Rui Huang, Bo Xu
Centrum výzkumu a vývoje aplikace
Zavedení
Peptid je sloučenina složená z aminokyselin, z nichž každá má jedinečné fyzikální a chemické vlastnosti kvůli různým typům a pořadí aminokyselinových zbytků, které tvoří jeho sekvenci. Při vývoji chemické syntézy v pevné fázi se chemická syntéza různých aktivních peptidů dosáhla velkého pokroku. Avšak vzhledem ke komplikovanému složení peptidu získaného syntézou pevné fáze by měl být konečný produkt purifikován spolehlivými separačními metodami. Mezi běžně používané metody čištění peptidů patří chromatografie na výměně iontu (IEC) a vysoce výkonná kapalinová chromatografie s obrácenou fází (RP-HPLC), které mají nevýhody nízké načítání vzorku, vysoká náklady na separační média, které byly předchozími nákladmi na separaci, byly předchozími nákladmi, které byly předtím publikovány, v průběhu předchozího uplatnění, v průběhu předchozího nákladů na separační média, v průběhu předchozího vyčištění molekul (MW <1 KDA). který byla použita kazeta RP C18 Sepaflash RP C18 pro rychlé čištění thymopentinu (TP-5) a cílového produktu splňujícího požadavky byly získány.
Obrázek 1. 20 běžných aminokyselin (reprodukováno z www.bachem.com).
Existuje 20 druhů aminokyselin, které jsou běžné ve složení peptidů. Tyto aminokyseliny lze rozdělit do následujících skupin podle jejich vlastnosti polarity a kyseliny: nepolární (hydrofobní), polární (nenabitý), kyselý nebo základní (jak je znázorněno na obrázku 1). V peptidové sekvenci, pokud jsou aminokyseliny, které tvoří sekvenci, většinou polární (jak je znázorněno růžovou barvou na obrázku 1), jako je cystein, glutamin, asparagin, serin, threonin, tyrosin atd., Pak by tento peptid mohl mít silnou polaritu a být vysoce rozpustný ve vodě. Během procedury čištění pro tyto silné vzorky polárních peptidů pomocí chromatografie zvrácené fáze dojde k jevu zvanému hydrofobní fázový kolaps (odlišuje se na dříve publikované aplikační poznámku Santai Technologies: hydrofobní fázový kolaps, AQ reverzovaný fázový chromatografický sloup a jejich aplikace). Ve srovnání s běžnými sloupci C18 jsou vylepšené sloupce C18AQ nejvhodnější pro čištění silných polárních nebo hydrofilních vzorků. V tomto příspěvku byl jako vzorek použit silný polární peptid a purifikován sloupcem C18AQ. Výsledkem bylo, že cílový produkt splňoval požadavky a mohl být použit v následujícím výzkumu a vývoji.
| Nástroj | Sepabean™stroj 2 | |||
| Kazety | 12 g sepaflash c18 rp flash kazeta (sférická oxid křemičitý, 20-45 μm, 100 Á, Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 g sepaflash C18aq RP Flash Cartridge (sférický oxid křemičitý, 20-45 μm, 100 Á, číslo objednávky ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Vlnová délka | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobilní fáze | Rozpouštědlo A: Voda Rozpouštědlo B: acetonitril | |||
| Průtok | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Načítání vzorku | 30 mg | |||
| Gradient | Čas (CV) | Rozpouštědlo B (%) | Čas (min) | Rozpouštědlo B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Výsledky a diskuse
Abychom porovnali výkon purifikace pro vzorek polárního peptidu mezi běžnou sloupkou C18 a sloupcem C18AQ, použili jsme pro začátek pravidelný sloupec C18 pro čištění záblesku vzorku. Jak je znázorněno na obrázku 2, v důsledku hydrofobní fázové kolaps řetězců C18 způsobeného vysokým vodným poměrem byl vzorek stěží zachován na běžné kazetě C18 a byl přímo eluován mobilní fází. Výsledkem bylo, že vzorek nebyl účinně oddělen a čištěn.
Obrázek 2. Flash chromatogram vzorku na běžné kazetě C18.
Dále jsme použili sloupec C18AQ pro čištění blesku vzorku. Jak je znázorněno na obrázku 3, peptid byl účinně zachován na sloupci a poté eluován. Cílový produkt byl oddělen od nečistot ve vzorku RAW a shromážděn. Po lyofilizaci a poté analyzován pomocí HPLC má purifikovaný produkt čistotu 98,2% a mohl být dále využíván pro výzkum a vývoj dalšího kroku.
Obrázek 3. Flash chromatogram vzorku na kazetě C18AQ.
Na závěr, sepaflash C18aq RP Flash Cantridge v kombinaci s flash chromatografickým systémem Sepabeanem™Stroj by mohl nabídnout rychlé a efektivní řešení pro čištění silných polárních nebo hydrofilních vzorků.
Existuje řada sepaflash c18aq RP flash kazet s různými specifikacemi z technologie Santai (jak je uvedeno v tabulce 2).
| Číslo položky | Velikost sloupce | Průtok (ML/min) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabulka 2. Sepaflash C18aq RP Flash Cartridges. Balicí materiály: Vysoce účinná sférická sférická C18 (AQ) oxid křemičitý, 20-45 μm, 100 Á.
Další informace o podrobných specifikacích stroje SEPABEAN ™ nebo o informace o objednávkách o flash cartridges Sepaflash najdete na našem webu.
Čas příspěvku: říjen-12-2018