Η εφαρμογή των στηλών χρωματογραφίας ανταλλαγής ανιόντων SepaFlash Strong στον καθαρισμό όξινων ενώσεων

Αποτελέσματα και συζήτηση

Πρώτον, το μίγμα του δείγματος διαχωρίστηκε με ένα φυσίγγιο φλας κανονικής φάσης προσυσκευασμένο με κανονικό πυρίτιο.Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, τα δύο συστατικά στο δείγμα εκλούστηκαν από το φυσίγγιο το ένα μετά το άλλο.Στη συνέχεια, χρησιμοποιήθηκε ένα φυσίγγιο flash SAX για τον καθαρισμό του δείγματος.Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, το όξινο συστατικό Β διατηρήθηκε πλήρως στο φυσίγγιο SAX.Το ουδέτερο συστατικό Α εκλούστηκε σταδιακά από το φυσίγγιο με την έκλουση της κινητής φάσης.

Εικόνα 3. Το χρωματογράφημα flash του δείγματος σε φυσίγγιο κανονικής φάσης.

Εικόνα 4. Το χρωματογράφημα flash του δείγματος σε φυσίγγιο SAX.
Συγκρίνοντας το Σχήμα 3 και το Σχήμα 4, το στοιχείο Α έχει ασυνεπές σχήμα κορυφής στις δύο διαφορετικές κασέτες φλας.Για να επιβεβαιώσουμε εάν η κορυφή έκλουσης αντιστοιχεί στο εξάρτημα, μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε τη λειτουργία σάρωσης πλήρους μήκους κύματος που είναι ενσωματωμένη στο λογισμικό ελέγχου της μηχανής SepaBean™.Ανοίξτε τα πειραματικά δεδομένα των δύο διαχωρισμών, σύρετε στη γραμμή δείκτη στον άξονα χρόνου (CV) στο χρωματογράφημα στο υψηλότερο σημείο και στο δεύτερο υψηλότερο σημείο της κορυφής έκλουσης που αντιστοιχεί στο στοιχείο Α και το πλήρες φάσμα μήκους κύματος αυτών των δύο Τα σημεία θα εμφανίζονται αυτόματα κάτω από το χρωματογράφημα (όπως φαίνεται στο Σχήμα 5 και στο Σχήμα 6).Συγκρίνοντας τα δεδομένα πλήρους φάσματος μήκους κύματος αυτών των δύο διαχωρισμών, το συστατικό Α έχει σταθερό φάσμα απορρόφησης σε δύο πειράματα.Λόγω του ότι το Εξάρτημα Α έχει ασυνεπές σχήμα κορυφής σε δύο διαφορετικά φυσίγγια φλας, εικάζεται ότι υπάρχει ειδική ακαθαρσία στο Εξάρτημα Α που έχει διαφορετική συγκράτηση στο φυσίγγιο κανονικής φάσης και στο φυσίγγιο SAX.Επομένως, η αλληλουχία έκλουσης είναι διαφορετική για το συστατικό Α και την ακαθαρσία σε αυτά τα δύο φυσίγγια φλας, με αποτέλεσμα το ασυνεπές σχήμα κορυφής στα χρωματογραφήματα.

Εικόνα 5. Το πλήρες φάσμα μήκους κύματος του Συστατικού Α και η ακαθαρσία που διαχωρίζεται από φυσίγγιο κανονικής φάσης.

Εικόνα 6. Το πλήρες φάσμα μήκους κύματος του Συστατικού Α και η ακαθαρσία που διαχωρίζεται με φυσίγγιο SAX.

Εάν το προϊόν-στόχος που πρόκειται να συλλεχθεί είναι το ουδέτερο συστατικό Α, η εργασία καθαρισμού μπορεί εύκολα να ολοκληρωθεί με απευθείας χρήση του φυσιγγίου SAX για έκλουση μετά τη φόρτωση του δείγματος.Από την άλλη πλευρά, εάν το προϊόν στόχος που πρόκειται να συλλεχθεί είναι το όξινο συστατικό Β, ο τρόπος σύλληψης-απελευθέρωσης θα μπορούσε να υιοθετηθεί μόνο με μια μικρή προσαρμογή στα πειραματικά βήματα: όταν το δείγμα φορτώθηκε στο φυσίγγιο SAX και στο ουδέτερο συστατικό Α εκλούστηκε πλήρως με οργανικούς διαλύτες κανονικής φάσης, αλλάξτε την κινητή φάση σε διάλυμα μεθανόλης που περιέχει 5% οξικό οξύ.Τα οξικά ιόντα στην κινητή φάση θα ανταγωνίζονται το συστατικό Β για τη σύνδεση με τις ομάδες ιόντων τεταρτοταγούς αμίνης στη στατική φάση του φυσιγγίου SAX, εκλούοντας έτσι το συστατικό Β από το φυσίγγιο για να ληφθεί το προϊόν-στόχος.Το χρωματογράφημα του δείγματος που διαχωρίστηκε σε λειτουργία ανταλλαγής ιόντων φαίνεται στο Σχήμα 7.

Σχήμα 7. Το χρωματογράφημα flash του Συστατικού Β εκλούστηκε σε λειτουργία ανταλλαγής ιόντων σε φυσίγγιο SAX.

Συμπερασματικά, το όξινο ή ουδέτερο δείγμα θα μπορούσε να καθαριστεί γρήγορα με φυσίγγιο SAX σε συνδυασμό με φυσίγγιο κανονικής φάσης χρησιμοποιώντας διαφορετικές στρατηγικές καθαρισμού.Επιπλέον, με τη βοήθεια της δυνατότητας σάρωσης πλήρους μήκους κύματος που είναι ενσωματωμένη στο λογισμικό ελέγχου της μηχανής SepaBean™, το χαρακτηριστικό φάσμα απορρόφησης των εκλουόμενων κλασμάτων μπορούσε εύκολα να συγκριθεί και να επιβεβαιωθεί, βοηθώντας τους ερευνητές να προσδιορίσουν γρήγορα τη σύνθεση και την καθαρότητα των εκλουόμενων κλασμάτων και έτσι να βελτιώσουν αποδοτικότητα εργασίας.