Mingzu Yang, Bo Xu
Canolfan Ymchwil a Datblygu Cymwysiadau
Rhagymadrodd
Mae gwrthfiotigau yn ddosbarth o fetabolion eilaidd a gynhyrchir gan ficro-organebau (gan gynnwys bacteria, ffyngau, actinomysetau) neu gyfansoddion tebyg sy'n cael eu syntheseiddio'n gemegol neu'n lled-syntheseiddio.Gallai gwrthfiotigau atal twf a goroesiad micro-organebau eraill.Darganfuwyd y gwrthfiotig cyntaf a ddarganfuwyd gan ddyn, penisilin, gan y microbiolegydd Prydeinig Alexander Fleming ym 1928. Sylwodd na allai'r bacteria yng nghyffiniau'r llwydni dyfu yn y ddysgl meithrin staphylococcus a oedd wedi'i halogi â llwydni.Dywedodd fod yn rhaid i'r mowld secretu sylwedd gwrthfacterol, a enwodd yn benisilin ym 1928. Fodd bynnag, ni chafodd y cynhwysion actif eu puro bryd hynny.Ym 1939, penderfynodd Ernst Chain a Howard Florey o Brifysgol Rhydychen ddatblygu cyffur a allai drin heintiau bacteriol.Ar ôl cysylltu â Fleming i gael straen, fe wnaethant lwyddo i dynnu a phuro penisilin o'r straenau.Am eu datblygiad llwyddiannus o benisilin fel cyffur therapiwtig, rhannodd Fleming, Chain a Florey Wobr Nobel mewn Meddygaeth 1945.
Defnyddir gwrthfiotigau fel cyfryngau gwrthfacterol i drin neu atal heintiau bacteriol.Mae yna nifer o brif gategorïau o wrthfiotigau a ddefnyddir fel asiantau gwrthfacterol: gwrthfiotigau β-lactam (gan gynnwys penisilin, cephalosporin, ac ati), gwrthfiotigau aminoglycoside, gwrthfiotigau macrolide, gwrthfiotigau tetracycline, chloramphenicol (gwrthfiotigau synthetig cyfanswm), ac ati. Mae ffynonellau gwrthfiotigau yn cynnwys eplesu biolegol, lled-synthesis a chyfanswm synthesis.Mae angen i'r gwrthfiotigau a gynhyrchir gan eplesu biolegol gael eu haddasu'n strwythurol trwy ddulliau cemegol oherwydd sefydlogrwydd cemegol, sgîl-effeithiau gwenwynig, sbectrwm gwrthfacterol a materion eraill.Ar ôl eu haddasu'n gemegol, gallai'r gwrthfiotigau gyflawni mwy o sefydlogrwydd, lleihau sgîl-effeithiau gwenwynig, ehangu sbectrwm gwrthfacterol, llai o wrthwynebiad i gyffuriau, bio-argaeledd gwell, a thrwy hynny wella effaith triniaeth gyffuriau.Felly, gwrthfiotigau lled-synthetig yw'r cyfeiriad mwyaf poblogaidd ar hyn o bryd yn natblygiad cyffuriau gwrthfiotig.
Wrth ddatblygu gwrthfiotigau lled-synthetig, mae gan wrthfiotigau briodweddau purdeb isel, llawer o sgil-gynhyrchion a chydrannau cymhleth gan eu bod yn deillio o gynhyrchion eplesu microbaidd.Yn yr achos hwn, mae dadansoddi a rheoli amhureddau mewn gwrthfiotigau lled-synthetig yn arbennig o bwysig.Er mwyn nodi a nodweddu amhureddau yn effeithiol, mae angen cael digon o amhureddau o gynnyrch synthetig gwrthfiotigau lled-synthetig.Ymhlith y technegau paratoi amhuredd a ddefnyddir yn gyffredin, mae cromatograffaeth fflach yn ddull cost-effeithiol gyda manteision megis swm llwytho sampl mawr, cost isel, arbed amser, ac ati. Mae cromatograffaeth fflach wedi cael ei gyflogi fwyfwy gan ymchwilwyr synthetig.
Yn y swydd hon, defnyddiwyd prif amhuredd gwrthfiotig aminoglycoside lled-synthetig fel y sampl a'i buro gan cetris SepaFlash C18AQ ynghyd â pheiriant y system cromatograffaeth fflach SepaBean™.Llwyddwyd i gael y cynnyrch targed sy'n bodloni'r gofynion, gan awgrymu datrysiad hynod effeithlon ar gyfer puro'r cyfansoddion hyn.
Adran Arbrofol
Darparwyd y sampl yn garedig gan gwmni fferyllol lleol.Roedd y sampl yn fath o garbohydradau polysyclig amino ac roedd ei strwythur moleciwlaidd yn debyg gyda gwrthfiotigau aminoglycoside.Roedd polaredd y sampl braidd yn uchel, gan ei wneud yn hydawdd iawn mewn dŵr.Dangoswyd y diagram sgematig o strwythur moleciwlaidd y sampl yn Ffigur 1. Roedd purdeb y sampl crai tua 88% fel y'i dadansoddwyd gan HPLC.Ar gyfer puro'r cyfansoddion hyn o bolaredd uchel, prin y byddai'r sampl yn cael ei gadw ar y colofnau C18 rheolaidd yn ôl ein profiadau blaenorol.Felly, defnyddiwyd colofn C18AQ ar gyfer puro sampl.
Ffigur 1. Y diagram sgematig o strwythur moleciwlaidd y sampl.
I baratoi'r hydoddiant sampl, toddwyd sampl crai 50 mg mewn 5 ml o ddŵr pur ac yna ei ultrasonicated er mwyn ei wneud yn ddatrysiad hollol glir.Yna cafodd yr hydoddiant sampl ei chwistrellu i'r golofn fflach gan chwistrellydd.Rhestrwyd gosodiad arbrofol y puro fflach yn Nhabl 1.
| Offeryn | peiriant SepaBean™ 2 | |
| Cetris | Cetris fflach 12 g SepaFlash C18AQ RP (silica sfferig, 20 - 45μm, 100 Å, Rhif archeb: SW-5222-012-SP(AQ)) | |
| Tonfedd | 204 nm, 220 nm | |
| Cyfnod symudol | Hydoddydd A: Dŵr Hydoddydd B: Acetonitrile | |
| Cyfradd llif | 15 ml/munud | |
| Llwytho sampl | 50 mg | |
| graddiant | Amser (munud) | Hydoddydd B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Canlyniadau a Thrafodaeth
Dangoswyd cromatogram fflach y sampl ar y cetris C18AQ yn Ffigur 2. Fel y dangosir yn Ffigur 2, cadwyd y sampl polar iawn i bob pwrpas ar y cetris C18AQ.Ar ôl lyopholization ar gyfer y ffracsiynau a gasglwyd, roedd gan y cynnyrch targed purdeb o 96.2% (fel y dangosir yn Ffigur 3) yn ôl dadansoddiad HPLC.Dangosodd y canlyniadau y gellid defnyddio'r cynnyrch wedi'i buro ymhellach yn y cam nesaf o ymchwilio a datblygu.
Ffigur 2. Cromatogram fflach y sampl ar cetris C18AQ.
Ffigur 3. Cromatogram HPLC y cynnyrch targed.
I gloi, gallai cetris fflach SepaFlash C18AQ RP ynghyd â pheiriant y system cromatograffaeth fflach SepaBean™ gynnig datrysiad cyflym ac effeithiol ar gyfer puro samplau pegynol iawn.
Ynglŷn â'r cetris fflach SepaFlash C18AQ RP
Mae yna gyfres o cetris fflach SepaFlash C18AQ RP gyda manylebau gwahanol i Santai Technology (fel y dangosir yn Nhabl 2).
| Rhif yr Eitem | Maint Colofn | Cyfradd Llif (mL/munud) | Max.Pwysau (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabl 2. Cetris fflach SepaFlash C18AQ RP.Deunyddiau pacio: Spherical effeithlonrwydd uchel C18(AQ)-bondio silica, 20 - 45 μm, 100 Å.
I gael rhagor o wybodaeth am fanylebau manwl peiriant SepaBean™, neu'r wybodaeth archebu ar cetris fflach cyfres SepaFlash, ewch i'n gwefan.
Amser postio: Hydref-26-2018