Rui Huang, Bo Xu
Centru R&D di l'applicazione
Introduzione
Un peptide hè un compostu cumpostu di aminoacidi, ognunu di i quali hà proprietà fisiche è chimiche uniche per via di i diversi tipi è l'ordine di residui di aminoacidi chì custituiscenu a so sequenza.Cù u sviluppu di a sintesi chimica in fase solida, a sintesi chimica di diversi peptidi attivi hà fattu un grande prugressu.Tuttavia, a causa di a cumpusizioni cumplicata di u peptide ottenuta da a sintesi di fase solida, u pruduttu finali deve esse purificatu da metudi di separazione affidabili.I metudi di purificazione cumunimenti utilizati per i peptidi includenu a cromatografia di scambiu di ioni (IEC) è a cromatografia liquida d'alta prestazione in fase inversa (RP-HPLC), chì anu i svantaghji di a capacità di carica di campioni bassa, u costu elevatu di i media di separazione, l'equipaggiu di separazione complicatu è costosu, etc. Per a purificazione rapida di peptidi di picculi molecule (MW < 1 kDa), un casu d'applicazione successu hè statu publicatu prima da Santai Technologies, in quale una cartuccia SepaFlash RP C18 hè stata utilizata per a purificazione rapida di thymopentin (TP-5) è u U pruduttu di destinazione chì risponde à i requisiti hè statu ottenutu.
Figura 1. 20 aminoacidi cumuni (riproduciti da www.bachem.com).
Ci hè 20 tipi di aminoacidi chì sò cumuni in a cumpusizioni di peptidi.Questi aminoacidi ponu esse divisi in i seguenti gruppi secondu a so polarità è a pruprietà di l'acidu-base: non polari (idrofobi), polari (senza carica), acidi o basi (cum'è mostra in Figura 1).In una sequenza di peptide, se l'aminoacidi chì custituiscenu a sequenza sò soprattuttu polari (cum'è marcatu in u culore rosa in Figura 1), cum'è Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, etc. allora stu peptide puderia avè un forte polarità è esse altamente solubile in acqua.Durante a prucedura di purificazione per questi forti campioni di peptidi polari per cromatografia in fase inversa, si verificarà un fenomenu chjamatu colapsu di a fase idrofobica (consultate una nota di applicazione pubblicata in precedenza da Santai Technologies: Collapse di fase idrofobica, Colonne di cromatografia in fase inversa AQ è e so applicazioni).Rispetto alle colonne C18 normali, le colonne C18AQ migliorate sono più adatte per la purificazione di campioni polari o idrofili forti.In questu post, un forte peptide polare hè statu utilizatu cum'è mostra è purificatu da una colonna C18AQ.In u risultatu, u pruduttu di destinazione chì risponde à i requisiti hè statu ottenutu è puderia esse usatu in a ricerca è u sviluppu seguenti.
| Strumentu | SepaBean™macchina 2 | |||
| Cartuccia | Cartuccia flash SepaFlash C18 RP da 12 g (silice sferica, 20 - 45 μm, 100 Å, numero di ordine: SW-5222-012-SP) | Cartuccia flash SepaFlash C18AQ RP da 12 g (silice sferica, 20 - 45 μm, 100 Å, numero d'ordine: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Lunghezza d'onda | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Fase mobile | Solvente A: acqua Solvent B: acetonitrile | |||
| Rate di flussu | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Carica di mostra | 30 mg | |||
| Gradient | Tempu (CV) | Solvente B (%) | Tempu (min) | Solvente B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Risultati è discussione
Per paragunà a prestazione di purificazione per a mostra di peptide polare trà a colonna C18 regulare è a colonna C18AQ, avemu utilizatu una colonna C18 regulare per a purificazione flash di a mostra cum'è principiu.Cum'è mostra in a Figura 2, per via di u colapsu di a fase idrofoba di e catene C18 causatu da un altu rapportu acquoso, a mostra hè stata appena ritenuta nantu à a cartuccia C18 regulare è hè stata direttamente eluita da a fase mobile.In u risultatu, a mostra ùn era micca efficacemente separata è purificata.
Figura 2. U cromatogramma flash di a mostra nantu à un cartucciu C18 regular.
In seguitu, avemu usatu una colonna C18AQ per a purificazione flash di a mostra.Cum'è mostra in a Figura 3, u peptide hè stata ritenuta in modu efficace nantu à a colonna è dopu eluted out.U pruduttu di destinazione hè stata siparata da l'impurità in a mostra cruda è cullata.Dopu à a liofilizazione è poi analizzatu da HPLC, u pruduttu purificatu hà una purezza di 98,2% è puderia esse utilizatu in più per a ricerca è u sviluppu di u prossimu passu.
Figura 3. U cromatogramma flash di a mostra nantu à un cartucciu C18AQ.
In cunclusioni, a cartuccia flash SepaFlash C18AQ RP cumminata cù u sistema di cromatografia flash SepaBean™A macchina puderia offre una soluzione rapida è efficace per a purificazione di campioni polari o idrofili forti.
Ci hè una serie di cartucce flash SepaFlash C18AQ RP cù diverse specificazioni da Santai Technology (cum'è mostra in a Tabella 2).
| Numeru di l'articulu | Dimensione di a colonna | Rate di flussu (ml/min) | Pressione max (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Table 2. Cartuccia flash SepaFlash C18AQ RP.Materiali di imballaggio: silice sferica ad alta efficienza C18(AQ), 20 - 45 μm, 100 Å.
Per più infurmazione nantu à e specificazioni dettagliate di a macchina SepaBean™, o l'infurmazioni di ordine nantu à i cartucce flash di a serie SepaFlash, visitate u nostru situ web.
Tempu di pubblicazione: 12-10-2018