La aplicación de columnas C18AQ en la purificación de péptidos polares fuertes

Rui Huang, Bo Xu
Centro de I + D de la aplicación

Introducción
Un péptido es un compuesto compuesto de aminoácidos, cada uno de los cuales tiene propiedades físicas y químicas únicas debido a los diferentes tipos y el orden de los residuos de aminoácidos que constituyen su secuencia. Con el desarrollo de la síntesis química de fase sólida, la síntesis química de varios péptidos activos ha hecho un gran progreso. Sin embargo, debido a la composición complicada del péptido obtenido por síntesis de fase sólida, el producto final debe purificarse por métodos de separación confiables. Los métodos de purificación comúnmente utilizados para los péptidos incluyen la cromatografía de intercambio iónico (IEC) y la cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa (RP-HPLC), que tienen las desventajas de la capacidad de carga de muestra baja, el alto costo de los medios de separación, los equipos de separación complicados y costosos, etc. para la purificación rápida de los péptidos de moléculas pequeños (MW <1 KDA), un equipo de aplicación de la aplicación exitosa anteriormente. Se utilizó el cartucho SepaFlash RP C18 para la rápida purificación de timopentina (TP-5) y se obtuvo el producto objetivo que cumple con los requisitos.

Figura 1. 20 aminoácidos comunes (reproducidos de www.bachem.com).

Hay 20 tipos de aminoácidos que son comunes en la composición de los péptidos. Estos aminoácidos se pueden dividir en los siguientes grupos de acuerdo con su polaridad y propiedad ácida-base: no polar (hidrófobo), polar (sin carga), ácido o básico (como se muestra en la Figura 1). En una secuencia de péptidos, si los aminoácidos que constituyen la secuencia son en su mayoría polares (como marcados en color rosa en la Figura 1), como la cisteína, la glutamina, la asparagina, la serina, la treonina, la tirosina, etc. Entonces este péptido podría tener una polaridad fuerte y ser altamente soluble en el agua. Durante el procedimiento de purificación para estas muestras de péptidos polares fuertes mediante cromatografía en fase inversa, se producirá un fenómeno llamado colapso de fase hidrófoba (consulte una nota de aplicación previamente publicada por Santai Technologies: colapso de fase hidrofóbica, columnas de cromatografía de fase invertida AQ y sus aplicaciones). En comparación con las columnas C18 regulares, las columnas C18AQ mejoradas son más adecuadas para la purificación de muestras polares o hidrofílicas fuertes. En esta publicación, se utilizó un fuerte péptido polar como muestra y purificado por una columna C18AQ. Como resultado, se obtuvo el producto objetivo que cumple con los requisitos y podría usarse en la siguiente investigación y desarrollo.