Η εφαρμογή των στήλες χρωματογραφίας Exchange Exchange SepaFlash Strong Anion στον καθαρισμό όξινων ενώσεων

Αποτελέσματα και συζήτηση

Πρώτον, το μείγμα δείγματος διαχωρίστηκε με μια κανονική φλόγα φάσης προ-συσκευασμένο με κανονικό πυρίτιο. Όπως δείχνει στο σχήμα 3, τα δύο συστατικά του δείγματος εκλούστηκαν από το φυσίγγιο το ένα μετά το άλλο. Στη συνέχεια, χρησιμοποιήθηκε μια κασέτα flash sax για τον καθαρισμό του δείγματος. Όπως δείχνει στο Σχήμα 4, το όξινο συστατικό Β διατηρήθηκε πλήρως στο φυσίγγιο Sax. Το ουδέτερο συστατικό Α σταδιακά εκλούστηκε από το φυσίγγιο με την έκλουση της κινητής φάσης.

Εικόνα 3. Το χρωματογράφημα φλας του δείγματος σε κανονική φυσιολογική φυσιγγίου φάσης.

Εικόνα 4. Το χρωματογράφημα φλας του δείγματος σε ένα φυσίγγιο Sax.
Συγκρίνοντας το Σχήμα 3 και το Σχήμα 4, το συστατικό Α έχει ασυνεπές σχήμα αιχμής στα δύο διαφορετικά φυσίγγια flash. Για να επιβεβαιωθεί εάν η κορυφή έκλουσης αντιστοιχεί στο στοιχείο, μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε το πλήρες χαρακτηριστικό σάρωσης μήκους κύματος που είναι ενσωματωμένο στο λογισμικό ελέγχου της μηχανής Sepabean ™. Ανοίξτε τα πειραματικά δεδομένα των δύο διαχωρισμών, η οπισθέλκουσα στη γραμμή δείκτη στον άξονα χρόνου (CV) στο χρωματογράφημα στο υψηλότερο σημείο και το δεύτερο υψηλότερο σημείο της κορυφής έκλουσης που αντιστοιχεί στο συστατικό Α και το φάσμα πλήρους μήκους κύματος αυτών των δύο σημείων θα εμφανίζεται αυτόματα κάτω από το χρωματογράφημα (όπως φαίνεται στο σχήμα 5 και Εικόνα 6). Συγκρίνοντας τα δεδομένα φάσματος πλήρους μήκους κύματος αυτών των δύο διαχωρισμών, το συστατικό Α έχει σταθερό φάσμα απορρόφησης σε δύο πειράματα. Διότι το συστατικό Α έχει ασυνεπές σχήμα αιχμής σε δύο διαφορετικά φυσίγγια φλας, θεωρείται ότι υπάρχει συγκεκριμένη ακαθαρσία στο συστατικό Α, το οποίο έχει διαφορετική διατήρηση στο φυσιολογικό φυσίγγιο φάσης και το φυσίγγιο Sax. Ως εκ τούτου, η αλληλουχία εκλούσεως είναι διαφορετική για το συστατικό Α και την ακαθαρσία σε αυτά τα δύο φυσίγγια flash, με αποτέλεσμα το ασυνεπές σχήμα κορυφής στα χρωματογραφήματα.

Εικόνα 5. Το φάσμα πλήρους μήκους κύματος του συστατικού Α και η ακαθαρσία που διαχωρίζεται από την φυσιολογική κασέτα φάσης.

Εικόνα 6. Το φάσμα πλήρους μήκους κύματος του συστατικού Α και η ακαθαρσία που διαχωρίζεται από το φυσίγγιο sax.

Εάν το προϊόν στόχου που πρέπει να συλλεχθεί είναι το ουδέτερο συστατικό Α, η εργασία καθαρισμού μπορεί εύκολα να ολοκληρωθεί χρησιμοποιώντας άμεσα το φυσίγγιο Sax για έκλουση μετά τη φόρτωση δείγματος. Από την άλλη πλευρά, εάν το προϊόν στόχου που συλλέγεται είναι το όξινο συστατικό Β, ο τρόπος απελευθέρωσης σύλληψης θα μπορούσε να υιοθετηθεί με μόνο μια ελαφρά ρύθμιση στα πειραματικά βήματα: όταν το δείγμα φορτώθηκε στο φυσίγγιο Sax και το ουδέτερο συστατικό Α ήταν εντελώς εκλούστηκε με κανονικούς οργανικούς διαλύτες φάσης, μεταβιβάζοντας την κινητή φάση σε διάλυμα μεθανόλης που περιέχει 5% οξικό οξύ. Τα οξικά ιόντα στην κινητή φάση θα ανταγωνίζονται με το συστατικό Β για δέσμευση στις ομάδες τεταρτοταγών ιόντων αμίνης στη στατική φάση της κασέτας Sax, εκδίδοντας έτσι το συστατικό Β από το φυσίγγιο για να ληφθεί το προϊόν στόχου. Το χρωματογράφημα του δείγματος που χωρίστηκε σε λειτουργία ανταλλαγής ιόντων παρουσιάστηκε στο σχήμα 7.

Εικόνα 7. Το χρωματογράφημα φλας του συστατικού Β που εκτίθεται σε λειτουργία ανταλλαγής ιόντων σε κασέτα σαξής.

Συμπερασματικά, το όξινο ή το ουδέτερο δείγμα θα μπορούσε να καθαριστεί γρήγορα με κασέτα σαξοειδούς σε συνδυασμό με φυσιολογική κασέτα φάσης χρησιμοποιώντας διαφορετικές στρατηγικές καθαρισμού. Επιπλέον, με τη βοήθεια του χαρακτηριστικού σάρωσης πλήρους μήκους κύματος ενσωματωμένο στο λογισμικό ελέγχου της μηχανής Sepabean ™, το χαρακτηριστικό φάσμα απορρόφησης των εκλούσματος κλάσματα θα μπορούσε εύκολα να συγκριθεί και να επιβεβαιωθεί, βοηθώντας τους ερευνητές να καθορίσουν γρήγορα τη σύνθεση και την καθαρότητα των εκλούσματος κλάσματα και έτσι τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας της εργασίας.