figura 5. El espectro de longitud de onda completo del Componente A y la impureza separada por el cartucho de fase normal.

Figura 6. El espectro de longitud de onda completo del Componente A y la impureza separada por el cartucho SAX.

Si el producto objetivo que se va a recolectar es el Componente A neutro, la tarea de purificación se puede completar fácilmente usando directamente el cartucho SAX para la elución después de cargar la muestra.Por otro lado, si el producto objetivo a recolectar es el Componente B ácido, se podría adoptar la forma de captura-liberación con solo un ligero ajuste en los pasos experimentales: cuando la muestra se cargó en el cartucho SAX y el Componente A neutro se eluyó completamente con disolventes orgánicos de fase normal, se cambió la fase móvil a una solución de metanol que contenía ácido acético al 5%.Los iones de acetato en la fase móvil competirán con el Componente B por unirse a los grupos de iones de amina cuaternaria en la fase estacionaria del cartucho SAX, eluyendo así el Componente B del cartucho para obtener el producto objetivo.El cromatograma de la muestra separada en modo de intercambio iónico se muestra en la Figura 7.

Figura 7. El cromatograma flash del Componente B eluido en modo de intercambio iónico en un cartucho SAX.

En conclusión, una muestra ácida o neutra podría purificarse rápidamente mediante un cartucho SAX combinado con un cartucho de fase normal utilizando diferentes estrategias de purificación.Además, con la ayuda de la función de escaneo de longitud de onda completa integrada en el software de control de la máquina SepaBean™, el espectro de absorción característico de las fracciones eluidas se pudo comparar y confirmar fácilmente, lo que ayudó a los investigadores a determinar rápidamente la composición y pureza de las fracciones eluidas y, por lo tanto, mejoró trabaja eficientemente.