Rui Huang, Bo Xu
Aplika R&D-Centro
Enkonduko
Joninterŝanĝa kromatografio (IEC) estas kromatografia metodo ofte uzita por apartigi kaj purigi la kunmetaĵojn kiuj estas prezentitaj en jona formo en solvaĵo.Laŭ la malsamaj ŝargaj statoj de interŝanĝeblaj jonoj, IEC povas esti dividita en du tipojn, katjonan kromatografion kaj anjonan interŝanĝan kromatografion.En katjona interŝanĝkromatografio, acidaj grupoj estas ligitaj al la surfaco de la apartigmedio.Ekzemple, sulfona acido (-SO3H) estas ofte uzata grupo en forta katjoninterŝanĝo (SCX), kiu disigas H+ kaj la negative ŝargita grupo -SO3- povas tiel adsorbi aliajn katjonojn en la solvaĵo.En anjoninterŝanĝa kromatografio, alkalaj grupoj estas ligitaj al la surfaco de la apartigmedio.Ekzemple, kvaternara amino (-NR3OH, kie R estas hidrokarbidgrupo) estas kutime uzita en forta anjoninterŝanĝo (SAX), kiu disigas OH- kaj la pozitive ŝargita grupo -N+R3 povas adsorbi aliajn anjonojn en la solvaĵo, rezultigante anjonon. interŝanĝa efiko.
Inter naturaj produktoj, flavonoidoj altiris la atenton de esploristoj pro sia rolo en la antaŭzorgo kaj kuracado de kardiovaskulaj malsanoj.Ĉar la flavonoidaj molekuloj estas acidaj pro la ĉeesto de fenolaj hidroksilgrupoj, jona interŝanĝo kromatografio estas alternativa opcio aldone al konvencia normala fazo aŭ inversa faza kromatografio por la apartigo kaj purigo de tiuj acidaj kunmetaĵoj.En fulmkromatografio, la ofte uzita apartigmedio por joninterŝanĝo estas silika ĝela matrico kie joninterŝanĝgrupoj estas ligitaj al ĝia surfaco.La plej ofte uzataj interŝanĝaj reĝimoj en fulmkromatografio estas SĈ (kutime sulfonacida grupo) kaj SAX (kutime kvaternara amingrupo).En la antaŭe eldonita aplikaĵa noto kun la titolo "La Apliko de SepaFlash Fortaj Katioŝanĝaj Kromatografio-Kolumnoj en la Purigo de Alkalaj Kunmetaĵoj" de Santai Technologies, SCX-kolumnoj estis utiligitaj por la purigo de alkalaj kunmetaĵoj.En ĉi tiu afiŝo, miksaĵo de neŭtralaj kaj acidaj normoj estis uzata kiel specimeno por esplori la aplikon de SAX-kolumnoj en la purigado de acidaj komponaĵoj.
Eksperimenta Sekcio
Figuro 1. La skema diagramo de la senmova fazo ligita al la surfaco de SAX-apartiga amaskomunikilaro.
En ĉi tiu afiŝo, SAX-kolumno antaŭplenigita kun kvaternara amina ligita silicoksido estis uzata (kiel montrite en Figuro 1).Miksaĵo de Chromone kaj 2,4-dihidroksibenzoika acido estis uzata kiel la specimeno por purigi (kiel montrite en Figuro 2).La miksaĵo estis dissolvita en metanolo kaj ŝarĝita sur la fulmkartoĉon per injekciilo.La eksperimenta aranĝo de la fulmpurigo estas listigita en la Tabelo 1.
Figuro 2. La kemia strukturo de la du komponantoj en la specimena miksaĵo.
| Instrumento | SepaBean™-maŝino T | |||||
| Kartoĉoj | 4 g SepaFlash Standard Series fulmkartoĉo (neregula silicoksido, 40 - 63 μm, 60 Å, Ordonumero: S-5101-0004) | 4 g SepaFlash Bonded Series SAX-fulmkartoĉo (neregula silicoksido, 40 - 63 μm, 60 Å, mendonumero: SW-5001-004-IR) | ||||
| Ondolongo | 254 Nm (detekto), 280 Nm (monitorado) | |||||
| Movebla fazo | Solvento A: N-heksano | |||||
| Solvento B: Etilacetato | ||||||
| Flukvanto | 30 ml/min | 20 ml/min | ||||
| Ekzempla ŝarĝo | 20 mg (miksaĵo de Komponanto A kaj Komponanto B) | |||||
| Gradiento | Tempo (CV) | Solvento B (%) | Tempo (CV) | Solvento B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Rezultoj kaj diskuto
Unue, la specimena miksaĵo estis apartigita per normala faza fulmkartoĉo antaŭplenigita kun regula silicoksido.Kiel montrite en Figuro 3, la du komponentoj en la provaĵo estis eluitaj de la kartoĉo unu post la alia.Poste, SAX-fulmkartoĉo estis utiligita por la purigo de la provaĵo.Kiel montrite en Figuro 4, la acida Komponanto B estis tute retenita sur la SAX-kartoĉo.La neŭtrala Komponanto A estis iom post iom eluita de la kartoĉo kun la eluo de la mova fazo.
Figuro 3. La fulm-kromatogramo de la provaĵo sur regula normalfaza kartoĉo.
Figuro 4. La fulm-kromatogramo de la specimeno sur SAX-kartoĉo.
Komparante Figuro 3 kaj Figuro 4, la Komponanto A havas malkonsekvencan pintformon sur la du malsamaj fulmaj kartoĉoj.Por konfirmi ĉu la ellavpinto respondas al la komponento, ni povas uzi la plenan ondolongan skanadon, kiu estas enkonstruita en la kontrolprogramaro de SepaBean™-maŝino.Malfermu la eksperimentajn datumojn de la du disiĝoj, trenu al indikila linio sur la tempoakso (CV) en la kromatogramo al la plej alta punkto kaj la dua plej alta punkto de la elucia pinto responda al la Komponanto A, kaj la plena ondolonga spektro de ĉi tiuj du. punktoj estos aŭtomate montritaj sub la kromatogramo (kiel montrite en Figuro 5 kaj Figuro 6).Komparante la plenajn ondolongajn spektrodatenojn de ĉi tiuj du apartigoj, la Komponanto A havas konsekvencan sorban spektron en du eksperimentoj.Pro la kialo de la Komponanto A havas malkonsekvencan pintformon sur du malsamaj fulmkartoĉoj, estas konjektite ke ekzistas specifa malpureco en la Komponanto A kiu havas malsaman retenon sur la normalfaza kartoĉo kaj la SAX-kartoĉo.Tial, la eliĝa sekvenco estas malsama por la Komponanto A kaj la malpureco sur tiuj du fulmkartoĉoj, rezultigante malkonsekvencan pintformon sur la kromatogramoj.
Figuro 5. La plena ondolonga spektro de la Komponanto A kaj la malpureco apartigita per normala faza kartoĉo.
Figuro 6. La plena ondolonga spektro de la Komponanto A kaj la malpureco apartigita per SAX-kartoĉo.
Se la celata produkto por esti kolektita estas la neŭtrala Komponanto A, la puriga tasko povas facile esti kompletigita rekte uzante la SAX-kartoĉon por eluo post specimena ŝarĝo.Aliflanke, se la celprodukto por esti kolektita estas la acida Komponanto B, la kapt-liberiga maniero povus esti adoptita kun nur eta alĝustigo en la eksperimentaj paŝoj: kiam la provaĵo estis ŝarĝita sur la SAX-kartoĉo kaj la neŭtrala Komponanto A. estis tute eluzita per normala fazo organikaj solviloj, ŝanĝi la moveblan fazon al metanola solvo enhavanta 5% acetacidon.La acetatjonoj en la mova fazo konkuros kun la Komponanto B por ligado al la kvaternaraj aminaj jonoj sur la senmova fazo de SAX-kartoĉo, tiel eligante la Komponon B de la kartoĉo por akiri la celprodukton.La kromatogramo de la specimeno apartigita en interŝanĝa reĝimo estis montrita en Figuro 7.
Figuro 7. La fulm-kromatogramo de la Komponanto B eluita en interŝanĝa reĝimo sur SAX-kartoĉo.
En konkludo, acida aŭ neŭtrala specimeno povus esti rapide purigita per SAX-kartoĉo kombinita kun normalfaza kartoĉo utiligante malsamajn purigajn strategiojn.Krome, kun la helpo de plena ondolonga skanado enkonstruita en la kontrolprogramaro de SepaBean™-maŝino, la karakteriza sorbada spektro de la eluitaj frakcioj povus esti facile komparita kaj konfirmita, helpante al esploristoj rapide determini la konsiston kaj purecon de la eluitaj frakcioj kaj tiel plibonigante. laborefikeco.
| Item Nombro | Kolumna Grandeco | Fluo-Indico (ml/min) | Maksimuma.Premo (psi/trinkejo) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
Tablo 2. SepaFlash Bonded Series SAX fulmkartoĉoj.Pakaĵmaterialoj: Ultra-pura neregula SAX-ligita siliko, 40 - 63 μm, 60 Å.
Por pliaj informoj pri detalaj specifoj de SepaBean™maŝino, aŭ la mendan informon pri SepaFlash serio fulmkartoĉoj, bonvolu viziti nian retejon.
Afiŝtempo: Nov-09-2018