Rui huang, bo xu
Canolfan Ymchwil a Datblygu cais
Cyflwyniad
Mae peptid yn gyfansoddyn sy'n cynnwys asidau amino, ac mae gan bob un ohonynt briodweddau ffisegol a chemegol unigryw oherwydd y gwahanol fathau a threfn gweddillion asid amino sy'n ffurfio ei ddilyniant. Gyda datblygiad synthesis cemegol cyfnod solet, mae synthesis cemegol peptidau actif amrywiol wedi gwneud cynnydd mawr. Fodd bynnag, oherwydd cyfansoddiad cymhleth y peptid a gafwyd trwy synthesis cyfnod solet, dylid puro'r cynnyrch terfynol trwy ddulliau gwahanu dibynadwy. Mae'r dulliau puro a ddefnyddir yn gyffredin ar gyfer peptidau yn cynnwys cromatograffeg cyfnewid ïon (IEC) a chromatograffeg hylif perfformiad uchel cam gwrthdroi (RP-HPLC), sydd ag anfanteision capasiti llwytho sampl isel, cost uchel y cyfryngau gwahanu, achosion gwahanu cymhleth a chostus, ar gyfer y purdeb bach, moesol, ar gyfer y purdeb cyflym, puro puredigaeth, ac ati. Cyhoeddwyd gan Santai Technologies, lle defnyddiwyd cetris Sepeflash RP C18 i buro thymopentin yn gyflym (TP-5) a chafwyd y cynnyrch targed y gofynion y gofynion.
Ffigur 1. 20 Asidau amino cyffredin (atgynhyrchwyd o www.bachem.com).
Mae yna 20 math o asidau amino sy'n gyffredin yng nghyfansoddiad peptidau. Gellir rhannu'r asidau amino hyn yn y grwpiau canlynol yn ôl eu heiddo polaredd ac asid-sylfaen: di-begynol (hydroffobig), pegynol (heb ei godi), asidig neu sylfaenol (fel y dangosir yn Ffigur 1). Mewn dilyniant peptid, os yw'r asidau amino sy'n ffurfio'r dilyniant yn rhai pegynol yn bennaf (fel y'u marcir mewn lliw pinc yn Ffigur 1), megis cystein, glutamin, asparagine, serine, threonine, tyrosine, ac ati. Yna gallai'r peptid hwn fod â pholaredd cryf a bod yn hyderog iawn mewn dŵr. Yn ystod y weithdrefn buro ar gyfer y samplau peptid pegynol cryf hyn trwy gromatograffeg cyfnod wedi'i wrthdroi, bydd ffenomen o'r enw cwymp cyfnod hydroffobig yn digwydd (cyfeiriwch at nodyn cymhwysiad a gyhoeddwyd yn flaenorol gan Santai Technologies: cwymp cyfnod hydroffobig, colofnau cromatograffeg cam gwrthdroi AQ a'u cymwysiadau)). O'u cymharu â'r colofnau C18 rheolaidd, mae'r colofnau C18AQ gwell yn fwyaf addas ar gyfer puro samplau pegynol neu hydroffilig cryf. Yn y swydd hon, defnyddiwyd peptid pegynol cryf fel y sampl a'i buro gan golofn C18AQ. O ganlyniad, cafwyd y cynnyrch targed i'r gofynion a gellid ei ddefnyddio yn yr ymchwil a'r datblygiad canlynol.
| Offerynnau | Sepabean™Peiriant 2 | |||
| Chetris | 12 g SepaFlash C18 RP Cetris Flash (silica sfferig, 20-45 μm, 100 Å, gorchymyn lleianod ： SW-5222-012-sp) | 12 G SepaFlash C18AQ RP Cetris Fflach (silica sfferig, 20-45 μm, 100 Å, rhif archeb ： SW-5222-012-SP (AQ))) | ||
| Donfedd | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Cyfnod Symudol | Toddydd A: Dŵr Toddydd B: Acetonitrile | |||
| Cyfradd llif | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Llwytho Sampl | 30 mg | |||
| Ngraddiant | Amser (CV) | Toddydd B (%) | Amser | Toddydd B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Canlyniadau a thrafodaeth
Er mwyn cymharu'r perfformiad puro ar gyfer y sampl peptid pegynol rhwng colofn C18 rheolaidd a cholofn C18AQ, gwnaethom ddefnyddio colofn C18 reolaidd ar gyfer puro'r sampl fflach fel cychwyn. Fel y dangosir yn Ffigur 2, oherwydd cwymp cyfnod hydroffobig y cadwyni C18 a achoswyd gan gymhareb dyfrllyd uchel, prin y cafodd y sampl ei chadw ar y cetris C18 rheolaidd ac roedd y cyfnod symudol yn ei dynnu allan yn uniongyrchol. O ganlyniad, ni chafodd y sampl ei gwahanu a'i buro i bob pwrpas.
Ffigur 2. Cromatogram fflach y sampl ar getris C18 rheolaidd.
Nesaf, gwnaethom ddefnyddio colofn C18AQ ar gyfer puro fflach y sampl. Fel y dangosir yn Ffigur 3, cadwyd y peptid yn effeithiol ar y golofn ac yna ei echdynnu allan. Cafodd y cynnyrch targed ei wahanu oddi wrth yr amhureddau yn y sampl amrwd a'i gasglu. Ar ôl lyoffileiddio ac yna ei ddadansoddi gan HPLC, mae gan y cynnyrch wedi'i buro burdeb o 98.2% a gellid ei ddefnyddio ymhellach ar gyfer ymchwil a datblygu cam nesaf.
Ffigur 3. Cromatogram fflach y sampl ar getris C18AQ.
I gloi, cetris fflach SepFlash C18AQ RP wedi'i gyfuno â'r system cromatograffeg fflach sepabean™Gallai peiriant gynnig datrysiad cyflym ac effeithiol ar gyfer puro samplau pegynol neu hydroffilig cryf.
Mae yna gyfres o'r cetris fflach SepFlash C18AQ RP gyda manylebau gwahanol o dechnoleg Santai (fel y dangosir yn Nhabl 2).
| Rhif Eitem | Maint colofn | Cyfradd llif (ml/min) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-sp (d) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (d) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-sp (d) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-sp (d) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-sp (d) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (d) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (d) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-sp (d) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabl 2. SepFlash C18AQ RP Cetris fflach. Deunyddiau pacio: silica wedi'i bondio sfferig c18 (aq), 20-45 μm, 100 Å.
I gael rhagor o wybodaeth am fanylebau manwl o beiriant SepAbean ™, neu'r wybodaeth archebu ar getris fflach cyfres sepaFlash, ewch i'n gwefan.
Amser Post: Hydref-12-2018