Rui Huang, Bo Xu
Κέντρο Ε & Α της Εφαρμογής
Εισαγωγή
Ένα πεπτίδιο είναι μια ένωση που αποτελείται από αμινοξέα, καθένα από τα οποία έχει μοναδικές φυσικές και χημικές ιδιότητες λόγω των διαφορετικών τύπων και της τάξης των υπολειμμάτων αμινοξέων που αποτελούν την αλληλουχία του. Με την ανάπτυξη χημικής σύνθεσης στερεάς φάσης, η χημική σύνθεση διαφόρων δραστικών πεπτιδίων έχει σημειώσει μεγάλη πρόοδο. Ωστόσο, λόγω της περίπλοκης σύνθεσης του πεπτιδίου που λαμβάνεται με σύνθεση στερεάς φάσης, το τελικό προϊόν θα πρέπει να καθαριστεί με αξιόπιστες μεθόδους διαχωρισμού. Οι συνήθως χρησιμοποιούμενες μεθόδους καθαρισμού για τα πεπτίδια περιλαμβάνουν χρωματογραφία ανταλλαγής ιόντων (IEC) και υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης αντιστροφής φάσης (RP-HPLC), τα οποία έχουν τα μειονεκτήματα της χαμηλής ικανότητας φόρτωσης δείγματος, υψηλού κόστους των μέσων διαχωρισμού, περίπλοκου και δαπανηρού εξοπλισμού διαχωρισμού κλπ. Χρησιμοποιήθηκε ένα φυσίγγιο SepaFlash RP C18 για τον ταχέως καθαρισμό της θυμοπαντίνης (TP-5) και το προϊόν στόχου που συνάντησε οι απαιτήσεις.
Εικόνα 1. 20 Κοινά αμινοξέα (αναπαράγονται από το www.bachem.com).
Υπάρχουν 20 είδη αμινοξέων που είναι κοινά στη σύνθεση των πεπτιδίων. Αυτά τα αμινοξέα μπορούν να χωριστούν στις ακόλουθες ομάδες ανάλογα με την ιδιότητα τους πολικότητας και οξέος-βάσης: μη πολική (υδρόφοβη), πολική (μη φορτισμένη), όξινη ή βασική (όπως φαίνεται στο σχήμα 1). Σε μια πεπτιδική αλληλουχία, εάν τα αμινοξέα που αποτελούν την αλληλουχία είναι κυρίως πολικές (όπως σημειώνονται σε ροζ χρώμα στο σχήμα 1), όπως η κυστεΐνη, η γλουταμίνη, η ασπαραγίνη, η σερίνη, η θρεονίνη, η τυροσίνη κλπ. Στη συνέχεια, αυτό το πεπτίδιο μπορεί να έχει ισχυρή πολικότητα και να είναι εξαιρετικά διαλυτή στο νερό. Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας καθαρισμού για αυτά τα ισχυρά δείγματα πολικών πεπτιδίων με χρωματογραφία αναστροφής φάσης, θα εμφανιστεί ένα φαινόμενο που ονομάζεται Collapse υδρόφοβης φάσης. Σε σύγκριση με τις κανονικές στήλες C18, οι βελτιωμένες στήλες C18AQ είναι οι πλέον κατάλληλες για τον καθαρισμό ισχυρών πολικών ή υδρόφιλων δειγμάτων. Σε αυτή τη θέση, χρησιμοποιήθηκε ένα ισχυρό πολικό πεπτίδιο ως δείγμα και καθαρίστηκε με μια στήλη C18AQ. Ως αποτέλεσμα, το προϊόν στόχου που πληροί τις απαιτήσεις αποκτήθηκε και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί στην ακόλουθη έρευνα και ανάπτυξη.
| Οργανο | Σειρισμός™Μηχανικό 2 | |||
| Κασέτες | 12 g sepaflash c18 rp flash cartridge (σφαιρικό σίλικα, 20-45 μm, 100 Α, διαταγή Nunber: SW-5222-012-SP) | 12 g sepaflash c18aq rp φλόγα flash (σφαιρικό σίλικα, 20-45 μm, 100 Α, αριθμός παραγγελίας: SW-5222-012-SP (aq)) | ||
| Μήκος κύματος | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Κινητής φάσης | Διαλύτης Α: νερό Διαλύτης Β: ακετονιτρίλιο | |||
| Ρυθμός ροής | 15 ml/λεπτό | 20 ml/λεπτό | ||
| Δειγμάτων φόρτωσης | 30 mg | |||
| Κλίση | Χρόνος (βιογραφικό) | Διαλύτης Β (%) | Χρόνος (λεπτά) | Διαλύτης Β (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Αποτελέσματα και συζήτηση
Για να συγκρίνουμε την απόδοση καθαρισμού για το δείγμα πολικού πεπτιδίου μεταξύ της κανονικής στήλης C18 και της στήλης C18AQ, χρησιμοποιήσαμε μια κανονική στήλη C18 για τον καθαρισμό φλας του δείγματος ως αρχή. Όπως φαίνεται στο σχήμα 2, λόγω της κατάρρευσης της υδρόφοβιας φάσης των αλυσίδων C18 που προκαλούνται από υψηλή υδατική αναλογία, το δείγμα μόλις διατηρήθηκε στο κανονικό C18 κασέτες και απευθείας εκλούστηκε από την κινητή φάση. Ως αποτέλεσμα, το δείγμα δεν διαχωρίστηκε και καθαρίστηκε αποτελεσματικά.
Εικόνα 2. Το χρωματογράφημα φλας του δείγματος σε κανονική κασέτα C18.
Στη συνέχεια, χρησιμοποιήσαμε μια στήλη C18AQ για τον καθαρισμό φλας του δείγματος. Όπως φαίνεται στο σχήμα 3, το πεπτίδιο διατηρήθηκε αποτελεσματικά στη στήλη και στη συνέχεια εκλούστηκε. Το προϊόν -στόχος διαχωρίστηκε από τις ακαθαρσίες στο ακατέργαστο δείγμα και συλλέχθηκε. Μετά από λυοφιλοποίηση και στη συνέχεια αναλύθηκε με HPLC, το καθαρισμένο προϊόν έχει καθαρότητα 98,2% και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί περαιτέρω για την έρευνα και την ανάπτυξη του επόμενου βήματος.
Εικόνα 3. Το χρωματογράφημα φλας του δείγματος σε κασέτα C18AQ.
Συμπερασματικά, το SepaFlash C18AQ RP Flash Cartridge σε συνδυασμό με το σύστημα χρωματογραφίας Flash Sepabean™Η μηχανή θα μπορούσε να προσφέρει μια γρήγορη και αποτελεσματική λύση για τον καθαρισμό ισχυρών πολικών ή υδρόφιλων δειγμάτων.
Υπάρχει μια σειρά από τα φυσίγγια Flash SepaFlash C18AQ RP με διαφορετικές προδιαγραφές από την τεχνολογία Santai (όπως φαίνεται στον Πίνακα 2).
| Αριθμός αντικειμένου | Μέγεθος στήλης | Ρυθμός ροής (ml/min) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Πίνακας 2. Υλικά συσκευασίας: σφαιρικό σίλικα C18 (AQ) υψηλής απόδοσης, 20-45 μm, 100 Α.
Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τις λεπτομερείς προδιαγραφές της μηχανής Sepabean ™ ή τις πληροφορίες παραγγελίας σχετικά με τα φυσίγγια Flash Series Series SepaFlash, επισκεφθείτε την ιστοσελίδα μας.
Χρόνος δημοσίευσης: Οκτ-12-2018