Mingzu Yang, Bo Xu
Centrum výzkumu a vývoje aplikace
Zavedení
Antibiotika jsou třídou sekundárních metabolitů produkovaných mikroorganismy (včetně bakterií, hub, aktinomycetů) nebo podobných sloučenin, které jsou chemicky syntetizovány nebo polosyntetizovány. Antibiotika by mohla inhibovat růst a přežití jiných mikroorganismů. První antibiotikum objevené lidským, penicilin, objevil britský mikrobiolog Alexander Fleming v roce 1928. Poznamenal, že bakterie v blízkosti formy nemohly růst v kulturní misce Staphylococcus, která byla kontaminována plísní. Předpokládal, že forma musí vylučovat antibakteriální látku, kterou v roce 1928 jmenoval penicilin. Ačinky však nebyly v té době očištěny. V roce 1939 se Ernst Chain a Howard Florey z Oxfordské univerzity rozhodli vyvinout lék, který by mohl léčit bakteriální infekce. Poté, co kontaktovali Fleming, aby získali kmeny, úspěšně extrahovali a čistili penicilin z kmenů. Pro jejich úspěšný vývoj penicilinu jako terapeutického léčiva, Fleming, Chain a Florey sdílel Nobelovu cenu z roku 1945 v medicíně.
Antibiotika se používají jako antibakteriální látky k léčbě nebo prevenci bakteriálních infekcí. Jako antibakteriální látky se používají několik hlavních kategorií antibiotik: antibiotika β-laktamu (včetně penicilinu, cefalosporinu atd.), Aminoglykosidová antibiotika, makrolidová antibiotika, tetracyklinová antibiotika, chloramphenikol (celková syntetická antibiotika), atd. Mezi biologická fermentace, patří k biologickému fermentu, atd. Semi-syntéza a celková syntéza. Antibiotika produkovaná biologickou fermentací musí být strukturálně modifikována chemickými metodami v důsledku chemické stability, toxických vedlejších účinků, antibakteriálního spektra a dalších problémů. Po chemicky modifikovaném by antibiotika mohla dosáhnout zvýšené stability, snížené toxické vedlejší účinky, rozšířené antibakteriální spektrum, sníženou rezistenci na léčivo, zlepšenou biologickou dostupnost, a tím zlepšila účinek léčby léčiva. Semisyntetická antibiotika jsou proto v současné době nejoblíbenějším směrem ve vývoji antibiotik.
Při vývoji semisyntetických antibiotik mají antibiotika vlastnosti nízké čistoty, spoustu vedlejších produktů a komplexních složek, protože jsou odvozeny z mikrobiálních fermentačních produktů. V tomto případě je zvláště důležitá analýza a kontrola nečistot u polosyntetických antibiotik. Aby bylo možné účinně identifikovat a charakterizovat nečistoty, je nutné získat dostatečné množství nečistot ze syntetického produktu semisyntetických antibiotik. Mezi běžně používanými technikami přípravy nečistot je Flash chromatografie nákladově efektivní metodou s výhodou, jako je velké množství načítání vzorku, nízké náklady, úspora času atd. Flash chromatografie byla stále více využívána syntetickými vědci.
V tomto příspěvku byla hlavní nečistota semisyntetického aminoglykosidového antibiotiku použity jako vzorek a purifikována kazetou sepaflash C18AQ kombinovaná s strojem Flash Chromatography Sepabean ™. Cílový produkt splňující požadavky byl úspěšně získán, což naznačuje vysoce efektivní řešení pro čištění těchto sloučenin.
Experimentální část
Vzorek byl laskavě poskytován místní farmaceutickou společností. Vzorek byl druh amino polycyklických uhlohydrátů a jeho molekulární struktura byla podobná u aminoglykosidových antibiotik. Polarita vzorku byla poměrně vysoká, takže byla velmi rozpustná ve vodě. Schematický diagram molekulární struktury vzorku byl znázorněn na obrázku 1. Čistota surového vzorku byla asi 88%, jak bylo analyzováno HPLC. Pro čištění těchto sloučenin s vysokou polaritou by byl vzorek stěží zachován na běžných sloupcích C18 podle našich předchozích zkušeností. Proto byl pro čištění vzorku použit sloupec C18AQ.
Obrázek 1.. Schematický diagram molekulární struktury vzorku.
Pro přípravu roztoku vzorku byl rozpuštěn 50 mg surového vzorku v 5 ml čisté vodě a poté ultrazvukován, aby se stalo zcela jasným roztokem. Roztok vzorku byl poté injikován do sloupce blesku injektorem. Experimentální nastavení čištění blesku bylo uvedeno v tabulce 1.
| Nástroj | SEPABEAN ™ Machine 2 | |
| Kazety | 12 g sepaflash c18aq RP flash kazeta (sférická oxid křemičitý, 20-45 μm, 100 Á, číslo objednávky ： SW-5222-012-SP (aq)) | |
| Vlnová délka | 204 nm, 220 nm | |
| Mobilní fáze | Rozpouštědlo A: Voda Rozpouštědlo B: acetonitril | |
| Průtok | 15 ml/min | |
| Načítání vzorku | 50 mg | |
| Gradient | Čas (min) | Rozpouštědlo B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Výsledky a diskuse
Flash chromatogram vzorku na kazetě C18AQ byl znázorněn na obrázku 2. Jak je znázorněno na obrázku 2, vysoce polární vzorek byl účinně zachován na kazetě C18AQ. Po lyofolizaci pro shromážděné frakce měl cílový produkt čistotu 96,2% (jak je znázorněno na obrázku 3) analýzou HPLC. Výsledky naznačují, že čištěný produkt lze dále využít při výzkumu a vývoji dalšího kroku.
Obrázek 2. Flash chromatogram vzorku na kazetě C18AQ.
Obrázek 3. HPLC chromatogram cílového produktu.
Závěrem lze říci, že flash kazety sepaflash C18AQ RP v kombinaci s strojem SEPABEAN ™ Flash Chromatography by mohla nabídnout rychlé a efektivní řešení pro čištění vysoce polárních vzorků.
O sepaflash C18aq RP Flash Cartridges
Existuje řada sepaflash c18aq RP flash kazet s různými specifikacemi z technologie Santai (jak je uvedeno v tabulce 2).
| Číslo položky | Velikost sloupce | Průtok (ML/min) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabulka 2. Sepaflash C18aq RP Flash Cartridges. Balicí materiály: Vysoce účinná sférická sférická C18 (AQ) oxid křemičitý, 20-45 μm, 100 Á.
Další informace o podrobných specifikacích stroje SEPABEAN ™ nebo o informace o objednávkách o flash cartridges Sepaflash najdete na našem webu.
Čas příspěvku: říjen-26-2018