Rui Huang, Bo Xu
Centro de I+D de aplicaciones
Introducción
Un péptido es un compuesto compuesto de aminoácidos, cada uno de los cuales tiene propiedades físicas y químicas únicas debido a los diferentes tipos y orden de los residuos de aminoácidos que constituyen su secuencia.Con el desarrollo de la síntesis química en fase sólida, la síntesis química de varios péptidos activos ha logrado grandes avances.Sin embargo, debido a la complicada composición del péptido obtenido mediante síntesis en fase sólida, el producto final debe purificarse mediante métodos de separación fiables.Los métodos de purificación comúnmente utilizados para péptidos incluyen la cromatografía de intercambio iónico (IEC) y la cromatografía líquida de alto rendimiento de fase reversa (RP-HPLC), que tienen las desventajas de una baja capacidad de carga de muestras, un alto costo de los medios de separación, equipos de separación complicados y costosos. etc. Para la purificación rápida de péptidos de molécula pequeña (PM < 1 kDa), Santai Technologies publicó previamente un caso de aplicación exitoso, en el que se utilizó un cartucho SepaFlash RP C18 para la purificación rápida de timopentina (TP-5) y el Se obtuvo el producto objetivo que cumplía los requisitos.
Figura 1. 20 aminoácidos comunes (reproducido de www.bachem.com).
Hay 20 tipos de aminoácidos que son comunes en la composición de los péptidos.Estos aminoácidos se pueden dividir en los siguientes grupos según su polaridad y propiedad ácido-base: no polares (hidrófobos), polares (sin carga), ácidos o básicos (como se muestra en la Figura 1).En una secuencia peptídica, si los aminoácidos que constituyen la secuencia son en su mayoría polares (como se marca en color rosa en la Figura 1), como cisteína, glutamina, asparagina, serina, treonina, tirosina, etc., entonces este péptido podría tener una fuerte polaridad y ser altamente soluble en agua.Durante el procedimiento de purificación de estas muestras de péptidos polares fuertes mediante cromatografía de fase inversa, se producirá un fenómeno llamado colapso de fase hidrofóbica (consulte una nota de aplicación publicada anteriormente por Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns and Their Applications).En comparación con las columnas C18 normales, las columnas C18AQ mejoradas son las más adecuadas para la purificación de muestras fuertemente polares o hidrófilas.En esta publicación, se utilizó un péptido polar fuerte como muestra y se purificó mediante una columna C18AQ.Como resultado, se obtuvo el producto objetivo que cumplía con los requisitos y podría usarse en la siguiente investigación y desarrollo.
| Instrumento | SepaBean™maquina 2 | |||
| Cartuchos | Cartucho flash SepaFlash C18 RP de 12 g (sílice esférica, 20 - 45 μm, 100 Å, número de pedido: SW-5222-012-SP) | Cartucho flash SepaFlash C18AQ RP de 12 g (sílice esférica, 20 - 45 μm, 100 Å, número de pedido: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Longitud de onda | 254 nm, 220 nm | 214 millas náuticas | ||
| Fase móvil | Disolvente A: Agua Disolvente B: Acetonitrilo | |||
| Tasa de flujo | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Carga de muestra | 30 mg | |||
| Degradado | Tiempo (CV) | Disolvente B (%) | Tiempo (minutos) | Disolvente B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Resultados y discusión
Para comparar el rendimiento de la purificación de la muestra de péptido polar entre la columna C18 normal y la columna C18AQ, utilizamos una columna C18 normal para la purificación instantánea de la muestra como punto de partida.Como se muestra en la Figura 2, debido al colapso de la fase hidrófoba de las cadenas C18 causado por una alta proporción acuosa, la muestra apenas quedó retenida en el cartucho C18 normal y la fase móvil eluyó directamente.Como resultado, la muestra no se separó ni purificó eficazmente.
Figura 2. El cromatograma flash de la muestra en un cartucho C18 normal.
A continuación, utilizamos una columna C18AQ para la purificación instantánea de la muestra.Como se muestra en la Figura 3, el péptido se retuvo eficazmente en la columna y luego se eluyó.El producto objetivo se separó de las impurezas de la muestra cruda y se recogió.Después de la liofilización y luego analizado por HPLC, el producto purificado tiene una pureza del 98,2 % y podría utilizarse aún más para el siguiente paso de investigación y desarrollo.
Figura 3. El cromatograma flash de la muestra en un cartucho C18AQ.
En conclusión, el cartucho flash SepaFlash C18AQ RP combinado con el sistema de cromatografía flash SepaBean™La máquina podría ofrecer una solución rápida y eficaz para la purificación de muestras polares o hidrofílicas fuertes.
Hay una serie de cartuchos flash SepaFlash C18AQ RP con diferentes especificaciones de Santai Technology (como se muestra en la Tabla 2).
| Número de artículo | Tamaño de columna | Tasa de flujo (ml/min) | Presión máxima (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 gramos | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 gramos | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 gramos | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 gramos | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 gramos | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 gramos | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 gramos | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 gramos | 40-80 | 250/17,2 |
Tabla 2. Cartuchos flash SepaFlash C18AQ RP.Materiales de embalaje: Sílice unida C18(AQ) esférica de alta eficiencia, 20 - 45 μm, 100 Å.
Para obtener más información sobre las especificaciones detalladas de la máquina SepaBean™ o la información para realizar pedidos de cartuchos flash de la serie SepaFlash, visite nuestro sitio web.
Hora de publicación: 12-oct-2018