Rui huang, bo xu
Canolfan Ymchwil a Datblygu cais
Cyflwyniad
Mae cromatograffeg cyfnewid ïon (IEC) yn ddull cromatograffig a ddefnyddir yn gyffredin i wahanu a phuro'r cyfansoddion a gyflwynir ar ffurf ïonig mewn toddiant. Yn ôl y gwahanol gyflwr gwefr ïonau cyfnewidiadwy, gellir rhannu IEC yn ddau fath, cromatograffeg cyfnewid cation a chromatograffeg cyfnewid anion. Mewn cromatograffeg cyfnewid cation, mae grwpiau asidig yn cael eu bondio i wyneb y cyfryngau gwahanu. Er enghraifft, mae asid sulfonig (-SO3H) yn grŵp a ddefnyddir yn gyffredin mewn cyfnewid cation cryf (SCX), sy'n dadleoli H+ a'r grŵp a wefrir yn negyddol -so3- felly gall adsorbio cations eraill yn yr hydoddiant. Mewn cromatograffeg cyfnewid anion, mae grwpiau alcalïaidd yn cael eu bondio i wyneb y cyfryngau gwahanu. Er enghraifft, mae amin cwaternaidd (-NR3OH, lle mae R yn grŵp hydrocarbon) fel arfer yn cael ei ddefnyddio mewn cyfnewid anion cryf (SAX), sy'n dadleoli OH- a gall y grŵp -N+R3 â gwefr bositif adsorbio anionau eraill yn yr hydoddiant, gan arwain at effaith cyfnewid anion.
Ymhlith cynhyrchion naturiol, mae flavonoidau wedi denu sylw ymchwilwyr oherwydd eu rôl wrth atal a thrin afiechydon cardiofasgwlaidd. Gan fod y moleciwlau flavonoid yn asidig oherwydd presenoldeb grwpiau hydrocsyl ffenolig, mae cromatograffeg cyfnewid ïon yn opsiwn amgen yn ogystal â chyfnod arferol confensiynol neu gromatograffeg cyfnod gwrthdroi ar gyfer gwahanu a phuro'r cyfansoddion asidig hyn. Mewn cromatograffeg fflach, y cyfryngau gwahanu a ddefnyddir yn gyffredin ar gyfer cyfnewid ïon yw matrics gel silica lle mae grwpiau cyfnewid ïon yn cael eu bondio i'w wyneb. Y dulliau cyfnewid ïon a ddefnyddir amlaf mewn cromatograffeg fflach yw SCX (grŵp asid sulfonig fel arfer) a SAX (grŵp amin cwaternaidd fel arfer). Yn y nodyn cais a gyhoeddwyd yn flaenorol gyda’r teitl “Cymhwyso colofnau cromatograffeg cyfnewid cation cryf sepaFlash wrth buro cyfansoddion alcalïaidd” gan Santai Technologies, defnyddiwyd colofnau SCX i buro cyfansoddion alcalïaidd. Yn y swydd hon, defnyddiwyd cymysgedd o safonau niwtral ac asidig fel y sampl i archwilio cymhwysiad colofnau SAX wrth buro cyfansoddion asidig.
Adran arbrofol
Ffigur 1. Diagram sgematig y cyfnod llonydd wedi'i bondio ag wyneb cyfryngau gwahanu SAX.
Yn y swydd hon, defnyddiwyd colofn SAX wedi'i phacio ymlaen llaw â silica wedi'i bondio amin cwaternaidd (fel y dangosir yn Ffigur 1). Defnyddiwyd cymysgedd o gromon ac asid 2,4-dihydroxybenzoic fel y sampl i'w phuro (fel y dangosir yn Ffigur 2). Diddymwyd y gymysgedd mewn methanol a'i lwytho ar y cetris fflach gan chwistrellwr. Rhestrir setiad arbrofol y puro fflach yn Nhabl 1.
Ffigur 2. Strwythur cemegol y ddwy gydran yn y gymysgedd sampl.
| Offerynnau | Peiriant sepabean ™ t | |||||
| Chetris | Cetris Fflach Cyfres Safonol 4 G SepaFlash (silica afreolaidd, 40-63 μm, 60 Å, rhif archeb: S-5101-0004) | 4 g Cyfres bond sepflash Cetris fflach sacs (silica afreolaidd, 40-63 μm, 60 Å, rhif archeb ： SW-5001-004-IR) | ||||
| Donfedd | 254 nm (canfod), 280 nm (monitro) | |||||
| Cyfnod Symudol | Toddydd A: n-hecsan | |||||
| Toddydd B: Asetad Ethyl | ||||||
| Cyfradd llif | 30 ml/min | 20 ml/min | ||||
| Llwytho Sampl | 20 mg (cymysgedd o gydran A a chydran B) | |||||
| Ngraddiant | Amser (CV) | Toddydd B (%) | Amser (CV) | Toddydd B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Canlyniadau a thrafodaeth
Yn gyntaf, gwahanwyd y gymysgedd sampl gan getris fflach cyfnod arferol wedi'i bacio ymlaen llaw â silica rheolaidd. Fel y dangosir yn Ffigur 3, echdynwyd y ddwy gydran yn y sampl o'r cetris un ar ôl y llall. Nesaf, defnyddiwyd cetris fflach sacs i buro'r sampl. Fel y dangosir yn Ffigur 4, cadwyd y gydran asidig B yn llwyr ar y cetris sacs. Cafodd y gydran niwtral A ei echdynnu'n raddol o'r cetris ag echdynnu'r cyfnod symudol.
Ffigur 3. Cromatogram fflach y sampl ar getris cyfnod arferol rheolaidd.
Ffigur 4. Cromatogram fflach y sampl ar getris sacs.
O gymharu Ffigur 3 a Ffigur 4, mae gan y gydran A siâp brig anghyson ar y ddau getris fflach gwahanol. I gadarnhau a yw'r uchafbwynt elution yn cyfateb i'r gydran, gallwn ddefnyddio'r nodwedd sganio tonfedd lawn sydd wedi'i hymgorffori ym meddalwedd reoli peiriant Sepabean ™. Agorwch ddata arbrofol y ddau wahaniad, llusgwch i linell y dangosydd ar yr echel amser (CV) yn y cromatogram i'r pwynt uchaf a bydd ail bwynt uchaf y brig elution sy'n cyfateb i'r gydran A, a sbectrwm tonfedd llawn y ddau bwynt hyn yn cael ei ddangos yn awtomatig o dan y cromatogram (fel y dangosir yn Ffigur 5 a Ffigur 5 a Ffigur 6). Gan gymharu data sbectrwm tonfedd llawn y ddau wahaniad hyn, mae gan y gydran A sbectrwm amsugno cyson mewn dau arbrawf. Am reswm y gydran A mae gan siâp brig anghyson ar ddau getris fflach gwahanol, dyfalir bod amhuredd penodol yn y gydran A sydd â chadw gwahanol ar y cetris cyfnod arferol a'r cetris sacs. Felly, mae'r dilyniant eluting yn wahanol ar gyfer y gydran A a'r amhuredd ar y ddau getris fflach hyn, gan arwain at siâp brig anghyson ar y cromatogramau.
Ffigur 5. Sbectrwm tonfedd llawn y gydran A a'r amhuredd wedi'i wahanu gan getris cyfnod arferol.
Ffigur 6. Sbectrwm tonfedd llawn y gydran A a'r amhuredd wedi'i wahanu gan getris sacs.
Os mai'r cynnyrch targed sydd i'w gasglu yw'r gydran niwtral A, mae'n hawdd cwblhau'r dasg buro trwy ddefnyddio'r cetris SAX yn uniongyrchol i'w elution ar ôl llwytho sampl. Ar y llaw arall, os mai'r cynnyrch targed sydd i'w gasglu yw'r gydran asidig B, gellid mabwysiadu'r dull rhyddhau dal gydag addasiad bach yn unig yn y camau arbrofol: pan lwythwyd y sampl ar y cetris sacs a bod y gydran niwtral A yn cael ei echdynnu'n llwyr â thoddiannau organig cyfnod arferol, newid y cyfnod symudol i ddatrysiad methanol. Bydd yr ïonau asetad yn y cyfnod symudol yn cystadlu â'r gydran B i gael ei rwymo i'r grwpiau ïon amin cwaternaidd ar gyfnod llonydd cetris sacs, a thrwy hynny echdynnu'r gydran B o'r cetris i gael y cynnyrch targed. Dangoswyd cromatogram y sampl a wahanwyd yn y modd cyfnewid ïon yn Ffigur 7.
Ffigur 7. Cromatogram fflach y gydran B wedi'i echdynnu yn y modd cyfnewid ïon ar getris sacs.
I gloi, gallai sampl asidig neu niwtral gael ei buro'n gyflym gan getris SAX wedi'i gyfuno â chetris cyfnod arferol gan ddefnyddio gwahanol strategaethau puro. Ar ben hynny, gyda chymorth nodwedd sganio tonfedd lawn wedi'i ymgorffori ym meddalwedd reoli peiriant Sepabean ™, gellid cymharu a chadarnhau sbectrwm amsugno nodweddiadol y ffracsiynau eluted, gan helpu ymchwilwyr yn gyflym i bennu cyfansoddiad a phurdeb y ffracsiynau eluted yn gyflym a thrwy hynny wella effeithiolrwydd gwaith.
| Rhif Eitem | Maint colofn | Cyfradd llif (ml/min) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5.9 g | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
Tabl 2. Cyfres SepFlash Cyfres Sax Fflach Cetris. Deunyddiau pacio: silica afreolaidd ultra-pur silica wedi'i bondio â sacs, 40-63 μm, 60 Å.
I gael rhagor o wybodaeth am fanylebau manwl o Sepabean ™Peiriant, neu'r wybodaeth archebu ar getris fflach cyfres SepFlash, ewch i'n gwefan.
Amser Post: Tach-09-2018